人鼻咽癌细胞株中C－Ha－ras基因DNase－I超敏区的序列分析

Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的活化与鼻咽癌的发生有关。为了进一步了解ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因在鼻咽癌中的调控模式和活化机制，本文用ＤＮａｓｅ一Ｉ超敏区分析方法对人鼻咽癌细胞株ＨＮＥ２和ＨＯＮＥ１的Ｃ一Ｈｅ一ｒａｓ基因进行研究，发现Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因启动子部位存在一个重要的ＤＮａｓｅ一Ⅰ超敏区，测序结果表明其ＤＮＡ序列与正常Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的相应序列完全等同。提示鼻咽癌细胞中Ｃ一Ｈａ一ｒａｓ基因的调控模式在序列水平与正常细胞中的并无差异。     

抑制消减杂交与基因芯片技术及其联合应用

抑制消减杂交(SSH)与基因芯片技术是筛选差异表达基因的新方法,因其快速、高效等特点而得以广泛应用。SSH或基因芯片技术单独使用存在不同程度的缺陷或不足,但若将两种技术结合,则能充分发挥各自优势,并能最大限度弥补其不足,从而成为较为理想的克隆系统。     

鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库的构建及鼻咽癌表达上调基因的筛选

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方常见的上皮源性恶性肿瘤,流行病学研究调查,鼻咽癌的发生与EB病毒感染、某些环境理化因素及遗传因素有关,但其分子机理仍不十分清楚.鼻咽癌的发生可能涉及到多个瘤基因的激活和抑瘤基因的失活,但目前国际上仍未获得鼻咽癌特异相关基因.为了进一步筛选与克隆鼻咽癌特异相关基因,我们构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA文库,以供进一步深入研究.     

鼻咽癌易感/抑瘤基因的功能基因组学研究

鼻咽癌组织在染色体3p,9p,6q,11q,13 q和14q等区域存在较高的等位基因不平衡,表明这些区域存在与鼻咽癌相关的抑瘤基因.采用cDNA代表性差异分析等方法成功获得了候选的鼻咽癌易感/仰瘤基因,并进行了基因功能研究.发现:(1)Cx基因的表达增强是由于肿瘤细胞为突破细胞通讯功能的障碍,试图重建细胞间隙连接的一种表达变异;(2)BRD7基因是一个与细胞周期调控密切相关的核转录调控因子;(3)NAG7基因具有双重生物学功能--在抑制低侵袭能力的HNE1细胞增殖的同时,能够增加HNE1和6-10B细胞的侵袭潜能;(4)NGX6可以与Ezrin发生交互作用,参与鼻咽癌转移;(5)SPLUNC1基因的表达下调是鼻咽癌早期预警的分子诊断标志物.这些易感/抑瘤基因的功能基因组学研究为阐明鼻咽癌的发病机制打下了坚实的理论基础.     

Raji 细胞基因组文库的构建与筛选

目的:构建Raji细胞基因组文库,用EBV DNA探针对文库进行筛选.方法:Raji细胞基因组DNA经Bam HI酶切消化后,低熔点琼脂糖回收9～23 kb的酶切DNA片段,通过匹配黏性末端与磷酸化的Lambda DASH Ⅱ Bam HI酶切载体臂连接,在体外经包装系统包装成活的重组噬菌体,测定原始文库与扩增文库的滴度,用同位素标记的EBV DNA探针对Raji细胞基因组文库进行筛选.结果:Raji细胞原始文库与扩增文库的滴度分别为1.8×105和2.8×108 pfu/mL.文库经筛选获得4个阳性克隆,随机挑取1个阳性克隆稀释后铺平板作进一步杂交鉴定,发现所有噬菌斑均有杂交信号,证明该克隆确为阳性克隆.抽提该阳性克隆DNA,进行BarnHI酶切鉴定,证实插入片段的长度为8.5 kb.经测序、BLAST序列比对,结果显示插入片段一侧为EBV Bam HI W片段,另一侧与人类15号染色体RP11-665A22克隆高度同源.结论:Raji细胞基因组文库的成功构建,为进一步克隆包含EBV整合位点的细胞基因组序列、探讨EBV整合参与肿瘤发生发展的分子机制奠定了基础.     

临床护理人员离职意愿影响因素研究

目的探讨临床护理人员离职意愿的影响因素。方法采用分层随机抽样的方法对长沙市12所医院515名注册护士进行问卷调查，运用四份调查问卷进行资料收集：一般资料问卷收集护理人员的一般人口学特征；工作满意度问卷了解临床护理人员工作满意度现状；组织承诺问卷测量组织承诺水平；离职意愿量表测量护理人员的离职意愿与离职倾向。采用SPSS11．5统计软件对资料进行描述性分析与多元线性逐步回归分析。结果进入回归方程的变量有：组织承诺（标准化回归系数驴=-0．358）、工作满意度（sβ=-0．238）、学历（sβ=-0．173）、任职方式（sβ=0．170）、护龄（sβ=-0．120）、收入（sβ=-0．104）。结论影响长沙市临床护理人员离职意愿的因素依其大小依次是，组织承诺、工作满意度、学历、任职方式、护龄、收入。     

临床护理人员离职意愿影响因素研究

目的 探讨临床护理人员离职意愿的影响因素.方法 采用分层随机抽样的方法对长沙市12所医院515名注册护士进行问卷调查,运用四份调查问卷进行资料收集:一般资料问卷收集护理人员的一般人口学特征;工作满意度问卷了解临床护理人员工作满意度现状;组织承诺问卷测量组织承诺水平;离职意愿量表测量护理人员的离职意愿与离职倾向.采用SPSS11.5统计软件对资料进行描述性分析与多元线性逐步回归分析.结果 进入回归方程的变量有:组织承诺(标准化回归系数sβ=-0.358)、工作满意度(sβ=-0.238)、学历(sβ=-0.173)、任职方式(sβ=0.170)、护龄(sβ=-0.120)、收入(sβ=-0.104).结论 影响长沙市临床护理人员离职意愿的因素依其大小依次是,组织承诺、工作满意度、学历、任职方式、护龄、收入.     

鼻咽癌中与已知基因同源的差异表达cDNA序列

采用新近发展的ｃＤＮＡ代表性差异分析法筛选鼻咽癌中不表达的或表达降低的ｃＤＮＡ序列。结果显示：有９个与已知基因高度同源的ｃＤＮＡ序列。通过对这些已知基因的结构和功能分析,发现有与细胞骨架成分相关的基因：ａ－ａｃｔｉｎｉｎ,ｅｚｒｉｎ和细胞角蛋白１３;     

微阵列技术使肿瘤研究进入数字时代

微阵列技术最大的优势是可以同时检测样本中成千上万个基因的表达情况,它在肿瘤研究领域得到了广泛的应用检测肿瘤基因组的表达及结构变化,克隆肿瘤相关基因,进行肿瘤分型,抗癌药物筛选等.微阵列技术产生的大量数据极大地丰富了肿瘤研究的素材,使肿瘤研究进入了数字时代,推动了肿瘤学及生物信息学的发展.     

50例胃原发性恶性淋巴瘤临床特点分析

目的:探讨原发性胃淋巴瘤的临床特点, 提高原发性胃淋巴瘤的诊治水平。方法:回顾性分析中南大学湘雅医院肿瘤科2005 年9 月至2009 年9 月收治的50 例胃原发性恶性淋巴瘤。结果:原发性胃恶性淋巴瘤临床表现包括腹痛、上腹部不适、呕吐、黑便、食欲减退、发热、乏力、消瘦等, 其中最主要临床表现为腹痛。50 例胃原发性恶性淋巴瘤中, 1 例为外周T 细胞性淋巴瘤;49 例为B 细胞性淋巴瘤, 其中弥漫大B 细胞性淋巴瘤(di use large Bcell lymphoma, DLBCL) 34 例, 黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa associated lymphoid tissue lymphoma, MALT) 13 例, DLBCL 合并MAIT 淋巴瘤2 例。50 例胃原发淋巴瘤患者中共12 例接受手术治疗, 所有患者均接受化学治疗。49 例DLBCL 患者中14 例接受利妥昔单抗联合化学治疗, 35 例单纯化学治疗, 利妥昔单抗联合化学治疗患者的2 年总生存率优于单纯化学治疗患者(85.7% vs 77.1%, P<0.05)。临床分期I~II 期的患者2 年总生存率优于临床分期III~IV 期的患者(90.9% vs 71.4%, P<0.05)。结论:原发性胃恶性淋巴瘤患者临床表现以消化道症状为主, 但无特异性, 腹痛是最常见的表现。临床以组织病理检查为金标准, 最常见病理类型为DLBCL。治疗选择以化学治疗为主的综合治疗, 患者预后与临床分期、是否联合美罗华化学治疗相关。治疗后50 例患者的2 年总生存率达80.0%。