莪术醇的分离鉴定及含量测定

目的：研究从莪术油中提取莪术醇的方法，建立莪术醇含量分析的新方法。方法：以莪术油为原料，进行减压蒸馏，收集208—216℃的馏分经重结晶得到产品，将其和对照品作差示量热光谱、红外光谱、核磁共振和质谱对比分析确定莪术醇；用高效液相色谱法测定其含量，色谱柱为ODS柱；以乙腈：水（15：85，V：V）为流动相；流速为1．0mL/min；检测波长为210nm；柱温为25℃；以外标两点法计算含量。结果：经差示扫描量热光谱、红外光谱、核磁共振、质谱分析鉴定提取的产物是莪术醇，高效液相分析其浓度在10—70μg／mL范围内线性关系良好，相关系数r=0．9999（n=7）；精密度试验RSD为0．92％（n=6）；平均回收率为99．86％，RSD=0．76％，含量为98．9％，RSD=0．89％（n=3）。日内日间差异实验RSD均小于0．78％，表明样品稳定性良好。结论：减压蒸馏法提取莪术醇的工艺流程简单，适合大规模生产，而且纯度高；高效液相色谱法测定莪术醇含量的方法简便、准确、快速，可用于莪术醇及其制剂的质量控制。     

抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定

目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。再将两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 96h ,SDS PAGE电泳检测融合蛋白的表达 ,并用Western blot杂交检测融合蛋白的免疫原性。利用肝素亲和层析纯化融合蛋白 ,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性。结果 :筛选出能表达相对分子质量约为 19kD融合蛋白的重组转化株 ,SDS PAGE电泳检测显示甲醇诱导 96h后 ,融合蛋白表达量达到最高 ,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。融合蛋白没有抑菌活性 ,而裂解产物则具有抑菌活性。此外 ,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低。结论 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,并在毕赤酵母中实现了表达。融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。     

瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

目的: 为了便于追踪瘦素(Leptin)在体内的去向,对其进行体内定位,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针.方法:用PCR技术将Leptin cDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中,构建成原核表达工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG.用Western-blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性.结果:DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致;构建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG获得了表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上;Western-blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光.结论:融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性.为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径.     

姜黄素抑制ECV304细胞增殖及对基质金属蛋白酶2表达的影响

目的:探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞(ECV304)的作用以及对ECV304表达的基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响。方法:采用MTT法,台盼蓝染色法测定姜黄素对ECV304的量效关系和时效关系,Giemsa染色观察姜黄素对ECV304的抑制作用;通过RT-PCR检测姜黄素作用ECV304后MMP-2 mRNA表达,明胶酶谱法检测MMP-2的活性,免疫组化检测细胞MMP-2表达。结果:姜黄素对ECV304的抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性,Giemsa染色显示浓度为8μg/mL和10μg/mL的姜黄素可诱导ECV304凋亡,凋亡率分别是21.6%和34.7%;在10μg/mL姜黄素作用24 h下,MMP-2的mRNA显著减少,其分解明胶的活性也显著降低,免疫组化显示与阴性对照组相比内皮细胞MMP-2表达减少。结论:姜黄素能够抑制血管内皮细胞的生长、降低血管内皮细胞MMP-2的表达。     

低剂量辐射诱导的细胞遗传学适应性反应新进展

本文综述了适应性反应的普遍性及影响因素(剂量率、细胞周期、个体差异),并对适应性反应的机制进行了广泛探讨,提出适应性反应不仅与DNA修复酶有关,而且与保护性蛋白合成有关。     

温莪术HPLC指纹图谱研究

目的 采用HPLC法建立温莪术药材的指纹图谱.方法 用Kromasil ODS-1(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,乙腈和水为流动相,采用梯度洗脱,体积流量:0.8mL/min,柱温35℃,检测波长244nm.结果 建立了HPLC指纹图谱共有模式,并对不同产区的温莪术药材进行了相似度比较.结论 温莪术药材中各成分均得到了较好的分离,可作为温莪术药材专属性的指纹图谱.     

nmhaFGF对SD大鼠缺血再灌注视网膜SOD、MDA、NO的影响

目的观察非促分裂人酸性成纤维细胞生长因子（nmhaFGF）对大鼠视网膜缺血再灌注损伤后视网膜超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的影响.方法 40只SD大鼠随机分为对照组10只,实验组（nmhaFGF组）30只.实验组（大鼠左眼）又分为nmhaFGF低剂量组（1.25μg组）、nmhaFGF中剂量组（2.5μg组）、nmhaFGF高剂量组（5μg组）各10只,右眼为模型组（给予等量生理盐水）.采用升高眼内压的方法建立大鼠视网膜缺血再灌注模型.再灌注24h后分光光度法测定视网膜MDA、SOD含量,GRIESS反应测定NO含量.结果与模型组相比,nmhaFGF中剂量组、nmhaFGF高剂量组MDA含量显著降低（P＜0.01）,SOD、NO含量显著升高（P＜0.05）;nmhaFGF低剂量组和模型组之间SOD、MDA、NO含量没有显著差异（P＞0.05）.结论 nmhaFGF具有抗视网膜缺血再灌注氧自由基的作用;视网膜缺血再灌注损伤时,nmhaFGF可以增加视网膜内NO的含量,并呈现一定的量效关系.     

抗精神病药物对脑内生长因子调控作用的研究进展

抗精神病药物主要通过阻断相应的受体发挥药理作用，最近的研究显示抗精神病药物同时也能够影响脑内某些生长因子的表达水平。这些生长因子对神经元的存活和重塑极其重要。本文对抗精神病药物与脑内生长因子表达间相互关系的研究进展做一介绍。     

莪术油对紫外线辐射皮肤损伤的防护作用

目的 研究莪术油对中波紫外线所致皮肤损伤的防护作用及其机制.方法 建立UVB氧化损伤模型（照射30 d,累计28.38 J/cm^2）.观察皮肤外观及HE染色后表皮厚度和真皮成纤维细胞数量的变化.酶法检测皮肤匀浆上清液中抗氧化酶（过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽GSH-Px和超氧化物歧化酶SOD）活性和丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（T-AOC）.结果 ①光镜下,UVB照射组和基质空白组照射侧可见表皮增厚,真皮中成纤维细胞减少,而对照侧未见此病理变化;莪术油防护组照射侧表皮未见增厚,成纤维细胞数增多,但对照侧成纤维细胞数增多不明显.②UVB照射组和基质空白组照射侧皮肤中MDA含量明显升高,CAT、GSH-Px和SOD活性及T-AOC降低,而对照侧未见明显差异;莪术油防护组照射侧CAT、GSH-Px、SOD活性及T-AOC增强,MDA含量降低,而对照侧未见明显改变.结论 莪术油具有对UVB皮肤氧化损伤的防护作用,其作用机制可能与提高抗氧化酶含量及清除体内自由基有关.     

细胞生长因子在美容护肤中的应用

细胞生长因子,对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生物调节作用,他们在体内含量极微,但生物活性极高.在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作用[1～2].