海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响

目的 :研究海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P4 5 0 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响。方法 :于实验d 1一次性皮下注射小剂量四氯化碳并长期喂食高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型 ,7周后 ,开始分别口服灌胃 (ig)给予模型组等体积橄榄油 ,阳性药辛伐他汀 4mg·kg-1,海狗油各组ig海狗油0 .5、1.6和 4 .8g·kg-1,每天 1次 ,连续 8周。观察肝组织病理形态的变化和肝细胞色素P4 5 0 2E1的表达 ;测定血清和肝内丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)以及游离脂肪酸 (FFA)含量的变化。结果 :与脂肪肝模型组比较 ,海狗油不同给药组病理切片苏丹Ⅲ染色和HE染色显示肝细胞的脂变程度明显减轻 ,脂滴减少 ,免疫组化证明肝细胞色素P4 5 0 2E1表达受到不同程度的抑制 ,同时血清及肝内MDA、FFA显著降低 ,SOD活性升高。在模型组和各给药组不同的肝组织内 ,CYP2E1的表达强度及分布的方式存在着差异。结论 :海狗油能显著抑制大鼠脂肪肝CYP2E1的表达 ,减轻脂质过氧化反应。动物个体间存在CYP2E1多态性     

第六次肝素国际标准品协作标定

 目的 建立第六次肝素国际标准品。方法 中国药品生物制品检定所以第五次肝素国际标准品（97/578）为标准品,对6个待标品（编号为：T、W、V、X、Y、Z）进行测定,共使用了5种实验方法估计待标品的效价,它们分别是：生色底物法测定抗FXa效价、生色底物法测定抗FIIa效价、《中国药典》2010年版兔全血法测定抗凝效价、《欧洲药典》6.0版羊血浆活化部分凝血酶时间法（activated partial thromboplastin time,APTT）测定抗凝效价、《美国药典》XXXII版羊血浆法测定抗凝效价。结果 我所的实验数据全部被采纳,用于第六次肝素国际标准品的效价计算。结论 英国国家生物制品检定所对全球36个实验室提交的数据进行综合分析,待标品W（07/328）的实验室内及实验室间的误差都是最小的,因此被推荐作为第六次肝素国际标准品使用,效价为2 145 IU·安瓿-1。     

聚乙二醇化重组人生长激素长效作用及在体生物活性研究

目的:观察聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-GH)在去脑垂体大鼠体内的(in vivo)促进生长的生物活性功能和长效药理作用.方法:以摘除脑垂体的大白鼠为动物模型,PEG-GH d 1一次给药;rhGH(国家标准品)作为阳性对照,每天给药一次,连续6 d,使总剂量与PEG-GH一致.同时设模型组(去脑垂体大鼠),只给予 0.1%牛血清白蛋白的生理盐水,d 7 处死大鼠,检测指标为:体重增加、尾长增长、胫骨骨骺板宽度和肝脏重量.结果:实验结果显示,与模型组比,PEG-GH一次给药各剂量组体重显著增加(P＜0.01),尾长也显著增长(P＜0.01),胫骨骨骺板宽度显著增宽(P＜0.01),中、高剂量组肝脏重量增加(P＜0.01),并都具有量效关系;其促进动物生长的生物活性与每天给药的rhGH比没有差别(P>0.05),具有长效的作用,其中 4.3、8.6 IU·kg-1所至生物活性大于多次给药的普通rhGH 8.6 IU·kg-1效果;本批供试品测得生物效价为 5.0 IU·mg-1,比普通rhGH高1倍.结论:本批供试品PEG-GH用药次数少、药效持续时间长,比普通rhGH具有更高的促进动物机体生长的生物活性.     

基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究

目的:利用转基因细胞法建立重组人促卵泡激素Fc融合蛋白(rhFSH-Fc)生物学活性检测方法。方法:利用CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞,按一定细胞密度种板,培养16～20 h后吸弃培养基,将rhFSH-Fc倍比稀释加入细胞板,药物作用一段时间后加入荧光素酶检测试剂,通过荧光素酶检测系统对rhFSH-Fc进行生物性活性检测,并对各试验条件参数优化及进行方法学验证。结果:rhFSH-Fc在该方法中存在量效关系且符合四参数曲线方程,R~2大于0.99;方法优化后确定细胞种板密度为5×10~5个·mL^-1,rhFSH-Fc稀释起始浓度为750 ng·mL^-1,1∶5倍的稀释倍数,诱导时间为4 h,样品稀释液为DMEM/F12K+10%FBS。该方法具有良好的专属性,9次独立日间、日内精密度检测RSD均小于5%,5个不同稀释组回收率样本经6次测定,相对效价分别为(51±2.00)%、(78±2.05)%、(94±2.23)%、(124±3.46)%、(141±4.45)%;对应回收率平均值分别为(101±3.94)%、(104±3.0...     

重组人生长激素体内生物活性测定中美药典方法对比研究

目的： 对重组人生长激素（rhGH）中国药典与美国药典的体内生物活性测定方法进行试验比较与梳理分析。方法： 按照《中国药典》2015年版四部通则1219和《美国药典》40版通则126的rhGH去垂体大鼠体内生物测定法,分别测定3批rhGH生物活性。结果与结论： 应用二种方法测定3批rhGH原料生物效价的结果相近。通过分析比较两种测定方法的结果及各个环节,可以得出结论,中国药典与美国药典的rhGH体内生物活性测定方法基本相同。     

海狗油对实验性脂肪肝脂代谢和血栓素A2及丙二醛的影响

目的:探讨海狗油抑制脂肪肝的作用机理。方法:小剂量四氯化碳合并高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型7周后,模型组灌胃(ig)给予等体积橄榄油;辛伐他汀组给予辛伐他汀4mg·kg-1·d-1,海狗油低、中、高剂量组ig海狗油0.5、1.6、4.8g·kg-1·d-1,连续8周,正常大鼠作为空白组。测定肝脂、肝内前列环素的代谢产物(6ketoPGF1α)与血栓素A2的代谢产物(TXB2)含量,观察脂质过氧化作用和组织学检查结果。结果:海狗油各组肝细胞内TXB2含量降低,6ketoPGF1αTXB2比值增加,超氧化物歧化酶(SOD)活性升高,甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA)含量显著降低,组织学检查显示肝内脂变减轻,细胞色素P4502E1(CYP2E1)免疫组织化学染色显色指数减小。结论:海狗油使实验性脂肪肝的肝脂和肝内血栓素A2的代谢产物减少,即抑制肝脂合成、促进肝脂代谢(直接作用);使肝内血液粘度减少、血液流动性增加(间接作用),从而对实验性脂肪肝有抑制作用;同时海狗油使MDA含量降低、SOD活性升高而有抗氧化作用。     

海狗油保肝作用的实验研究

目的：观察海狗油对化学毒物所致小鼠、大鼠急性肝损伤及对长期喂食高脂饲料大鼠的影响。方法：实验分为6组(n=10)：即空白组、模型组、阳性药组、海狗油低、中、高剂量组。化学毒物乙硫氨酸或四氯化碳致急性肝损伤实验：小鼠和大鼠各组分别灌胃(ig)给供试药9d或7d；d7ig DL-乙硫氨酸，实验结束时测定肝脂；d6ip四氯化碳，实验结束时测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和组织学检查。长期喂食高脂饲料大鼠实验：于实验d1一次性皮下注射小剂量四氯化碳并长期喂食高脂饲料造成脂肪肝模型大鼠，同时各组分别ig供试药，每天1次，连续10周后，称肝脏重量并计算肝脏系数，测定血脂、肝脂、脂质过氧化指标和组织学检查。结果：对乙硫氨酸致急性肝损伤的小鼠和大鼠ig给予海狗油(小鼠7．2 g·kg~(-1)，大鼠4．8g·kg~(-1))后，与模型组比较甘油三酯(TG)分别降低23％和16％(P＜0．01)；对四氯化碳致急性肝损伤的大鼠，海狗油4．8mg·kg~(-1)组使ALT降低24％(P＜0．01)、AST降低16％(P＜0．01)。长期喂食高脂饲料大鼠，与模型组比较，海狗油4．8mg·kg~(-1)组血清总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、肝重量及肝细胞内TG、TC、FFA和丙二醛(MDA)含量显著降低(P＜0．01)，超氧化物歧化酶(SOD)活性升高(P＜0．01)，组织学检查显示肝细胞内脂变程度减轻，脂滴减少。结论：海狗油对化学毒物所致急性肝损伤的肝细胞有保护作用，对脂肪肝的形成具有明显的预防作用。     

海狗油ω-3多不饱和脂肪酸对大鼠实验性脂肪肝的预防作用

目的:观察海狗油ω-3多不饱和脂肪酸(海狗油)对长期喂食高脂饲料引起的大鼠脂肪肝的预防作用。方法:于实验第1 d一次性皮下注射小剂量四氯化碳并长期喂食高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型,同时各组分别口服灌胃(ig)等体积橄榄油(脂肪肝模型组)、辛伐他汀4 mg·kg-1(阳性药组)、海狗油0.5 g·kg-1,1.6 g·kg-1和4.8g·kg-1,每天1次,连续10周,测定血脂和肝脂,以肝脏的重量、肝脂质含量和肝细胞的脂变程度为主要衡量指标,观察海狗油预防脂肪肝效果。结果:小剂量四氯化碳损伤肝脏合并高脂饲料引起大鼠肝脏脂肪性变,表现为肝重量和肝组织甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA)含量显著增加,SOD活性明显降低。病理组织学检查苏丹Ⅲ染色和HE染色显示肝细胞肿胀,内部充满大小不等的脂滴,而海狗油各组大鼠与模型组相比肝组织TG、TC、NDA和FFA值显著降低,肝细胞的脂变程度减小,脂滴减少,SOD活性逐渐升高并趋于恢复正常,并有量效关系,具有明显的抑制作用。结论:该药物对脂肪肝的形成具有明显的预防作用。     

《中国药典》胰岛素生物测定简化方法及其快速检测的研究

目的:探讨《中国药典》胰岛素生物测定的简化方法及其快速检测。方法:按照胰岛素生物检定方法,但动物数减半、随机设计,并使用血糖仪快速测定小鼠血糖值,考察多批胰岛素生物活性,与原有胰岛素生物检定方法及血糖测定方法对比。结果:简化的胰岛素生物检定方法具有特异性、重复性,可半定量测定胰岛素生物活性。应用血糖仪快速测定小鼠血糖值具有特异性、线性关系,精密度高,重复性好,与全自动生化仪测定结果基本相近,其差异没有显著性(P>0.05),并且高度相关(r=0.994 9,P<0.01)。结论:胰岛素生物测定的简化及快速实验方法是可行的。     

海狗油对实验性大鼠脂肪肝的抗脂质过氧化作用

目的:探讨海狗油对实验性大鼠脂肪肝的抗脂质过氧化作用及抗脂肪肝的作用机制。方法:小剂量四氯化碳合并高脂饲料建立大鼠脂肪肝模型,7周后,模型组ig等体积橄榄油、阳性药组ig辛伐他汀4mg·kg-1·d-1、海狗油低(L)、中(M)、高(H)剂量组分别ig海狗油0.5,1.6,4.8g·kg-1·d-1,连续8周,正常大鼠作为空白组。测定血清和肝脏中的丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肝细胞色素P450 2E1(CYP2E1)免疫组化表达水平及脂肪肝指标即肝TC、TG、肝重、肝脏系数和组织学检查。结果:海狗油各治疗组与模型组相比血清和肝组织的MDA、FFA含量显著降低,SOD活性升高,CYP2E1免疫组化表达减弱。与之相应,大鼠脂肪肝指标肝重减轻,TC、TG减少,组织学检查显示肝细胞脂变程度显著减轻。结论:海狗油可诱导抗氧化酶SOD的活性,清除过多的氧自由基,从而减轻实验性脂肪肝症状,具有抗脂质过氧化作用。