分泌性蛋白SPLUNC1对上呼吸道绿脓杆菌的抑制作用

目的：构建哺乳动物细胞表达的SPLUNC1重组蛋白，通过体外实验验证其杀菌／抑菌功能，并进一步研究其机制是否与SPLUNC1蛋白结合细菌脂多糖有关，从而为其将来临床应用奠定基础。方法：将SPLUNC1克隆入pCMV-tag4A哺乳动物表达载体，稳定转染鼻咽癌HNE1细胞株；收集细胞培养上清液，用其处理从患者上呼吸道分离的绿脓杆菌，比较转染SPLUNC1基因的细胞培养上清与转染空白载体的细胞培养上清对细菌克隆形成率的影响。同时将脂多糖包被96孔板，与SPLUNC1蛋白共同孵育，ELISA法检测SPLUNC1是否与细菌脂多糖结合；利用FITC标记的脂多糖干预转染SPLUNC1基因及空白栽体的细胞，观察细胞内脂多糖与SPLUNC1的结合作用。结果：转染SPLUNC1基因的细胞培养上清能显著抑制绿脓杆菌在LB软琼脂板上形成集落；体外试验表明，SPLUNC1能与细菌脂多糖结合，但结合效率低：HNE1细胞经转染SPLUNC1后，细菌脂多糖摄取明显增加。结论：重组SPLUNC1蛋白能经转染细胞分泌到培养上清液中，具有结合细菌脂多糖，杀灭或抑制上呼吸道绿脓杆菌的功能，从而可能具有重要的临床应用价值。     

用大鼠和小鼠肝微粒体酶系统活化二亚硝基哌嗪以诱发姊妹染色单体交换

本文用小鼠和大鼠旰微粒体酶系统(S-9 mix.)体外活化二亚硝基呱嗪(DNP)以诱发正常人外周血淋巴细胞的 SCE。实验结果表明小鼠 S-9mix。能使 DNP 充分活化;而大鼠 S-9mix。对 DNP 仅有微弱的活化作用。提示小鼠 S-9mix。中存在一类作用较强的活化 DNP 的特殊酶或酶类。     

人细胞染色体上DNase-1敏感区的稳定性观察

对正常人淋巴细胞,人胚鼻咽上皮细胞,人胚肺成纤维细胞,及Burkitt淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma,BL)细胞染色体上的DNase—1敏感区的稳定性进行了观察。结果提示,1)不同组织学类型的细胞及恶性肿瘤细胞染色单体上的DNase—1敏感区是染色体或染色单体断裂的好发部位;2)对恶性瘤细胞染色体上的DNase-1敏感区发生断裂的频率明显高于各种组织学类型的正常细胞。说明表达活跃的基因位点有遗传学上不稳定的表现,而恶性瘤细胞内异常表达的活性基因则可能是影响基因组稳定性的关键事件。     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO－Rb_（44）的建立及其生物学特性的检测

对２２例眼球摘除的视网膜母细胞瘤（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ，Ｒｂ）取材进行体外培养，从中建成一个连续细胞系（ＨＸＯ－Ｒｂ４４），在体外已生存近２１个月，传至１８０代。生物学特性显示其在体外悬浮生长，排列成团状或链状，群体倍增时间为４４小时，细胞形态、免疫组化与原实体瘤相似，染色体为非整倍体，众数为６０条，在双层软琼脂上可形成克隆，具有较强的异体致瘤性。     

人类恶性肿瘤DNA的转化活性

人类恶性肿瘤的病因发病学研究一直是人们十分注重的研究领域。随着DNA重组、DNA介导的基因转移和核酸分子杂交等技术在肿瘤基础理论研究中的应用,新近又发现人类恶性肿瘤细胞中存在一种能使正常细胞转化的癌基因(Onogene),使肿瘤病因发病学研究有了重要突破。这类癌基因广泛地存在于正常细胞内,在亿万年慢长的生物进化过程中变化甚微。同时,这类细胞癌基因(C-onc)与逆     

高频等位基因不平衡位点D6S1581与鼻咽癌的遗传易感性研究

目的探讨鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581及在其附近克隆的鼻咽癌相关基因FBXO30与鼻咽癌发生的关系. 方法应用基因扫描技术,对12个湖南鼻咽癌高发家系、85例散发鼻咽癌患者及181名正常对照D6S1581位点进行了基因分型、参数/非参数连锁分析及关联分析.结果在鼻咽癌家系中D6S1581与鼻咽癌发病连锁,Lods值最高为2.611436 (P=0.00245),关联分析结果也提示家族性鼻咽癌D6S1581等位基因频率与正常对照组差异有显著性(P<0.005).结论 D6S1581与湖南家族性鼻咽癌的发病之间可能有着密切的联系,该基因附近可能存在一个或多个与鼻咽癌发生发展有关的基因,FBXO30基因很可能就是其中之一.     

蛋白质识别基序——富亮氨酸重复序列的结构与功能

富亮氨酸重复序列(Leuc ine-rich repeat,LRR)是一高度保守的氨基酸序列,通常由20~29个氨基酸残基组成,11个氨基酸高度保守。晶体结构分析表明LRR是由一个β片层和一个α螺旋通过loop环连接形成的一个非球形的、马蹄形分子。序列分析显示LRR蛋白超家族至少包含7个不同的亚家族。LRR蛋白的表达定位多种多样,LRR蛋白具有广泛的生物学作用。在这些生物学过程中,LRR结构域主要介导蛋白与蛋白之间的相互作用。     

比较基因组杂交研究鼻咽癌遗传变异

目的 了解鼻咽癌遗传学改变的特征。方法 应用比较基因组杂交检测20例鼻咽癌基因组的不平衡即DNA的丢失或扩增。结果 鼻咽癌常见的扩增的染色体是1q、2、3q、7q、8q、12;常见的缺失的染色体为3p、9p、11q、16q。结论 鼻咽癌细胞中存在多条染色体拷贝数的改变,由此引起相应瘤基因的扩增和抑癌基因的丢失可能参与了鼻咽癌的发生、发展。     

鼻咽癌表达下调基因NASG3''''UTR可变剪接分析及其在多种肿瘤中的表达

背景与目的:采用抑制性消减杂交技术已分离获得了人鼻咽组织特异性基因NASG。本研究对人鼻咽组织特异性表达且在鼻咽癌表达下调的NASG基因3'非编码区(untranslatedregion,UTR)的可变剪接进行分析,并考察NASG基因在多种肿瘤组织中的表达。方法:在NASG基因3'UTR存在可变剪接部位的两端设计引物进行RT-PCR扩增,分离扩增产物并测序。用RT-PCR检测NASG基因在鼻咽癌中的表达,采用了肿瘤表达谱阵列(cancerprofilingarray)杂交分析NASG基因在多种肿瘤组织的表达状况。结果:NASG基因3'UTR存在3种剪接产物,NASG基因在71%的鼻咽癌活检组织中表达下调,25%的肺癌组织中表达上调,而在其他肿瘤及其配对的正常组织未见明显表达。结论:NASG基因3'UTR存在3种剪接产物,NASG基因的表达异常是鼻咽癌和肺癌发生、发展过程中重要的分子事件。     

染色体7q32-ter最小共同缺失区鼻咽癌抑瘤基因候选者的筛选

目的：在明确７ｑ３２－ｔｅｒ区域等位基因杂合性丢失最小共同缺失区位于以Ｄ７Ｓ５０９为中心的Ｄ７Ｓ５００－Ｄ７Ｓ５０９－Ｄ７Ｓ４９５的基础上，筛选和克隆位于该区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因。方法：应用定位－候选克隆策略筛选位于该最小共同缺失区的３’末端ＥＳＴｓ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｕｑｕｅｎｃｅ ｔａｇｅ，ＥＳＴｓ），ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达下调的ＥＳＴｓ