aFGF对庆大霉素所致海马星形胶质细胞损害的保护作用

目的 研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素(GM)引起的体外培养的大鼠海马星形胶质细胞损害的保护作用.方法 大鼠海马经分离、剪切、胰蛋白酶消化,进行星形胶质细胞的体外培养.采用兔抗GFAP多克隆抗体进行免疫组织化学染色鉴定,传3代细胞接种于96 孔培养板.(1)培养24 h后加入一系列浓度的GM,再培养2...     

bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性检测方法的建立及其稳定性评价

目的：建立碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）生物蛋白海绵体外生物学活性测定方法观察bFGF生物蛋白海绵常温放置的稳定性。方法：bFGF生物蛋白海绵供试品融于稀释液中,离心后获得浸提液,以bFGF标准品为对照,与NIH3T3细胞共培养,MTT法检测bFGF生物蛋白海绵浸提液对NIH3T3细胞的促增值作用,用bFGF标准品计算bFGF生物蛋白海绵的相对百分效价,对该方法进行验证;以常温储存2、3和4年的bFGF生物蛋白海绵为供试品,以低温储存30 d的bFGF生物蛋白海绵为标准对照,以不含bFGF生物蛋白海绵和bFGF的培养液为空白对照,测定各组生物学活性效价,比较不同储存时间bFGF生物蛋白海绵的体外生物学活性效价的稳定性。结果：bFGF生物蛋白海绵供试品浸提液随浓度增加其吸光度（A值）增高,即NIH3T3细胞增殖作用增加,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),与bFGF标准品比较差异无统计学意义（P>0.05）;bFGF标准品和bFGF生物蛋白海绵在该方法中均存在量效关系,且符合四参数方程式：y=（A－D）∕［1+（X／C）B］+D;常温条件下储存2、3和4年生物蛋白海绵体与低温储存30 d比较,其生物学活性效价(U?mL-1)下降率分别为0.5%、0.6%和0.8%,均低于15%的国家标准。结论：bFGF生物蛋白海绵在体外能够促进NIH3T3细胞增殖,具有良好生物学活性;应用NIH3T3细胞检测bFGF生物蛋白海绵体外生物学活性可作为常规检测方法;bFGF生物蛋白海绵常温储存2~4年稳定性良好。     

FGF/胶原蛋白复合海绵的皮内刺激试验和短期肌肉植入试验

目的:评估FGF/胶原蛋白复合海绵在动物体内的生物相容性。方法:由不同原料制备的FGF/胶原蛋白复合海绵,分别进行以下生物学测试;(1)皮内刺激试验;(2)短期肌肉植入试验,实验数据根据标准进行分析和评估。结果:在急性眼刺激试验和皮内刺激试验中,2种供试品评分均为0分,表明它们对组织均无刺激性;在短期肌肉植入试验中,2种供试品在组织内无明显的炎症排斥反应,能够在短期内被降解吸收。结论:供试品的生物学测试结果显示了FGF/胶原蛋白复合海绵具有较好的生物相容性,在临床植入医用等领域有应用潜力。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子脂质体的制备及其物理稳定性评价

［摘 要］目的：确立重组人酸性成纤维细胞生长因子（rhaFGF）脂质体制备的最佳处方及工艺条件,研究其理化性质。方法：采用冻干再水化法,以磷脂与胆固醇质量之比、缓冲溶液pH值和均质时间为单因素,每个因素选取三水平进行实验,以药物包封率、物理稳定性和生物活性作为评价指标,确立优化脂质体制备的最佳处方及工艺条件。结果：采用最佳处方工艺条件,即磷脂与胆固醇的比例为20∶1,磷酸盐缓冲液pH值为6.5,高压均质时间为20 min制备的rhaFGF脂质体,经测定其包封率（En）达81.79%±2.51%,物理稳定性参数（KE）为1.050%±0.342%,生物学活性为（6.521 0±0.617 1)×10⁵ Ｕ/mL,粒子大小较均匀,粒径大多分布在100 nm左右。结论：通过优化工艺条件制备的rhaFGF脂质体包封率高,在4℃保存条件下,渗漏率低且具有很好的物理稳定性及生物学活性。     

姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠血浆中含量的测定

目的：建立大鼠血浆中姜黄素及姜黄素衍生物A的高效液相色谱(HPLC)测定方法,研究其在大鼠体内的药物动力学,为姜黄素的临床应用提供参考。方法：将姜黄素及姜黄素衍生物A分别灌胃给药,采用HPLC测定其在大鼠血浆中的血药浓度,色谱柱为Hypersil ODS2 C18（5 μm×4.6 mm×200 mm）;柱温：30℃;姜黄素流动相,乙腈-水-乙酸（体积比45∶55∶1）,姜黄素检测波长为420 nm;姜黄素衍生物A流动相,乙腈-水-乙酸（体积比70∶30∶1）;体积流量为1.0 mL?min-1;姜黄素衍生物A检测波长为361 nm。结果：姜黄素及姜黄素衍生物A在0.25~100.00 mg?L-1 范围内与峰面积呈良好的线性关系,姜黄素回归方程为Y=105.90X－22.70,r=0.999 6;姜黄素衍生物A回归方程为Y=71.20X+24.62,r=0.999 4。两者日内、日间精密度RSD均小于4%,平均回收率均大于96%;大鼠灌胃给药后的药动学行为符合单室模型,姜黄素衍生物A的清除率比姜黄素显著降低,约是姜黄素清除率的3.57倍,曲线下面积是姜黄素的4.09倍,半衰期t1/2约为姜黄素的2.79倍。结论：HPLC测定姜黄素及姜黄素衍生物A在大鼠体内血药浓度的方法准确、简单可行、重复性好,为提高姜黄素在体内的稳定性,延长其在体内半衰期提供了依据。     

毛茛提取液对离体子宫平滑肌作用及其机制的研究

目的：观察毛茛提取液(Ranunculus japonicus Thumb Extractant,RJTE)松弛离体子宫平滑肌条的作用,并初步探讨其作用机制,方法：制备离体大鼠子宫平滑肌条,观察不同剂量RJTE对于宫肌条自发活动和由缩宫素诱发收缩活动增加的影响,结果：RJTE可抑制缩宫素所致的离体子宫平滑肌兴奋作用,表现为收缩幅度的减小和频率的减慢;在使用普萘洛尔后,该松弛作用未被完全阻断、结论：RJTE能抑制由缩宫素所引起的离体子宫兴奋作用,该作用与β2受体无明显关系。     

酸性成纤维细胞生长因子对顺铂所致血管内皮细胞损害保护作用的实验研究

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对顺铂(DDP)引起的体外培养的血管内皮细胞损害的保护作用。方法通过组织块法获取血管内皮细胞、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定,纯化后传代接种于96孔培养板:(1)培养24 h后加入一系列浓度的DDP,再培养24 h后用MTT法检测细胞存活率;(2)培养24 h后在系列DDP浓度的基础上加入一定浓度的aFGF,继续培养24h后用MTT法检测细胞存活率。结果 aFGF能使DDP对血管内皮细胞的半数抑制浓度(IC50)升高。结论 aFGF对DDP损伤的血管内皮细胞有一定的保护作用。     

低剂量电离辐射对糖尿病小鼠肾脏ICAM-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的：研究低剂量电离辐射（LDR）对链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病（DM）小鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA及蛋白表达的影响,阐明LDR抗炎作用可能是其治疗糖尿病的主要机制。方法：选取健康适龄C57BL/6J小鼠,分为4组（对照、DM、LDR和DM/LDR组）。其中DM与DM/LDR组经腹腔注射STZ,建立DM模型,另2组给予等量枸橼酸溶液。造模后DM/LDR与LDR组给予25 mGy隔日照射,共照射4周。在照射后2、4、8、12及16周,利用RT-PCR及Western blotting方法检测其肾脏ICAM-1 mRNA及蛋白表达。结果：小鼠造模后照射前各组肾脏总ICAM-1 mRNA及蛋白表达差异无显著性（P>0.05）。给予LDR 2周时DM组肾脏ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著高于其他3组（P<0.05）。照射后4周时DM/LDR 组ICAM-1 mRNA表达水平明显高于非DM组（P<0.05）,但仍显著低于DM组,这种差异一直保持到照后16周。而LDR组其表达水平显著高于对照组（P<0.05）。免疫组织化学检测：与非DM组比较,DM组小鼠肾小球、肾小管结构异常,且阳性细胞染色数量明显增多。但DM/LDR组肾小球肾小管损伤较DM组有所减轻,且阳性细胞数量显著少于DM组。结论：在糖尿病状态下LDR能有效降低ICAM-1 mRNA及蛋白表达水平,缓解肾脏的炎症反应;在正常机体LDR可提高免疫力,促进免疫相关因子释放,提示LDR视机体所处不同状态发挥不同的调节功能。     

重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化

目的：构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1( rhKGF1_dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法：利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1_dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1_dest23﹑pET22b-sumo-rhKGF1_dest23﹑pET3c-rhKGF1_dest23和pET3c-sumo-rhKGF1_dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3) plysS、BL21(DE3) 、BL21(DE3)Star plysS、origima(DE3) 和BL21AI,筛选rhKGF1_dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1_dest23蛋白,Western blotting法鉴定rhKGF1_dest23蛋白。结果： pET22b-rhKGF1_dest23质粒与BL21AI 宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导, SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10％,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1_dest23蛋白纯度为95%以上,Western blotting法鉴定为rhKGF1_dest23蛋白。结论：成功构建表达人KGF1_dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1_dest23蛋白。