癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅱ)

1.8 Ad载体分析的进展 在众多Ad载体分析方法中,有二种是最关键的:一是用于测定物理纯度,另一是用于评估有复制能力的Ad(RCA)的污染。因此,在Ad载体制备物中检测E1基因的存在就成了合乎逻辑的策略。Southern blotting和PCR方法也被用于该目的。PCR分析法在设计上包括了病毒序列扩增内对照,使用二对引物来同时扩增AdE1片段和载体主链。该对照的灵敏度可达到在10~9PFU中检测出一个PFU的RCA。检测RCA生物学分析的设计则可在病毒及DNA水平上检测出rAd的复制能力~(17)P~(32)     

重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子下游处理研究（Ⅱ）

目的 在成功构建人粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）高效表达克隆的基础上对其表达产物进行分离纯化，并对rhGM-CSF在溶液中的构象、稳定性、变复性等进行研究。方法 在纯化研究基础上利用傅里叶变换红外光谱技术（FTIR）对rhGM-CSF的构象进行研究，同时应用聚乙二醇（PEG）和牛肝二硫键异构酶（PDI）对GM-CSF的复性及体外折叠作用进行分析。结果 利用FTIR技术可见GM-CSF在D2O溶液中20℃时含35%a-螺旋，32%β-螺旋，11%转角和20%无规卷曲，适当PEG可使蛋白得率和比活性均达到最高，PDI可以提高蛋白质的正确折叠率。结论 采用FTIR研究蛋白质在溶液中的构象耗时短、重复性好、样品大海怛小，对产品的质量控制及批间产品的稳定性具有指导价值。加入适当比例的PEG和PDI可使蛋白得率和比活性明显提高。     

人T淋巴瘤裸小鼠移植瘤株和细胞系的建立及其生物学特性的研究

一淋巴瘤患者腹水中的瘤细胞在裸小鼠皮下移植成瘤并可传代。以此移植瘤株进行体外培养,建立了一个人T淋巴瘤细胞系,命名H—TL_(90)。此细胞系表现不正常的免疫学标记(CD_3~-,CD_7~ ,CD_4~-,CD_8~),变异的染色体,并有产生自泌生长因子和促淋巴细胞增殖因子的征象。鉴于H-TL_(90)具有上述特点,它可以作为深入研究人T淋巴瘤的一个良好实验模型。     

B7—1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的实验研究

目的：研究B7-1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法：通过逆转录病毒载体。将小鼠B7-1基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/B7-1在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转B7-1基因诱导了CD80的高表达,EL-4/B7-1细胞在小鼠中的成瘤性下降,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗。基因修饰的瘤苗作用明显增强,EL-4/B7-1细胞能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,射线灭活的EL-4/B7-1瘤苗作用减弱。结论：B7-1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导体内的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提供了实验依据。     

瘦素与人类外周血单核细胞增殖作用相关性的探讨

目的探讨瘦素(leptin)与人外周血单核细胞(PBMC)增殖作用的相关性。方法分离并培养PBMC,采用[3H]TdR掺入试验方法,观察瘦素对PBMC增殖作用的影响。结果瘦素可以促PBMC增殖,也可协同PHA或ConA对PBMC的刺激增殖作用,并在一定浓度范围内呈现剂量依赖性。结论瘦素可以促进PBMC增殖。     

TREATMENT OF PATIENTS WITH MALIGNANT PLEURAL EFFUSIONS DUE TO ADVANCED LUNG CANCER BY TRANSFER OF AUTOLOGOUS LAK CELLS COMBINED WITH rIL-2 OR rIL-2 ALONE

Experimental study both in vitro and in vivotogether with clinical trials showed that LAKcells have antitumor and antimetastatic effects(1-5)and that these effects are closely related tothe number of LAK cells transferred and the ad-ministration of rIL-2(1,6-8).Usually,autologousPBL's are used as the source of LAK precursorsin the adoptive immunotherapy of cancer patients.But this not only puts an added burden on thecancer patient,it can cause serious side effectsas well(9).Although TIL's may provide a solu-tion to this problem(10,11),their isolation fromsolid tumors is complex and consumes many rea-gents.We have reported that the isolation oflymphocytes from malignant ascites or from ma-lignant pleural effusions is not only simple and     

Effects of hCD80-Adenovirus on B16-F10 Cells

To study the biological characteristics of B16-F10 cells transduced with hCD80 gene in vitro, a kind of replication-deficient recombinant adenovirus bearing hCD80 gene (hCD80-rAd) was constructed and several means were utilized to observe the changes of biological characteristics after gene transduced.     

人IL-2重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究

目的 :研究感染hIL 2重组病毒的人肺腺癌细胞 (Anip973)的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法 :将携带有hIL 2基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2 )感染人肺腺癌细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果 :rAd hIL 2经扩增、纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒量为30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。转染的Anip973肿瘤细胞其生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4小时细胞培养上清IL 2的分泌量为 2 0pg 1ml 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd hIL 2的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论 :腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2转染的Anip973肿瘤细胞体外生物学特性未见明显变化 ,而体内实验则有明显的抗肿瘤作用。     

LAK细胞的抗病毒感染作用

由于缺乏有效的抗病毒治疗措施,病毒性疾病的发生、发展、转归和预后在很大程度上取决于机体免疫功能等自身防病和抗病能力。因此应用免疫学的理论、观点和方法,充分调动和发挥机体的免疫系统功能,成为研究和探     

肿瘤生物治疗新方法的研究

本文简述“九五”攻关项目间“肿瘤生物治疗新方法”且经协作攻关主要完成的研究工作有：重组人TNF、IL－2及B7重组腺病毒表达载体的构建及其包装体系的建立：腺病毒介导的人TNF－α基因转染对人肝癌细胞凋亡和MHC－Ⅰ类分子表达的影响;瘤体内／瘤周注射TNF－α重组腺病毒和（或）IL－2T重组腺病毒对肝癌小鼠的治疗作用及其免疫机理研究。粘附LAK细胞的制备、体外扩增、冻存及复苏;转染B7、IL－2、TNF－α基因重组腺病毒的肿瘤细胞及A－LAK的生物学特性研究;人肝癌组织中MAG基因的表达及MAGE基因修饰树突状细胞体外抗肿瘤作用;转基因瘤苗临床应用安全性的初步性的初步检测,这些研究工作的完成为肿瘤基因治疗的临床应用打下基础。