haFGF突变体促细胞增殖活性降低及其机制

目的：观察N端缺失27个氨基酸残基的人酸性成纤维细胞生长因子突变体（mhaFGF）对肝癌细胞增殖活性和信号转导的影响。方法： 用不同浓度（0.01-100 μg/L）的人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF）及mhaFGF分别处理肝癌细胞，15 min后用半定量Western blotting检测信号蛋白Grb2、Erk1/2在肝癌细胞中的表达，48 h后用MTT法检测细胞增殖活性，并用流式细胞仪分析细胞周期。结果： haFGF组G1期细胞比例显著低于和S期显著高于mhaFGF组和对照组，而mhaFGF组与对照组间无差别; mhaFGF组的Grb2和MAPK-ERk1/2信号分子表达水平低于haFGF组。结论： mhaFGF促分裂活性的下降可能是通过下调MAPK信号通路中的MAPK-ERK1/2和Grb2信号分子的表达来实现的。     

改构型酸性成纤维细胞生长因子对离体大鼠缺氧再灌注心脏的保护作用

目的：探讨maFGF对大鼠缺氧再灌注心脏的保护作用及其机制。 方法： 在Langendorff离体心脏灌流装置上建立缺氧再灌注模型，用BL-410生物机能实验系统记录左室发展压（LVDP）、左室内压上升/下降的最大速率（dp/dtmax、dp/dtmin），比较经maFGF和aFGF预处理，心肌缺氧再灌前后LVDP、dp/dtmax、dp/dtmin的变化，测定冠脉流出液中的LDH、MDA、SOD水平。 结果： maFGF和aFGF预处理均明显促进心肌缺氧再灌后心功能恢复，减少缺氧再灌注导致的LDH漏出、SOD降低和MDA升高。 结论： maFGF对缺氧再灌注心脏具有一定的保护作用，其作用机制可能与提高自由基清除酶活性及抑制脂质过氧化反应有关。     

重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。     

H-1152对兔眼眼压及小梁组织超微结构的影响

目的观察H-1152对兔眼眼压以及小梁组织超微结构的影响,并探讨其作用机制。方法观察兔眼点用H-1152前后眼压变化,并用透射电镜分析兔眼小梁组织超微结构的变化。结果H-1152能明显降低兔眼眼压。局部点用10mmol/L的H-1152（50μL）后1～6h的眼压较对照组降低（P〈0.05）。点药后2h下降至最低点,较处理前降低50.6%。与对照组相比,点药后1～3h眼压下降最明显。电镜下可见小梁间间隙增大,小梁组织中细胞外基质（ECM）减少。结论H-1152可有效降低兔眼眼压,其作用机制可能是通过降解小梁通道的ECM,改变小梁通道的构型,使房水排出阻力减少,眼压降低。H-1152有望成为治疗青光眼的有效药物。     

重组人酸性成纤维细胞生长因子皮肤用药的药代动力学

目的研究rhaFGF在健康及破损皮肤用药的药代动力学特征。方法在兔健康及破损皮肤上均匀涂抹¹²⁵I-rhaFGF 180 U·cm^-2后,在不同的时间测血浆及组织中的放射性计数,结合纸层析的方法测定组织和血浆中的¹²⁵I-rhaFGF的含量。结果破损皮肤用药后,血中rhaFGF原型物浓度呈快速上升状态,0.5 h达最大值(73.03 pg·mL^-1),其后迅速下降,3 h后接近0。¹²⁵I-rhaFGF给药后96 h,放射性主要浓集于皮肤,其次是肾,大脑最少。结论rhaFGF不能通过健康皮肤进入体内,可通过破损皮肤进入血循环,但吸收量少,原形物半衰期短,无蓄积作用;吸收后的rhaFGF对皮肤有较大亲和力,可分布于远处皮肤,且含量较高。