使用hTERT启动子实现肿瘤特异性RNA干扰

目的：修饰hTERT核心启动子，构建shRNA表达载体，实现肿瘤特异性RNA干扰。方法：使用人工TATA盒修饰hTERT核心启动子，重建转录起点。将含有修饰后hTERT启动子的MluI／XhoI片段克隆至pGL3-OCP—shLuc的相应酶切位点，获得pGL3-mhTERT—shLuc。设计针对p53的shRNA编码序列，并以XhoI／XbaI克隆至pGL3-mhTERT-shLuc的相应酶切位点之间，获得pGL3-mhTERT—shp53。使用pGL3-mhTERT—shLuc与pGL3-control共转染人骨肉瘤细胞U20S、MG-63和HOS，48h后测定虫荧光素酶活性，计算相对活性。使用pGL3-mhTERT—shp53不同的人骨肉瘤细胞，利用Western Blot分析转染前后p53的表达水平。结果：双酶切鉴定和DNA测序证实pGL3-mhTERT—shLuc和pGL3-mhTERT-shp53的序列与设计完全一致。pGL3-mhTERT—shLuc与pGL3-control共转染实验发现，在hTERT—U20S细胞虫荧光素酶相对活性与对照组相比没有明显差异，而在hTERT 的MG-63和HOS细胞在转染后虫荧光素酶相对活性显著降低，与对照组相比抑制效率可分别达到69．7％和71．0％。Western Blot分析表明，与转染pGL3-mhTERT相比，使用pGL3-mhTERT—shP53转染MG-63和HOS后可显著抑制p53的表达，而U20S的p53的表达水平与对照组没有明显改变。结论：我们成功使用TATA盒对hTERT核心启动子进行了修饰，利用其构建了shRNA表达载体，并实现了肿瘤特异性RNAi，为进一步提高基于RNAi技术的基因治疗方法的安全性奠定了实验基础。     

解脲支原体感染的精液中IL-6与生殖细胞凋亡的关系

目的:探讨解脲支原体(Mu)感染的精液中白细胞介素-6(IL-6)与生殖细胞凋亡的关系。方法:采用PCR检测精液中Mu。ELISA法检测IL-6,用瑞-姬染色和TUNEL检测凋亡的生殖细胞。结果:Mu感染组凋亡的生殖细胞体积缩小、核固缩、染色质密度增加,聚集在核膜周边呈半月形,进而形成凋亡小体,胞质有空泡。凋亡率为(16.5±4.6)%,明显高于正常对照组(4.8±1.8)%(P<0.01)。IL-6水平与生殖细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.98)。结论:Mu感染能刺激睾丸生殖细胞产生IL-6而启动生殖细胞的凋亡,这对Mu感染引起男性不育的机制提供了客观的依据。     

一氧化氮对人精子获能及顶体反应的影响

目的：探讨一氧化氮(nitric oxide，NO)对人精子获能及顶体反应(acrosome reaction，AR)的影响。方法：在48例健康生育男性的精子悬液中加入不同浓度的NO供体硝普钠(SNP)，于37℃孵育1h获能，用孕酮诱导AR15、30、45、60min，采用磷酸苯二钠法分别检测精子获能前后及AR各时间点的精子悬液上清中酸性磷酸酶(ACP)，同时用CASA分析精子运动参数，观察NO对精子获能及AR的作用。结果：NO浓度在50～100nmol／L时精子悬液中ACP活性增高，精子运动参数明显增强、150～200nmol／L时ACP活性及精子运动参数变化不大、2．50～300nmol／L时精子悬液中ACP活性和精子运动参数明显降低。结论：NO对精子获能和AR具有双重性，在低浓度下有促进精子获能、AR和精子运动参数增强，而在高浓度下有抑制作用，这对精子受精能力的研究有一定的价值。精子ACP检测对精子群体获能和AR状态的评价是种较为客观可靠的方法。     

Construction and expression of the single-chain Fv gene specific for humanγ-seminoprotein

Y-seminoproteinisanantigenspecificforprostatecancer[1].PreliminarydatafromaphaseItrialinwhichprostatecancerpatientshavere-ceivedl31I-labledanti-humanY-seminoproteinmon-oclonalantibody(McAb)indicatethatthelabeledantibodylocalizedwelltotumor[2].ButtheMcAbisrodent.MurineMcAbsforhumancancerthera-pyarelimited,especiallywhentheyarerepeatedlyadministeredinthattheyusuallyelicitanimmuneresponseinbodyasforimmungenicitytohuman.Asinglechainvariablefragment(ScFv)moleculeisdefinedasarecombinantproteinc…     

重症监护病房分离金黄色葡萄球菌的分子流行特征

目的了解某三甲医院重症监护病房(ICU)患者分离金黄色葡萄球菌的分子流行特点及其同源性,为有效控制医院感染的发生提供实验室依据。方法收集该院2013年3—8月ICU患者各类感染标本分离的62株金黄色葡萄球菌,采用PCR方法扩增7个管家基因并进行测序分析,采用多位点序列分型(MLST)技术获得菌株ST分型,对ST分型进行亲缘关系分析。结果 62株金黄色葡萄球菌均可以扩增出7个管家基因的特异性产物;共分为10个ST基因型,其中2个基因型为新发现的ST型(STn1和STn2),1个为国内新发现的ST型(ST675)。ST239是ICU患者分离的金黄色葡萄球菌主要ST型别,占74.20%,分布于6个ICU,分布范围最广;其次为ST5,分布于3个ICU。62株菌株在系统进化树上形成7个主要分支,检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)55株,占88.71%。结论医院ICU分离的金黄色葡萄球菌具有一定的同源性,并且少数型别表现出集中分布趋势。     

恶性骨肿瘤20例治疗体会

1997年8月～2005年4月，我们共收治恶性骨肿瘤患者20例，现介绍治疗体会。     

尿液内毒素定量测定快速诊断革兰阴性菌尿路感染的研究

泌尿系感染是常见的感染性疾病，约占感染性疾病的20％～30％。近年来由于各种介入性诊断治疗手段、广谱抗生素的广泛使用造成的耐药菌株增加和免疫抑制剂应用致使机体抵抗力下降，导致尿路感染有逐年增加的趋势。而临床常规细菌培养所需时间较长，且易受一些不确定因素的影响，有可能延误治疗。本试验以鲎试验的动态浊度法来检测尿液内毒素含量，并与尿液细菌培养相比较，分析两种方法的一致性，了解尿液内毒素定量测定是否可以对单纯或伴有革兰阴性菌的尿路感染做出早期诊断，从而指导临床早期对症治疗，以利于患者的康复。     

心肌损伤标志物联合检测在急性心肌梗死早期诊断中的应用价值

目的探讨心肌损伤标志物心肌钙蛋白-I(cTnI)、肌红蛋白(MYO)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、脑钠肽前体(proBNP)和心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)联合检测对心肌梗死(AMI)的早期诊断意义。方法选择2015年7月至2016年6月,因急性胸痛发作6h内入院的患者186例,其中AMI确诊患者100例(AMI组),非AMI患者86例(非AMI组)。同期体检健康者60例纳入对照组。比较各组患者各指标单独及联合检测的阳性率,以及各指标对AMI的诊断灵敏度及特异度。结果与对照组相比,AMI组与非AMI组proBNP、H-FABP、cTnI、MYO、CK-MB水平均明显升高(P0.05)。AMI组各指标在单独检测阳性率高于非AMI组和对照组,且5项指标联合检测的阳性率高于单项指标检测(P0.05)。5项指标中,H-FABP诊断AMI的灵敏度最高,cTnI特异度最高;5项指标联合检测的诊断灵敏度和特异度均高于各指标单项检测(P0.05)。结论 proBNP、H-FABP、cTnI、MYO、CK-MB联合检测对AMI的早期诊断灵敏度和特异度较高,但各指标各有优势,应根据实际情况选择合适的指标进行联合检测。     

东方蝾螈肢体异位再生的研究

背景:蝾螈具有很强的肢体再生能力,研究蝾螈肢体再生对于实现患者肢体再生有着重要的指导作用.目的:验证东方蝾螈的肢体再生能力,并通过诱导东方蝾螈异位肢体生成,建立东方蝾螈为模式动物的再生医学研究技术平台.设计、时间及地点:观察性实验,于2008-07/2009-01在西北大学教育部西部资源与现代生物技术重点实验室完成.材料:东方蝾螈,购买于西安宠物市场.方法:①将成体东方蝾螈右前肢上臂处切断,连续10周观察记录其断肢再生情况,并分别取材进行组织学观察.②通过东方蝾螈前肢运动神经异位转移和对侧皮肤移植,观察肢体异位再生情况.主要观察指标:①观察东方蝾螈肢体再生能力和组织学过程.②观察东方蝾螈的异位肢体诱导情况,并进行组织学观察.结果:①东方蝾螈断肢后10周左右肢体成功再生.肢体再生过程中,肢芽中出现大量皮肤成纤维细胞.②通过神经异位转移和对侧皮肤移植,可以诱导出肢芽.约13周可以成功在异位诱导出新的肢体.结论:①东方蝾螈具有完全肢体再生能力,皮肤成纤维细胞是参与肢体再生的重要细胞来源.②神经异位转移和对侧皮肤移植可以在异位诱导出新的肢体.