基于CRISPR/Cas13a技术检测肿瘤驱动基因TP53R248W的研究

目的：建立一种基于 CRISPR/Cas13a 的 TP53 R248W 变异体的快速检测技术。方法：根据 Over?lap PCR 技术，以 TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒；对TP53R248W变异体扩增产物大小，扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化，初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法；利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆 ctDNA，评价 CRISPR/Cas13a 方法的检测灵敏度。结果：建立的 CRISPR/Cas13a 方法成功检测出产物大小为 368 bp 的 TP53 R248W片段；在0.05~0.25 μmol/L浓度范围内，crRNA浓度越高，检测结果相对荧光值越高；该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104 拷贝/μL，最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、 特异等优点，为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。     

血液流变学及凝血功能检测在不同病程COPD患者中的应用

<正>慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)以持续性气流受限为特征,病变呈进行性发展,是一种呼吸系统常见多发病~([1-2])。COPD早期虽累及气管和肺部,但缺氧及伴发的炎症却是全身性的~([3])。在急性加重期易诱发呼吸衰竭,引起循环、凝血功能障碍。本研究对COPD患者血液流变学、凝血功能、乳酸及炎症指标的变化和关系进行分析,     

试谈太极拳作为我国农村老年人健身的主要方法

本文从目前我国农村老年体育的表现形式、太极拳的适应性及太极拳对老年人身体健康的影响 ,分析将太极拳作为我国农村老年人健身的主要方法具有重要的意义 ,并提出几点建议。     

血清CK-MB质量及其活性检测结果对比分析

目的通过对血清肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme,CK-MB）质量及其活性检测结果进行比较分析,为临床提供合理的检测选择依据。方法依据CK-MB活性与CK活性结果是否倒置分为倒置组（22例）和非倒置组,非倒置组又分为正常组（53例）和升高组（32例）,样本均用日立7600或7170全自动生化分析仪分析,CK-MB质量采用免疫化学发光法进行检测,CK、CK-MB活性采用酶免疫抑制法进行测定。组内质量及活性比较采用Spearman等级相关分析;由于数据方差不齐,组间多重比较采用Mann-Whitney Test。结果组内质量及活性Spearman等级相关分析结果分别为：倒置组CK-MB质量为（6.88±19.96）ng/ml,CK-MB活性为（176.00±150.51）U/L,r=0.249;P=0.082;正常组CK-MB质量为（3.82±4.66）ng/ml,CK-MB活性为（12.04±6.89）U/L,r=0.435,P=0.001;升高组CK-MB质量为（45.72±62.28）ng/ml,CK-MB活性为（67.22±106.23）U/L,r=0.838,P=0.000。倒置组与正常组比较,CK-MB活性差异有统计学意义（Z=-6.782,P〈0.001）;CK-MB质量无统计学差异（Z=-0.617,P〉0.537）。结论在CK-MB/CK非倒置时,CK-MB质量及其活性检测结果无明显差异,选择CK-MB活性检测更经济实惠;而CK-MB/CK倒置时,CK-MB活性受到诸多因素的干扰,使测定结果高于真实值,出现假性升高,而CK-MB质量能够避免干扰使测定结果更准确。     

地中海贫血筛查及基因检查的结果分析

地中海贫血（地贫）是由于基因缺失或突变导致的珠蛋白合成障碍的一组遗传性溶血性贫血,其临床表现差异较大,轻者可无任何症状,重者可在胎儿期死于宫内或出生后几年夭折,个别重型患者终生依赖输血维持生命,给家庭和社会带来一定的负担。为了解本地区地贫的发生情况和基因分布,作者对11565例地中海贫血检测的筛查及基因诊断结果进行分析。     

1730例女性健康体检者高危型和低危型人乳头瘤病毒感染情况调查

目的通过对1730例健康体检女性的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况进行分析,推测广州地区女性HPV感染状况。方法采用HPV核酸分型流式荧光杂交法,对来我院体检的1730例健康女性宫颈分泌物进行17种高危型HPV和10种低危型HPV核酸检测,并对不同年龄组的感染情况进行比较,总结该人群不同HPV型别及亚型感染率。结果高危型HPV感染率10.17%(176/1730),低危型HPV感染率为5.90%(102/1730)。各年龄段高危型HPV感染率最高的为60岁年龄段,其次为30岁年龄段。HPV感染模式最常见为高危型单一,最少见的感染模式为低危型多重合并高危型单一。高危型HPV感染率前8位依次为HPV53型、58型、52型、39型、16型、18型、51型、56型,低危型HPV感染率前4位依次为HPV43型、61型、81型、42型。结论广州地区女性HPV感染率较高,并且以高危型HPV感染为主。定期进行HPV筛查,有利于预防和早期发现宫颈病变。     

血液流变学检测中血浆纤维蛋白原浓度对血浆黏度的影响

目的:研究纤维蛋白原(Fib)浓度的梯度变化对血液流变学中血浆黏度的影响和二者间的变化规律.方法:收集正常人血浆,利用Fib干粉配制成浓度梯度为0.5 g/L左右的21份待测血浆,分别测量备份血浆的Fib浓度和血浆黏度各3次,取平均值;利用回归分析的方法得出二者之间的线性关系.结果:随着Fib浓度梯度的增加,血浆黏度也与之成正相关性变化.Fib浓度对血浆黏度的影响分为三个阶段,第一阶段,在Fib浓度≤6.52 g/L时,回归直线为y=0.141 x+0.688;第二阶段,在Fib浓度＞6.52 g/L而又≤9.88 g/L时,回归直线为y=0.276x-0.098,其回归系数大于第一段的回归系数;在第三阶段,Fib浓度＞9.88 g/L时,所成回归直线为y=0.314x-0.274,其回归系数要高于第二段直线的回归系数.结论:在工作中我们要注意区别不同Fib浓度与其他一些因素对血液流变学中血浆黏度以及相关指标造成的影响,以便我们排除一些对结果有影响的因素,指导我们对血液流变学中的一些结果做出正确判断.     

Luminal亚型乳腺癌细胞与正常乳腺细胞的circRNA表达谱差异分析

目的探讨环状RNA（circRNA）在Luminal亚型乳腺癌细胞与正常乳腺细胞中表达谱的差异。方法分别提取Luminal亚 型细胞MCF7和正常乳腺细胞MCF10A的总RNA;使用NanoDrop ND-1000对total RNA质量进行检测,用核糖核酸酶R分解 total RNA以除去线性RNA并富集circRNA;利用随机引物法扩增富集的circRNA并转录成荧光cRNA;将荧光标记cRNA杂交 到circRNA微阵列芯片上,扫描得到两种细胞的circRNA表达谱;在Agilent Feature Extraction软件中进行原始数据提取,并对 采集到的阵列图像进行分位数归一化和后续数据处理,进行火山图和聚类热图分析;最后,选取差异表达倍数较高的3 条 circRNA进行实时荧光定量PCR（qPCR）鉴定。结果提取的MCF7和MCF10A细胞总RNA纯度高、完整度较好;扫描微阵列 芯片上标记的荧光信号,发现两种细胞的circRNA 表达谱明显不同;与MCF10A细胞相比,在MCF7 细胞的全部12 910 条 circRNA表达归一化结果中,有5964条上调,81条表达水平一致,6865条下调;表达差异（Log fold change）在2倍以上的有343 条,其中213 条上调,130 条下调;表达差异在5 倍以上的有9 条,其中8 条上调,分别为：hsa_circRNA_061260（6.02 倍）、 hsa_circRNA_103933（5.96倍）、hsa_circRNA_005239（5.84倍）、hsa_circRNA_100689（5.69倍）、hsa_circRNA_004087（5.60倍）、 hsa_circRNA_104420（5.25 倍）、hsa_circRNA_104421（5.13 倍）和hsa_circRNA_101222（5.03 倍）,1 条下调：hsa_circRNA_ 104864（5.09倍）;经qPCR鉴定hsa_circRNA_100689、hsa_circRNA_005239和hsa_circRNA_104864的差异表达趋势与芯片结 果相符。结论Luminal亚型乳腺癌细胞与正常乳腺细胞的circRNA表达差异较大,其中表达上调或下调的circRNA有望成为 Luminal亚型乳腺癌诊断的新靶标。     

多重核酸检测技术的临床应用现状及未来

多重核酸检测技术具有可同时检测多个靶标、高通量、低成本等优势,满足大规模筛查、定量等检测需求。多重聚合酶链反应广泛应用于病原体、甲基化DNA和突变基因检测以及单核苷酸多态性分型;重组聚合酶扩增、环介导等温扩增等等温扩增技术在即时检测领域有很好的前景;基于规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（...     

肠系膜静脉血栓形成误诊9例分析

目的 分析肠系膜静脉血栓形成(MVT)的误诊原因及防范误诊对策.方法 对重庆三峡中心医院1990-01-2007-12收治的11例MVT中误诊的9例进行回顾性分析.结果 9例误诊MVT中,误诊为上消化道出血4例,腹膜炎3例,急性重症胰腺炎1例,肠梗阻1例,其中有2例还第二次误诊.结论 临床医生对本病认识不足,重视不够是导致误诊的主要原因.提高本病的认识,对可疑患者及时、合理选用多种影像学检查,是减少误诊的关键.