胚胎不同器官的细胞连接蛋白基因表达研究

目的 探索胚胎不同分化阶段、不同器官中细胞连接蛋白基因的表达规律及其与细胞分化的关系。方法 采用Ｃｏｎｎｅｘｉｎ系列基因探针,通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法,对不同胎龄的不同胚胎器官中Ｃｘ基因表达状态进行了研究。结果 （１）胚肿期肝、胃、肺、肾等器官中Ｃｘ３１、Ｃｘ４６、Ｃｘ３１．１不表达。（２）胚胎不同发育阶段连接蛋白基因呈不同表达状态。如Ｃｘ２６、Ｃｘ４３在３个月胎龄的肝脏中高度表达、Ｃｘ３２从第     

一个定位于染色体3p25.3的新基因及在鼻咽癌中的表达分析

目的 分离位于染色体３ｐ２４－２６区域中鼻咽癌相关的新基因。方法 在染色体３ｐ２４－２６鼻咽癌杂合性丢失（ｌｏｓｓ ｏｆ ｈｅｔｅｒｐｚｙｇｏｓｉｔｙ,ＬＯＨ）高频区,用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,检测了２０个表达序列标记（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ,ＥＳＴ）在鼻吕细胞株ＨＮＥ１和原代培养的正常鼻咽上皮细胞中的表达水平,并对其中一个在鼻咽癌细胞株ＨＮＥ１中表达下调的ＥＳＴ     

LRRC4基因在脑胶质瘤细胞系中表达缺失

目的:研究LRRC4基因在恶性脑胶质瘤细胞系中的表达情况.方法:采用RT-PCR结合Northern-blot检测LRRC4基因在U251,U87,SF126,SF767,BT325及M17等6种恶性脑胶质瘤细胞系中的表达;并应用聚合酶链反应结合DNA直接测序法检测LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞系中的突变情况;进一步结合生物信息学分析研究LRRC4基因在U251细胞系中表达缺失的原因.结果:LRRC4基因在6种恶性胶质瘤细胞系中均表达缺失.通过对胶质瘤细胞系基因组DNA中LRRC4的ORF序列的PCR扩增和测序分析,发现SF126,SF767, M17细胞中,ORF序列第279位氨基酸的第3个密码子存在同义点突变(3/5),而U251和U87细胞基因组DNA中发生了LRRC4基因的缺失突变(2/5).结论:LRRC4基因在恶性胶质瘤细胞中表达缺失,染色体7q32-ter的纯合性缺失是LRRC4基因在U251细胞中表达缺失的原因.     

抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响

目的:探讨抑瘤基因NGX6对结肠癌血管形成的影响.方法:将HT-29细胞分为3组:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组(稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞)、pcDNA3.1(+)/HT-29组(转染空白质粒的HT-29细胞)及HT-29对照组.通过鸡胚绒毛尿囊膜血管形成实验检测结肠癌细胞接种鸡胚血管形成情况.裸鼠成瘤实验观测种植瘤及其对裸鼠的影响,然后对种植瘤进行免疫组织化学实验检测其内部血管生成.RT-PCR检测NGX6基因及VEGF基因在各组细胞中的表达.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组鸡胚血管形成平均数量较HT-29与pcDNA3.1(+)/HT-29组明显减少(6.2±0.2 vs 8.6±0.2,8.4±0.3,P<0.05):HT-29组裸鼠明显消瘦且PcDNA3.1(+)/NGX6/H T-29组与HT-29和pcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤平均质量、种植瘤微血管密度明显降低(1.83±0.25 g vs 4.06±0.20 g,4.16±0.4 g;1.83±0.52 vs 7.36±1.12 vs 6.96±1.43,均P<0.05); VEGF在pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29细胞及种植瘤中较其余两组明显降低,而pcDNA3.1(+)/HT-29细胞与未转染的HT-29细胞与种植瘤中呈高表达;且HE染色切片显示HT-29组及PcDNA3.1(+)/HT-29组种植瘤血管内都有癌栓,而PcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组种植瘤内未见有癌栓形成.结论:NGX6基因能抑制结肠癌细胞HT-29血管的形成,抑瘤基因NGX6的抑癌能力部分是通过抑制血管形成来实现的.     

全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖分化的影响

目的:研究全反式维甲酸对C6胶质瘤细胞增殖和分化的影响.方法:用5 mg/L全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)诱导C6胶质瘤细胞,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验绘制细胞生长曲线以考察ATRA对细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪、光镜、透射电镜和免疫组织化学染色鉴定细胞的分化状况.结果:C6胶质瘤细胞经全反式维甲酸诱导后,细胞增殖受到明显抑制,并且密度明显减少(P<0.01).细胞周期受阻,G0/G1期延长,S期细胞比例明显减少(P<0.01).光镜观察到诱导前的C6胶质瘤细胞呈正常的成纤维细胞形态,而诱导后的C6胶质瘤细胞变细长,中间呈圆形或卵圆形,两端形成长尖突起.流式细胞仪的凋亡率检测显示,未见明显的凋亡;透射电镜观察显示,细胞有早期凋亡改变,且胞浆内空泡增多,线粒体和内质网丰富,细胞结构基本趋向正常.C6胶质纤维酸性蛋白表达明显增强.结论:全反式维甲酸能抑制胶质瘤细胞的增殖,并能诱导C6细胞分化.     

Detailed Deletion Mapping of Chromosome 9p21-22 in Nasopharyngeal Carcinoma

Previous studies have showed that Epstein-Barr virus (EBV) infection, certain environmental factors and genetic factors were found to be closely associated with nasopharyngeal carcinoma. The rates of NPC in southern China and southeast Asia are 25 times higher than that of in western countries. The statistic analysis revealed 5%-10% NPC patients have family history, there, genetic susceptibility might be an important factor in the pathogenesis of NPC. Unfortunately the alterations of com…     

鼻咽癌细胞中表达上调的新基因 NAG23 (FBXO 30) 的克隆与分析

目的：分离位于6号染色体长臂鼻咽癌高频等位基因不平衡位点D6S1581（6q25.3-27）附近与鼻咽癌相关的新基因。方法：运用差异RT－PCR检测定位于D6S1581附近的11个表达序列标签（expressed sequence tage,EST)在正常人鼻咽上皮细胞和鼻咽癌细胞系中的表达水平,并对其中一个表达上调的EST在鼻咽癌组织和正常鼻咽组织中的表达情况进行分析。用Northern杂交验证其表达差异并检测其在多脏器中的表达及所代表基因的转录本大小。利用生物信息学资源克隆并获得其全长cDNA ,对该序列进行初步分析。结果：获得了一个位于6q25．3－27的在鼻咽癌中表达上调的新基因,命名为NAG23（FBXO30）(GenBank收录编号：AF248640）。该基因在68．9％的鼻咽癌活检组织中表达上调,cDNA全长3301bp,预测其开放阅读框编码一个含390个氨基酸的胞浆蛋白,该蛋白含一个F－box基序。结论：NAG23基因是一个在鼻咽癌中表达上调的新基因,很可能编码一新的F－box蛋白。NAG23可能参与了鼻咽癌的发生发展。     

B细胞与肿瘤免疫逃逸

B淋巴细胞是人免疫系统中的重要组成细胞,在机体发挥特异性免疫的过程中占有一席之地。近年来关于B细胞与肿瘤免疫逃逸的研究进展迅速。研究表明不同类型的B细胞在肿瘤微环境中通过多样化的机制发挥差异性作用。三级淋巴结构中的B细胞促进肿瘤的免疫杀伤作用,而调节性B细胞促进肿瘤的免疫逃逸。靶向B细胞的抗体药物是肿瘤免疫治疗潜在的新方向。     

稳定干扰NOR1基因对HeLa细胞的影响

目的：研究稳定干扰NOR1 基因对宫颈癌HeLa细胞系的影响。方法：采用pSUPER.neo+GFP载体构建靶 向NOR1基因的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1,pSUPER-shNOR1-2以及无关序列对照载体pSUPER-scramble,通过 脂质体转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定干扰细胞系。采用RT-PCR 和Western 印迹检测NOR1 mRNA和蛋白表达 水平。采用MTT法测定细胞生长曲线。采用H2O2处理HeLa细胞,采用Hoechst 33258染色和TUNEL法测定细胞凋亡。 Western印迹检测干扰NOR1对HeLa细胞凋亡相关分子Bcl-2,caspase和聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase, PARP)表达的影响。结果：稳定感染的shRNA干扰载体pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2抑制了HeLa细胞内源性 NOR1的基因表达,成功构建了稳定干扰NOR1基因的HeLa细胞系。M生长曲线测定表明：与pSUPER-scramble质粒 转染细胞相比,稳定转染pSUPER-shNOR1-1和pSUPER-shNOR1-2质粒促进了HeLa细胞的活力和增殖,并抑制了H2O2 诱导的HeLa细胞凋亡。Western印迹检测发现稳定干扰NOR1抑制了H2O2诱导的HeLa细胞caspase 9和PARP的活化,上调 了Bcl-2蛋白的表达。结论：稳定干扰NOR1 基因促进了HeLa细胞的活力与生长,并抑制了H2O2诱导的细胞凋亡,其 机制与干扰NOR1表达引起抗凋亡分子Bcl-2表达增加和抑制caspase 9活化有关。     

EB病毒DNA整合与细胞癌变

EB病毒感染与Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌的发生发展密切相关。EBVDNA与细胞基因组DNA整合后可导致一些与细胞生长、肿瘤形成有关的重要基因表达异常,促进细胞恶性转化。研究病毒整合的方法主要有荧光原位杂交(FISH),Southernblot,多聚酶链反应(PCR)和反向PCR(IPCR),构建细胞或组织基因组文库并筛选阳性克隆等。