大鼠皮肤的冷冻干燥保存

背景：细胞干燥保存的研究报道较多,组织器官是否适用于干燥保存,尚缺乏证据。 目的：用海藻糖作为干燥保护剂,优化海藻糖载入大鼠皮肤的条件,探索皮肤干燥保存的可行性。 设计、时间及地点：观察性实验,于2007-11/2008-11在西北大学生命科学学院组织工程实验室完成。 材料：体质量150 g左右成年SD大鼠。海藻糖由Sigma公司提供。 方法：通过控制海藻糖浓度(50,300,500,800,1 000 mmol/L)、负载时间(0.5,4,7,9 h)和温度[4 ℃、4~37 ℃(相转变)和37 ℃],优化海藻糖导入大鼠皮肤的条件。将负载海藻糖的皮肤置于含100 g/L二甲基亚砜的DMEM冷冻液中孵育,程序冷冻仪以1 ℃/min的速率降温至-80 ℃后移入冷冻干燥机中进行冻干。将冻干皮肤水化复苏后分别用双醋酸羧基荧光素(CFDA)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测皮肤活性,并以新鲜和甲醛固定皮肤的吸光度值作为阳性和阴性对照。以苏木精-伊红染色和观察皮肤组织结构,并进行自体移植。 主要观察指标：海藻糖在不同加载浓度、孵育温度和时间载入大鼠皮肤的情况。冻干皮肤水化后的形态学、组织学变化及其自体移植后存活情况。 结果：海藻糖浓度小于800 mmol/L,皮肤的海藻糖载入量随海藻糖浓度的升高而明显增(P < 0.05),浓度大于800 mmol/L,海藻糖载入量差异不显著。孵育温度为37 ℃组和相转变组皮肤海藻糖载入量明显高于4 ℃组(P < 0.05),相转变组与37 ℃组差异无统计学意义。皮肤孵育4,7,9 h的海藻糖载入量明显高于孵育0.5 h的载入量(P < 0.05),孵育时间为4,7,9 h之间的海藻糖载入量差异不显著,但孵育7 h后皮肤的海藻糖载入量不再增加。实验以海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为7 h为优化的负载条件处理大鼠皮肤。冻干皮肤玻璃化状态良好,呈半透明状。水化后能够恢复到新鲜皮肤的大小和色泽,组织结构和细胞形态与新鲜皮肤组织无差别。冷冻干燥皮肤的活性明显高于甲醛固定的大鼠皮肤 (P < 0.05)。冻干保存的皮肤水化后移植回自体大鼠,可存活长达13 d。 结论：海藻糖可作为干燥保护剂进行大鼠皮肤冷冻干燥保存,海藻糖浓度为800 mmol/L,孵育温度为37 ℃,孵育时间为 7 h是海藻糖载入大鼠皮肤的最佳条件。     

前列腺酸性磷酸酶(PAP)单克隆抗体制备及临床应用

我国前列腺癌的发病率逐年增高,居泌尿生殖系肿瘤的首位,所以对于前列腺癌的早期诊断及治疗应引起重视。应用抗前列腺酸性磷酸酶单克隆抗体(PAP-McAb)免疫化学法测定血清中PAP对前列腺早期诊断有较大价值,本法特异性强,敏感度高,方法简便可靠,回收率为95％,组内和组间变异系数分别为     

人高迁移率族蛋白1诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α的分泌规律

目的：探讨人高迁移率族蛋白1(HMGBl)诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌规律及其在脓毒症中的作用。方法：HMGB1的剂量效应组分别用含有0、0．1mg／L、1．0mg／L、10mg／L、20mg／L、50mg／L HMGB1的培养液与人脐静脉内皮细胞株ECV-304共培养10h，分别收取HMGB1刺激孔及对照孔细胞和培养液上清，用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量，采用流式细胞技术观察HMGB1诱导血管内皮细胞的凋亡情况。人HMGB1的时间效应组以含有20mg／L HMG1的培养液、阳性对照组以含有100mg／L脂多糖(LPS)的培养液、阴性对照组以不含HMGBl的培养液分别培养EVC-304细胞0、2、4、6、8、10、12和24h，同上留取离心后的培养液上清用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。结果：将HMGB1加入到血管内皮细胞培养液中能明显刺激其TNF-α的分泌。在0．1～50mg／L范围内，HMGB1诱导EVC-304的TNF-α分泌增加，呈明显的剂量依赖性关系；HMGB1组EVC-304的TNF-α分泌在0～24h间呈时间依赖性关系；50mg／L HMGB1能明显诱导EVC-304细胞凋亡。结论：人HMGB1能诱导血管内皮细胞TNF-α的分泌与凋亡，证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥作用。     

不同保存温度对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞稳定性的影响

目的探讨不同条件下保存的血液对外周造血干细胞检测的影响。方法以SE-9000型血液分析仪检测不同温度、不同时间保存的血液外周造血干细胞的数量和百分率。结果4°C条件下保存12 h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;20°C条件下保存8 h内造血干细胞的数量和百分率结果无明显变化;而30°C条件下保存6 h内造血干细胞的数量和百分率无明显变化。结论血液样本在4~30°C条件下保存6 h对SE-9000型血液分析仪检测外周造血干细胞无影响。     

血清胃蛋白酶原、促胃液素对胃癌的诊断价值

目的研究血清胃蛋白酶原Ⅰ(PG I)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)及促胃液素(GS)与胃癌发生的关系,探讨检验血清PGⅠ,PGⅡ,GS对胃癌的诊断价值。方法采用免疫放射分析法(IRMA)和放射免疫分析法(R IMA)检测36例胃癌患者、23例胃良性病、11例萎缩性胃炎和34例正常人血清蛋白酶原、促胃液素水平并进行比较。结果胃癌患者血清PGⅠ,PGⅡ的水平显著低于胃良性病和正常人组(P<0.05),而血清GS水平显著高于胃良性病和正常人组(P<0.05),其中不同分化程度间差异不明显(P>0.05),术后血清PGⅠ,PGⅡ,GS水平显著低于术前水平(P<0.05),复发组的水平显著高于术后未复发组(P<0.05)。结论检测血清PGⅠ,PGⅡ,GS对胃癌的诊断及区别胃良性病具有较高的临床价值。     

临床常用蛇毒类凝血酶制剂对凝血指标的影响

目的观察临床常用蛇毒类凝血酶(SVTLE)制剂对凝血指标的影响,为临床判断可能发生的出血风险作出提示。方法选取2017年1—10月空军军医大学附属西京医院泌尿外科患者102例(泌尿外科组)和耳鼻咽喉头颈外科患者80例(耳鼻喉科组)。泌尿外科组患者均为泌尿系统相关疾病术后使用注射用白眉蛇毒血凝酶止血的患者,耳鼻喉科组均为突发性耳聋使用巴曲酶注射液改善微循环的患者。比较泌尿外科组与耳鼻喉科组治疗前后凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(DD)、纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物(FDP)的变化。结果泌尿外科组注射用白眉蛇毒血凝酶治疗后Fib水平较治疗前降低,FDP水平较治疗前升高(P0.05)。耳鼻喉科组巴曲酶注射液治疗后Fib水平较治疗前降低,FDP水平较治疗前升高(P0.05)。结论 SVTLE制剂可对Fib与FDP水平产生影响,应及时检测用药患者的凝血指标,观察其变化,避免因低纤维蛋白血症引起的出血。     

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率，CD4^＋与CD8^＋细胞百分率，CD4^＋／CD8^＋比值及CD19^＋和CD19^＋CD23^＋的表达水平，以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1，Th2的细胞百分率（13．15%&#177;6．23%及4．57％&#177;3．10％）均显著高于对照组（7．14％&#177;5．09％及2．03％&#177;0．95％），患儿组CD4^＋细胞百分率亦较对照组为高（P〈0．05）；CD8^＋，CD4^＋／CD8^＋比值均与正常对照组之间无统计学差异（P〉0．05），CD19^＋与CD19^＋CD23^＋的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群，表现为Th1扫Th2细胞百分率均增加，Th1和Th2细胞免疫反应增强，而B淋巴细胞状况无明显改变。     

硝普钠对人精子获能及顶体反应的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)对人精子获能及顶体反应(AR)的影响。方法:在48例健康生育男性的精子悬液中加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP),于37℃孵育1h获能,用孕酮诱导AR15、30、45、60min,采用磷酸苯二钠法分别检测精子获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中酸性磷酸酶(ACP),同时用计算机辅助精液分析系统(CASA)分析精子运动参数,观察NO对精子获能及AR的作用。结果:NO浓度在50、100nmol/L时精子悬液中ACP活性增高,精子运动参数明显增强,150、200nmol/L时ACP活性及精子运动参数变化不大,250、300nmol/L时精子悬液中ACP活性和精子运动参数明显降低。结论:NO对精子获能和AR具有双重性,在低浓度下有促进精子获能、AR和精子运动参数增强的作用,而在高浓度下对精子获能、AR和精子运动参数有抑制作用。精子ACP检测对精子群体获能和AR状态的评价是种较为客观、可靠的方法。     

RNA干扰技术简介

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double—stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被((Science))杂志评为2001年的十大科学进展之。一，并名列2002年十人科学进展之首。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。