利用简并PCR克隆烟草节杆菌02181肌酸酶基因

目的 用简并PCR从烟草节杆菌02181中扩境出肌酸酶部分序列,以期获得其全长编码基因.方法 从NCBI查询已发表的肌酸酶蛋白序列,将其递交到Bolck Maker服务器,利用工具软件CODEHOP设计简并引物,以烟草节杆菌02181基因组DNA为模板做PCR.结果 将所得目的片段(414 bp)在NCBI上BLASTx,结果表明,所得序列与不同菌种来源的肌酸酶高度同源,其中与节杆菌属肌酸酶基因的同源性最高,一致性达到了71%.结论 从烟草节杆菌02181中成功克隆出了肌酸酶基因的部分序列.     

大鼠动脉粥样硬化病变组织致炎-抗炎因子抗体芯片分析

目的 探讨动脉粥样硬化初始时病变部位细胞因子的变化.方法 腹腔注射酵母多醣诱发炎症叠加卵清蛋白激发免疫反应的方法,在高脂饮食的基础上诱导大鼠动脉粥样硬化.电镜检测主动脉壁泡沫细胞,抗体芯片试剂盒RayBio(R) Rat Cytokine Antibody Array 1.1检测主动脉壁细胞因子.结果 电镜下模型组见单核细胞穿过内膜层迁移至增宽的内皮下间隙并在内膜下聚集,形成血源性的单核细胞泡沫化,即典型的AS病变.抗体芯片显示除Fractalkine、IL-6外所有致炎因子均呈升高趋势,所有抗炎因子均呈微弱降低趋势.结论 炎症免疫刺激是AS发生的诱因之一,众多致炎因子与抗炎因子之间的平衡被打破是导致AS的重要原因.     

CPP-ACP与氟化钠促进脱矿釉质再矿化的显微硬度研究

目的探讨酪蛋白磷酸多肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)与氟化钠(NaF)对脱矿釉质再矿化显微硬度的影响。方法取正畸拔除的离体前磨牙30颗,乳酸凝胶法制备人工早期釉质表层下脱矿后,按随机数字表分为空白对照组、CPP-ACP组、NaF组3组。采用MH-5型显微硬度计测量处理前及处理后牙釉质标本的显微硬度,观察牙釉质显微硬度的变化。结果 CPP-ACP组与NaF组牙釉质表面显微硬度明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),CPP-ACP与NaF组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CPP-ACP在体外实验中能抑制酸性环境中牙釉质脱矿,促进牙釉质再矿化。     

siRNA介导的IBP表达抑制对 T细胞凋亡的影响

目的 研究IBP表达抑制后对T细胞凋亡产生的影响.方法 构建IBP siRNA稳定表达及阴性对照载体,脂质体法转染Jurkat T细胞,G418筛选稳定转染细胞株,用anti-CD3和CD28 mAb刺激介导的TCR信号方式作用于稳定转染细胞后,以3H-TdR掺入实验检测细胞增殖,Annexin-v/PI双参数法经流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TCR信号刺激下,阴性对照组细胞的3H-TdR掺入量在24h时下降为未刺激对照组的67%,随时间延长其下降更显著,且24h发生明显凋亡,凋亡率为21.96%;IBP siRNA表达载体转染细胞在不同时相点的增殖均不受影响,24h凋亡率仅为2.12%,比阴性对照组细胞显著降低.结论 IBP缺失能使TCR信号刺激下的细胞激活后凋亡受到抑制,提示IBP可能参与T细胞免疫自稳状态的调节.     

“抗体工程基础与应用”选修课的教学探索

在学制变革背景下,医学检验教育应转变人才培养理念,加强教育与社会需求的联系,注重创新能力和创新精神的培养。选修课作为学科教学体系的重要组成部分,在大学生教育中起着重要作用。该教研室在3、4年级医学检验专业学生中以专业选修课的形式开设了“抗体工程基础与应用”课程。该门课程在增强学生对抗体工程和体外诊断技术(IVD)行业的认识,培养学生检验技术研发能力和创新能力,完善教学体系和加强学科建设等方面均取得了积极有益的效果。     

nsp7的原核表达、纯化与免疫原性鉴定

目的 获得高纯度和高免疫原性的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒非结构蛋白7(nsp7).方法 nsp7编码DNA片段是PRRS病毒基因组裂解产物,酶切后连接至克隆质粒pET-28a构建为表达质粒pET-28a-nsp7,转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导蛋白表达,采用 Ni2+-NTA树脂纯化、Q阴离子交换层析、镍柱浓缩3个连续的过程进行纯化和用SDS-PAGE、Western blot、ELISA法进行鉴定.在此基础上通过间接ELISA法对135份血清样品进行检测,并与进口LSI-ELISA试剂盒进行比较.结果 SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量约为34×103,与理论值相一致;该蛋白产量高、可溶性好,纯度达95%;Western blot和间接ELISA法鉴定结果显示该重组蛋白能够与PRRS病毒的阳性血清反应,与进口LSI-ELISA试剂盒相比其符合率达91%.结论 成功构建了nsp7蛋白的表达与纯化系统,获得了高纯度和高免疫原性的nsp7蛋白,为PRRS血清学诊断奠定了基础.     

浅谈急性黄疸型病毒性肝炎的护理方法

目的：探究针对急性黄疸型病毒性肝炎患者的护理方法。方法：我院2011年-2013年期间接收60例急性黄疸型病毒性肝炎患者,对他们治疗后,采用饮食、皮肤、药物和情绪等护理方式来进行护理。结果：治疗3个月后,55例患者痊愈,4例患者接受再次治疗,采用同样的护理方式之后痊愈,1例患者因心脏病死亡。结论：护理人员采用药物、饮食、皮肤、情绪护理对急性黄疸型病毒性肝炎患者进行护理,取得了很好的效果,患者的康复速度更快。     

卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3、VEGF的表达及意义

目的检测卵巢上皮性肿瘤中半乳糖凝集素-3(Galectin-3)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,探讨二者在卵巢上皮性肿瘤的发生发展中的作用及相关性。方法采用免疫组化SP法检测良性卵巢上皮性肿瘤组45例,交界性卵巢上皮性肿瘤组50例及恶性卵巢上皮性肿瘤组61例中Galectin-3、VEGF的表达情况。结果恶性卵巢上皮性肿瘤组中Galectin-3、VEGF的阳性表达率为67.2.%和70.5%,明显高于良性组及交界性卵巢上皮性肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。在恶性卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3、VEGF的表达与肿瘤分期、组织分化程度及转移密切相关(P<0.05)。而与肿瘤的类型及肿瘤患者患病年龄状况无关(P>0.05)。Galectin-3与VEGF在恶性卵巢上皮性肿瘤组织中的表达呈正相关(r=0.739,P<0.05)。结论卵巢上皮性肿瘤中Galectin-3及VEGF的表达情况,在一定程度上反映卵巢肿瘤的恶性程度,与肿瘤的分期及预后密切相关,可能成为判断卵巢上皮性肿瘤性质及预后的参考指标。     

Notch信号通路相关分子在牙周膜干细胞中的表达及意义

目的：检测Notch信号通路相关分子在炎性和正常牙周膜干细胞中的表达差异,探讨其在牙周炎牙槽骨缺损中的作用机制。方法：组织块酶消化法培养正常组织及慢性牙周炎组织来源的的牙周膜干细胞（H－PDLSCs,P－PDLSCs）,并经有限稀释法纯化两种细胞,采用免疫荧光法检测干细胞表面标记物CD146及PDLSCs表面蛋白STRO－1的表达,通过免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测Notch信号通路中Notch1受体蛋白、配体Jagged1（JAG1）信号分子的表达变化。结果：两种来源的细胞经纯化后均阳性表达间充质干细胞表面标志物STRO－1、CD146;P－PDLSCs比H－PDLSCs具有更强的增殖能力;免疫荧光染色检测显示,H－PDLSCs和P－PDLSCs均阳性表达Notch1、Jagged1;但P－PDLSCs中Notch1、Jagged1的阳性表达明显较弱;RT－PCR检测发现P－PDLSCs中Notch1、Jagged1mRNA表达量分别为（1．22±0．29）、（1．52±0．38）,较H－PDLSCs明显降低,差异有统计学意义（均P<0．05）。结论：炎症牙周膜干细胞中的炎症微环境可能抑制了Notch信号分子的表达,低水平的Notch信号的激活可能有利于牙周炎缺损牙槽骨的成骨分化。