血清葡萄糖氧化酶法新色原物的实验研究

目的以N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(HDAOS)为新色原物,建立新的葡萄糖氧化酶(GOD)法检测血清葡萄糖。方法用HDAOS代替4-氯酚生成蓝色醌亚胺,测定波长为600 nm。采用本法、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林-酚(GOD-PAP)法及高效液相色谱(HPLC)法同时测定脂血、溶血、黄疸及外观正常的血清各24份并比较结果,同时对本法进行方法学评价。结果在测定外观正常血清时,3种方法之间差异均无统计学意义(P>0.05);在测定脂血、溶血、黄疸血清时,本法葡萄糖测定结果与GOD-PAP法比较,差异有统计学意义(P<0.05);与HPLC法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。本法批内、批间变异系数(CV)均<3.0%;与HPLC法呈良好相关性(r2=0.995 8);在5 min内均可达到反应终点;线性范围为0.20～28.00 mmol/L;血红蛋白<2.0 g/L、乳糜<2.2%、总胆红素<200μmol/L对本法的干扰误差<3%;参考范围为4.10～6.20 mmol/L(男)、4.04～6.15 mmol/L(女);最大吸收波长为595 nm。结论以HDAOS代替4-氯酚生成蓝色醌亚胺,能通过降低脂血、溶血、黄疸光谱吸收的方法消除脂血、溶血和黄疸的干扰,提高GOD法测定葡萄糖的准确性,其使用方法与原有GOD终点法相同。     

血清肌酐二步酶法检测新技术研究

目的探讨二步酶法测定肌酐的实验方法。方法以肌酐酰氨基水解酶为试剂Ⅱ,以N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐(HDAOS)和4-氨基安替比林(4-AAP)色原物作为试剂Ⅰ,建立二步酶法测定血清肌酐。通过内空白法消除内源性肌酸和改变光谱吸收方法消除脂血、溶血、黄疸干扰。采用二步酶法测定36例患者血清肌酐,并与高效液相色谱(HPLC)法和一步酶法比较;同时测定200名健康体检者血清肌酐,以建立参考范围。结果患者组肌酐二步酶法结果[(84.2±26.6)μmol/L]明显低于一步酶法[(116.6±29.6)μmol/L,t=32.12,P<0.01];与HPLC法测定结果[(83.9±26.8)μmol/L]差异无统计学意义(t=0.541 6,P>0.05),且呈良好相关性(Y二步酶法=1.042XHPLC法-0.182 1,r2=0.982 4)。二步酶法测定血清肌酐的线性范围达4 500μmol/L,平均回收率为100.8%,批内和批间变异系数(CV)分别为2.91%～4.20%和3.20%～4.60%,应用二步酶法每天测定室内质控定值血清[低(78.0μmol/L)、中(206.0μmol/L)、高(900.0μmol/L)],共测定180 d,其日间总CV分别为4.46%、5.27%、7.24%。二步酶法试剂至少能稳定180 d。健康人群血清肌酐的参考范围男性为56～132μmol/L,女性为41～109μmol/L。结论以肌酐酰氨基水解酶为试剂Ⅱ和以HDAOS、4-AAP为色原物(试剂Ⅰ)的二步酶法可以消除肌酸和脂血、溶血、黄疸血的干扰,可用于临床肌酐常规测定。     

HK和GOD法检测口服葡萄糖耐量试验结果的差异研究

目的探讨己糖激酶(HK)法和葡萄糖氧化酶(GOD)法测定糖尿病患者口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检验结果的差异及原因。方法将进行OGTT的患者分为3组,A组:将75 g葡萄糖溶于300 mL温开水中,令受检者一次服下;B组:口服150 mL 0.5 g/mL葡萄糖注射液,令受检者一次服下;C组:将75 g葡萄糖溶于300 mL温开水中,放置过夜,令受检者一次服下。3组分别于空腹及服后30、60、120、180 min采血分离血清,用HK和GOD法分别测定各时段血糖;比较2种方法血糖测定结果的差异。结果 B组和C组各时段血糖结果HK法和GOD法之间差异无统计学意义(P>0.05);A组空腹血糖2种方法测定结果差异无统计学意义(P>0.05),而在30、60、120、180 min时2种方法存在明显差异(P<0.05)。结论 GOD法对β-D型葡萄糖高度特异,实验室如采用GOD法测定OGTT时,应注意α型葡萄糖影响造成的OGTT曲线偏低的现象。     

应用免疫透射比浊法测定免疫球蛋白方法学的建立

一 为建立免疫球蛋白及补体血清浓度的免疫透射检测方法。利用伊利康生物技术有限公司特种蛋白试剂在Olympus Au560上建立分析方法。此方法平均收回率为98.2％,批内变异系数≤3.0％,批间<5.0％,用卫生部临检中心提供的质控血清做比较,所有结果均符合此标准。免疫比浊测定具有灵敏、准确、稳定、特异、干扰少的特点,可以做为免疫球蛋白血清浓度的非放射性常规方法。     

癌胚抗原化学发光免疫分析方法学研究

目的研制化学发光免疫分析法（CLIA）癌胚抗原（CEA）检测试剂盒。方法采用双抗体夹心法用2种不同的单克隆抗体分别与CEA分子上不同的抗原决定簇发生反应。用1株单抗包被微孔板制成固相抗体,用另1株单抗标记碱性磷酸酶（ALP）制成酶标抗体。在包被微孔中加入CEA校准品或待测血清及酶标抗体,温育后即形成固相抗体-抗原-酶标抗体的复合物,充分洗涤后加入化学发光底物液,于30～90min内测定其发光强度（RLU）,根据标准曲线即可算出标本中CEA的含量。结果该试剂盒其敏感性可达0．058ng／mL;批内和批间变异系数（CV）分别为5．5％～9．3％和10．2％-12．2％。经实验表明,CLIA与免疫放射分析法（IRMA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别呈高度相关,相关系数（r）分别为0．991、0．984;平均回收率为97．3％。结论新研制的CEACLIA试剂盒各项技术指标均达到了国外同类产品水平。     

生化自动分析仪的参数设置与质量保证

实验室开展的每项化验项目都有其操作规程，有的简写成操作卡放在实验台上，便于随时查看。操作规程和操作卡的建立则体现在实现全自动生化分析的实验室根据试剂盒说明书和仪器的性能原理而设置的实验参数中。全自动生化分析仪的实验参数大多可分为三个方面：①通用参数，又称鉴别参数，包括项目编号、实验名称、计算实验、双项同测实验选择、实验项目组合等。②具体的实验参数，有的称为化学参数，包括的项目有：样品体积分数、波长的选择、方法的类型、反应方向、反应温度、信号的拾取时间、试剂空白核对、样品空白、反应线核对等。     

己糖激酶法测定急性心肌梗死患者葡萄糖的样品体积分数研究

样品体积分数是生化分析仪参数设置和质量保证的重要环节,所谓样品体积分数（SVF）是样品体积（SV）与反应液总体积（TV）之比值,即SVF=SV／TV。它涉及到反应系统中所用的样品体积、样品稀释液体积、试剂体积、试剂稀释液的体积的选择和配比,关系到反应液中样品稀释倍数。本文研究的目的在于探讨样品体积分数对己糖激酶法测定急性心肌梗死（AMI）患者葡萄糖结果的影响。     

宫腔分泌物SIgA抗体在免疫性不孕不育患者临床应用

目的建立不孕不育患者宫腔分泌物SIgA抗体ELISA检测方法,以评估不孕不育患者SIgA抗体和血清抗生殖抗体发生率。方法用ELISA方法检测不孕史两年以上妇女997例,其中原发性不孕512例,继发性不育485例,进行血清抗生殖抗体检测,同时取其宫腔分泌物用N-乙酰-L-半胱氨酸溶解后,进行分泌型IgA抗体检测,比较血清型和分泌型IgA抗体阳性率的差异。结果通过ELISA法检测,继发性不孕组AEMAb、ACPAb、ATAb、AHCGAb血清IgG、IgM阳性率均高于原发性不孕组(P0.05);原发性不孕组AOVAb血清IgG阳性率高于继发性不孕组(P0.05);ASAb和AZPAb血清IgG、IgM阳性率两组差异无统计学意义(P0.05);AEMAb、ACPAb、ASAb血清IgA抗体两组阳性率差异无统计学意义(P0.05),而分泌物SIgA抗体阳性率显著高于血清型IgA抗体(P0.01)。结论血清AEMAb、AHCGAb、ATAb、ACPAb IgG、IgM是引起继发性不孕症的主要抗体;AOVAb是引起原发性不孕症的主要抗体;AEMAb、ACPAb、ASAb SIgA抗体阳性率均显著高于血清型IgA抗体,宫腔分泌物SIgA抗体是造成免疫性不孕不育的主要局部抗体,可以为不孕不育的诊断、治疗提供依据。     

己糖激酶法测定葡萄糖反应时间设置的实验研究

目的探讨不同反应时间设置对己糖激酶法（HK）测定不同心肌酶活性血清葡萄糖结果的影响。方法分别采用不同反应时间设置HK法测定急性心肌梗死（AMI）、恶性贫血、肝转移癌患者血清葡萄糖,与正常对照组进行比较,并进行统计学分析。结果在心肌酶升高组中,不同反应时间设置对HK法测定葡萄糖各组内差异有统计学意义（P〈0．05）,在正常对照组中,不同反应时间设置HK法各组内差异无统计学意义（t=0．01,P〉0．05）。结论在心肌酶升高组,不同反应时间设置测定的结果组内存在显著性差异,随着反应时间的延长,准确度和精密度随之下降;在正常对照组组内无显著性差异,随着反应时间的延长,准确度下降不显著,精密度随之上升。