oleosin-rhFGF9融合蛋白的红花表达及其毛发再生、创伤修复研究北大核心CSCD

利用红花表达成纤维细胞生长因子9（fibroblast growth factor 9,FGF9）重组融合蛋白,研究其对毛发生长及创伤修复的作用,为红花作为植物反应器提供基础并对FGF9融合蛋白毛发及创伤商业化应用奠定基础。通过冻融法将鉴定的p OTBar-oleosin-rhFGF9质粒转入农杆菌EHA105中,农杆菌介导法将oleosin-rhFGF9基因转入红花子叶中,经红花组织培养、Basta筛选获得转基因再生苗,嫁接法,PCR试验验证,扩繁,获得转基因T3红花种子。Western blot法分析及ELISA定量融合蛋白含量为0.09%。在质量浓度为60μg·L-1时,转基因红花油体促NIH/3T3细胞增殖较好,且有一定剂量依赖性。C57BL/6小鼠60只,分别建立脱发模型和创伤模型,分别为空白组（PBS或生理盐水）、阴性组（野生型红花种子油体,60 g·L-1）、阳性组（FGF9,0.054 g·L-1）、低剂量组（转基因红花油体,10 g·L-1）和高剂量组（转基因红花油体,60 g·L-1）,隔天涂抹1次,每次100μL,15 d后取皮,固定包埋进行组织学分析。小鼠毛发实验结果表明各组小鼠毛发长势良好,其中高剂量组小鼠毛发浓密,再生毛发数均较阳性组有显著效果;创伤实验愈合明显,阳性组、高剂量组、低剂量组愈合效果较空白组均显著,且在第5天,高剂量组愈合效果显著优于阳性组。该实验成功转化红花,获得了oleosin-rhFGF9融合蛋白表达的T3转基因红花,其具有促进毛发再生和创伤修复的作用。     

酸性成纤维细胞生长因子的神经保护作用

脑、脊髓神经细胞受损后，常常不能重建正确的树突和轴突联系，即使经过治疗，患者的预后仍不理想。大量的研究证实，神经系统损伤后各类生长因子、神经营养因子（NTF）可促进神经元存活和轴突再生。目前，国内外的研究主要集中在NTF、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）上。近10年来，成纤维细胞生长因子的神经保护作用已得到确认，作者就aFGF在神经系统中的作用综述如下。     

心脏炎症反应在糖尿病心肌病发生发展中的病理作用

糖尿病是致动脉粥样硬化性心血管病变和糖尿病人致残和死亡的主要原因,已广为研究和认识,但关于糖尿病心肌病的存在表现和机制尚不十分清楚,也是临床近年关注的另一焦点,为此本刊特约请美国路易斯威尔大学蔡露教授就他们在这方面的研究和认识,并复习相关文献作一介绍。     

重组人酸性成纤维生长因子对离体小鼠胸主动脉的弱缩血管作用及其机制

成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factors,FGFs)是一类广泛地促进来源于中胚层及神经外胚层细胞增殖的活性物质,近年来对其非促分裂效应不断受到广泛关注,特别是对血管张力的调节作用得到了人们的关注.     

重组人成纤维细胞生长因子21降糖作用研究

目的利用肝细胞、肌肉细胞,前脂肪细胞及ob/ob小鼠进行rhFGF21体内外降糖作用研究。方法培养人正常肝细胞(HL-7702),大鼠肌肉细胞(L-6),小鼠前脂肪细胞(3T3-L1),用GOD-POD试剂盒测定细胞葡萄糖吸收量;FGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射7d,分别在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测空腹血糖,以生理盐水做对比;rhFGF-21按照每天0.6μg·g-1的剂量颈部皮下连续注射9 d,末次给药后1 h开始口服糖耐量实验,灌胃给予2 mg.g-1的葡萄糖溶液,分别于给予葡萄糖溶液后30、60、120 min检测血糖;rhFGF-21按照每天2.5μg·g-1的剂量颈部皮下注射连续7 d,在d 0、d 3、d 7给药后1 h检测餐后血糖。结果在3.9 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进HL-7702细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);在0.3 mg·L-1～250 mg·L-1间rhFGF21促进L6肌细胞对葡萄糖的吸收,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);在12.6 mg·L-1～100 mg·L-1间rhFGF21促进分化的3T3-L1细胞葡萄糖的吸收且呈现浓度-效应关系,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);ob/ob小鼠血糖测试证明,rhFGF-21具有降血糖和改善葡萄糖耐受量的作用。结论 rhFGF21体外可促进肝细胞、肌肉细胞及脂肪细胞葡萄糖的吸收;rhFGF-21可降低ob/ob小鼠空腹血糖及餐后血糖,具有改善其葡萄糖耐受量的作用。     

肝素微胶囊的制备及其性能研究

本研究利用壳聚糖与海藻酸钠为囊材,借助油包水(w/o)乳化交联技术制备了新型肝素微胶囊,并对其性能进行了系统性的研究。研究结果表明随着微胶囊中壳聚糖的含量的增加,肝素在胶囊里面的包封率增大,而释放速率则降低。当微囊中的壳聚糖含量达到20%(wt)时,肝素的包封率可以达到58%。     

莪术醇的分离鉴定及含量测定

目的：研究从莪术油中提取莪术醇的方法，建立莪术醇含量分析的新方法。方法：以莪术油为原料，进行减压蒸馏，收集208—216℃的馏分经重结晶得到产品，将其和对照品作差示量热光谱、红外光谱、核磁共振和质谱对比分析确定莪术醇；用高效液相色谱法测定其含量，色谱柱为ODS柱；以乙腈：水（15：85，V：V）为流动相；流速为1．0mL/min；检测波长为210nm；柱温为25℃；以外标两点法计算含量。结果：经差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱分析鉴定提取的产物是莪术醇，高效液相分析其浓度在10—70μg／mL范围内线性关系良好，相关系数r=0．9999（n=7）；精密度试验RSD为0．92％（n=6）；平均回收率为99．86％，RSD=0．76％，含量为98．9％，RSD=0．89％（n=3）。日内日间差异实验RSD均小于0．78％，表明样品稳定性良好。结论：减压蒸馏法提取莪术醇的工艺流程简单，适合大规模生产，而且纯度高；高效液相色谱法测定莪术醇含量的方法简便、准确、快速，可用于莪术醇及其制剂的质量控制。     

温莪术HPLC指纹图谱研究

目的 采用HPLC法建立温莪术药材的指纹图谱.方法 用Kromasil ODS-1(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,乙腈和水为流动相,采用梯度洗脱,体积流量:0.8mL/min,柱温35℃,检测波长244nm.结果 建立了HPLC指纹图谱共有模式,并对不同产区的温莪术药材进行了相似度比较.结论 温莪术药材中各成分均得到了较好的分离,可作为温莪术药材专属性的指纹图谱.     

MaFGF对急性染顺铂小鼠肾损害的保护作用研究

目的探讨改构型酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对急性染顺铂(DDP)小鼠肾损害的保护作用及其机制。方法腹腔注射(ip)DDP 10 mg/kg,建立小鼠肾损伤模型,然后每日ipMa FGF 10或20μg/kg,连续7 d。采用全自动分析仪测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量,试剂盒测定丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量和超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,观察肾脏病理学变化。结果 Ma FGF可明显降低血清Scr、BUN及肾皮质MDA、NO含量(P<0.05),引起SOD、GSH-Px活性明显升高(P<0.05),使受损的肾结构明显改善。结论 Ma FGF对顺铂致肾功能损伤有保护作用,其机制可能与抗顺铂的脂质过氧化反应有关。     

红花DHDPS基因全长cDNA的克隆及植物表达载体构建

目的克隆红花赖氨酸生物合成途径关键酶二氢吡啶二羧酸合酶(dihydrodipicolinate synthase DHDPS)基因的全长c DNA序列,构建植物超表达载体。方法根据红花转录组文库注释信息获得红花DHDPS(CtDHDPS)基因的中间序列,通过RT-PCR与RACE技术从红花种子中克隆CtDHDPS基因全长c DNA序列。采用DNA重组技术构建p BASTA-CtDHDPS植物超表达载体。结果分离CtDHDPS基因全长1 309 bp,开放阅读框954 bp,编码317个氨基酸,编码蛋白理论等电点为5.93,相对分子质量约为34 750.79。通过DNA重组技术成功构建了植物超表达载体p BASTA-CtDHDPS。结论获得CtDHDPS基因全长c DNA序列并成功构建植物超表达载体,为阐明CtDHDPS基因的生物学功能及其在红花赖氨酸生物合成途径中作用机制提供科学依据。