生长分化因子15对福尔马林诱导双相疼痛的镇痛作用及机制的初步探究

目的：探讨生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF-15)对福尔马林诱导的双相疼痛的镇痛作用及其可能机制。方法：首先采用中枢给药鞘内注射GDF-15(50 ng)进行了福尔马林诱导双相疼痛实验,并设置不同剂量组系统性腹腔注射GDF-15(10、30、100 μg/kg)进行福尔马林诱导双相疼痛实验,记录比较福尔马林诱导双相疼痛阈值;采用蛋白免疫印迹和组织免疫荧光实验检验GDF-15的特异性受体胶质细胞源性神经营养因子家族α样受体(glial cell-line derived neurotrophic fac- tor receptor alpha-like,GFRAL)的表达情况;并采用实时荧光PCR法检测中枢给予GDF-15(50 ng)对福尔马林小鼠脊髓白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、强啡肽原(prodynorphin,PDYN)以及前脑啡肽(pro- enkephalin,PENK)的mRNA表达的影响。结果：中枢给予GDF-15对福尔马林Ⅱ相炎性疼痛有显著镇痛作用,而对Ⅰ相急性疼痛未见显著作用(P＜0.05);系统性给予GDF-15对福尔马林Ⅱ相炎性疼痛有显著镇痛作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性;GDF- 15的特异性受体GFRAL在大脑、小脑和脊髓中表达,在脊髓背角中仅在神经元细胞表达;中枢给予GDF-15可以降低福尔马林小鼠脊髓中促炎因子IL-6(P＜0.05)和TNF-α(P＜0.05)的表达。结论：GDF-15对福尔马林诱导的Ⅱ相炎性疼痛存在镇痛作用,且可能是通过降低促炎因子IL-6和TNF-α的表达发挥作用。     

热缺血时间对小鼠肾脏缺血再灌注损伤后肾功能的影响

目的 探讨热缺血时间对小鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)后肾功能的影响及与肾脏损伤分子1(KIM-1)的关系.方法 选取雄性C57BL/6小鼠36只,异氟烷吸入麻醉下阻断双侧肾蒂血管,建立双侧肾脏IRI模型.根据肾缺血时间将小鼠分为四组,即假手术组(Sham组)、阻断28 min组(28 Min组)、30 min组(30...     

乌苏里藜芦碱抗血栓作用的研究

目的 研究乌苏里藜芦生物碱(VnA)对大鼠的抗血栓作用。方法 分别应用电刺激诱发大鼠颈总动脉血栓形成模型和瘀血诱发下腔静脉血栓形成模型评价VnA的抗动、静脉血栓形成作用。结果 大鼠iv6种不同剂量的VnA(7．2～42．9μg／kg)导致血管阻塞时间(OT)显著延长，且具明显的剂量依赖性，VnA30μg／kg产生的抗动脉血栓形成作用与赖氨匹林18．0mg／kg的作用相当。单次ivVnA30μg／kg使OT呈时间依赖性延长。VnA抗动脉血栓形成作用起效迅速，持续至少80min，iv后15min达效应峰值。iv VnA(15～45μg／kg)显著减少下腔静脉血栓干质量，并呈剂量依赖性。结论 VnA具有强大的抗动、静脉血栓形成作用，并具明显的剂量依赖性守时间依赖性。其抗血栓效能高，作用强度大，在大鼠的有效剂量低至μg／kg水平。VnA抗血栓活性的发现为其研究开发展示了新的前景。     

转染外源性白细胞介素6基因增强乳腺癌细胞株MCF-7表达肿瘤相关抗原

目的 :探索白细胞介素 6 (interleukin 6 ,IL 6 )增强乳腺癌细胞表达乳腺癌抗原 (CA15 3)和癌胚抗原 (CEA)的作用。方法 :将含IL 6蛋白编码顺序1176bpcDNA插入Pci neo哺乳动物表达载体。将重组载体转染MCF 7乳腺癌细胞 ,采用ELASA方法测定细胞培养上清液内IL 6浓度 ,用MEIA(microp articalenzymeimmunoassay)方法测定上清液中肿瘤相关抗原CA15 3、CEA和CA12 5。结果 :含有外源IL 6基因的MCF 7细胞分泌IL 6浓度 (338.5±2 2 .6pg·10 -6细胞 )明显高于父本没有含外源基因的MCF 7细胞 (2 5 .4± 4 .6pg·10 -6细胞 )和仅含空载体Pci neo的MCF 7细胞 (19.6± 3.0pg·10 -6细胞 ) (P<0 .0 1)。细胞培养d 3后 ,带外源IL 6基因的MCF 7细胞培养上清液中CA15 3和CA12 5水平 (分别为 14 .9± 2 .3和 38.8± 5 .1μg·10 -6细胞 )明显高于父本 (分别为 6 .6± 1.5和 10 .0± 1.6 μg·10 -6细胞 )和空载体Pci neo的MCF 7细胞 (分别为 3.4±0 .7和 14 .6± 2 .2 μg·10 -6细胞 ,P <0 .0 5 )。而转染IL 6基因没有明显改变CEA表达 (P >0 .0 5 )。结论 :IL 6具有诱导肿瘤相关抗原的表达和增强肿瘤细胞的免疫原性的作用 ,提示IL 6可能增强机体对肿瘤的免疫反应性。     

基于BDNF 通路探讨樱桃叶水煎液对CUMS 大鼠的抗抑郁作用机制

目的探讨樱桃叶水煎液对慢性不可预知性温和应激（CUMS）模型大鼠的抗抑郁作用及可能机制。 方法将雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为空白组、CUMS 模型组、盐酸氟西汀组（2 mg·kg-1）以及樱桃叶 水煎液低、中、高剂量组（1.8、2.7、3.6 g·kg-1）。复制CUMS 模型,采用强迫游泳实验、悬尾实验和糖水偏好 实验观察大鼠行为学变化;酶联免疫吸附实验（ELISA）测定大鼠血清促肾上腺皮质激素（ACTH）含量;Western Blot 法测定大鼠海马组织中脑源性神经营养因子（BDNF）、酪氨酸激酶受体B（TrkB）、Ras 相关C3 肉毒杆菌毒 素底物1（Rac1）、LIM 激酶1（LIMK1）、丝切蛋白（cofilin）的表达水平。结果①与空白组比较,CUMS 模型组 大鼠强迫游泳实验和悬尾实验的不动时间增加（P＜0.01）,糖水偏好系数下降（P＜0.01）;血清ACTH 水平上调 （P＜0.01）;海马组织BDNF、TrkB、Rac1、LIMK1、cofilin 蛋白表达降低（P＜0.01）。②与CUMS 模型组比 较,樱桃叶水煎液干预后大鼠强迫游泳实验和悬尾实验的不动时间减少（P＜0.05,P＜0.01）,而糖水偏好系数 上升（P＜0.01）;血清ACTH 水平下降（P＜0.01）;海马组织BDNF、TrkB、Rac1、LIMK1、cofilin 蛋白表达增 强（P＜0.05,P＜0.01）。结论樱桃叶水煎液具有一定的抗抑郁作用,其机制可能与调节BDNF/TrkB 及其下游 的Rac1/LIMK1/cofilin 信号通路有关。     

脊髓D-型氨基酸氧化酶通过过氧化氢介导吗啡镇痛耐受

目的研究脊髓星形胶质细胞D-型氨基酸氧化酶(DAAO)/H2O2介导吗啡镇痛耐受的神经生物学作用。方法在全身或脊髓鞘内连续7 d注射吗啡建立吗啡耐受动物模型的同时长期给予或单次给予DAAO抑制剂或沉默脊髓DAAO基因siRNA后,进行5%福尔马林刺激,考察在小鼠或大鼠福尔马林(第Ⅰ相急性疼痛和第II相中枢敏感化疼痛)、热板和甩尾疼痛模型中吗啡镇痛作用耐受性的变化。结果皮下或脊髓联合给予吗啡和一系列结构不同的DAAO抑制剂如CBIO,AS057278和苯甲酸钠,在小鼠/大鼠急性疼痛(热板、甩尾)和福尔马林疼痛模型(第I相急性疼痛和第II相中枢敏感化疼痛)能完全预防吗啡对镇痛的耐受作用,单次剂量可完全逆转已形成的吗啡耐受状态,且DAAO抑制剂预防和逆转吗啡镇痛耐受作用与脊髓DAAO活性抑制成正性相关;脊髓注射siRNA/DAAO完全预防吗啡耐受;吗啡疼痛耐受形成后,脊髓过氧化氢升高15.1%;同时脊髓给予ROS非特异性清除剂PBN亦可完全阻断福尔马林II相疼痛和吗啡镇痛耐受状态。结论脊髓星形胶质细胞DAAO通过生成过氧化氢介导吗啡镇痛耐受性的形成,是阻断吗啡耐受的一个潜在性新靶点分子,为吗啡镇痛耐受揭示一条新的传导通路。本研究结果还表明DAAO至少是脊髓星形胶质细胞介导吗啡镇痛耐受的分子之一,为开发DAAO抑制剂作为新型镇痛药物以及单独使用或与吗啡合用拮抗吗啡耐受提供了药理学基础。     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷调控HOXA10对子宫内膜异位症患者在位内膜容受性的影响

目的:研究甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,AZA)对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜容受性的影响.方法:体外原代培养内异症子宫内膜上皮细胞,AZA作用24 h后,亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite Sequencing)检测HOXA10的甲基化水平的变化;实时定量PCR和Western Blot方法检测HOXA的转录和蛋白水平的变化.结果:AZA作用24h后,子宫内膜上皮细胞HOXA10的甲基化水平下降;同时HOXA10的表达增加.结论:AZA可通过抑制内异症子宫内膜上皮细胞中HOXA10的高甲基化,上调HOXA10的表达,从而促进子宫内膜容受性的建立.     

大鼠星状细胞激活相关蛋白基因的克隆及其重组腺相关病毒载体的构建

克隆大鼠星状细胞激活相关蛋白(Stellate Cell Activation-associated Protein,STAP)基因,构建其重组腺相关病毒载体(rAAV-STAP),为进一步研究STAP基因功能提供有效工具。用RT-PCR法从大鼠肝组织中扩增出大鼠STAP基因,将STAP cDNA插入腺相关病毒(AAV)表达质粒pAM/CAG中,构建重组质粒pAM/CAG-STAP。以磷酸钙共转染法将pAM/CAG-STAP及辅助质粒pAd/H22转染293细胞,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺相关病毒rAAV-STAP。ELISA法测定病毒滴度,Western blot法检测重组病毒感染293细胞后STAP的表达情况。实验结果表明,RT-PCR法从大鼠肝组织中扩增出573bp cDNA,测序证实为大鼠STAP基因。Western blot法证实rAAV-STAP感染293细胞后可在细胞内表达STAP。     

心血管内科急重症护理中的风险防范和评估探究

目的:在心血管内科急重症进行护理的时候,对风险进行防范和评估,这样就可以很好的提高患者的护理质量,从而很大程度降低患者的死亡率.方法:在某医院选择心血管内科患者进行护理,选取100例急重症患者开展临床工作,并且对存在的风险进行分析,针对具体的问题采取相应的预防措施.结果:造成护理风险发生的原因主要是因为人为、医院管理以及患者本身等因素.结论: 对心血管内科急重症护理中存在的风险,要采取相应的预防措施,这样在今后的护理中就能够有效避免风险的出现,也能够大大提高护理质量,从而对患者的治疗效果进行提升,对后期进行防范.     

乌苏里藜芦碱对血小板聚集及凝血与出血时间的影响

目的 研究乌苏里藜芦碱(VnA)对大鼠的抗血小板作用及其对小鼠凝血时间和出血时间的影响。方法 比浊法测定正常大鼠及血瘀模型大鼠血小板聚集百分率，观察VnA抗血小板作用。毛细玻璃管法测定小鼠全血凝血时间(CT)；比较等效抗凝剂量的VnA及肝素对小鼠尾出血时间(BT)的影响。结果 VnA(45、30、15μg／kg，iv)对ADP诱发的大鼠血小板聚集有明显抑制作用，且呈剂量依赖性。VnA(12．5、25、50、100μg／kg，ip)可明显延长小鼠CT和BT，等效抗凝剂量的VnA(49．3μg／kg，ip)所致BT延长略低于肝素(1．25mg／kg，ip)，但无统计学意义。结论 VnA具有显著抗血小板作用，能显著延长CT，对BT的延长作用不超过肝素。