血液流变学及凝血功能检测在不同病程COPD患者中的应用

<正>慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)以持续性气流受限为特征,病变呈进行性发展,是一种呼吸系统常见多发病~([1-2])。COPD早期虽累及气管和肺部,但缺氧及伴发的炎症却是全身性的~([3])。在急性加重期易诱发呼吸衰竭,引起循环、凝血功能障碍。本研究对COPD患者血液流变学、凝血功能、乳酸及炎症指标的变化和关系进行分析,     

西尼罗河病毒前膜蛋白- E蛋白结构域Ⅲ融合蛋白特异性单克隆抗体的制备以及应用分析

制备了针对西尼罗河病毒preM/EⅢ融合蛋白特异性单克隆抗体,并分析了其在临床检测中的应用价值。方法 采用原核表达系统表达西尼罗河病毒preM/E融合蛋白,作为抗原,免疫BALB/c小鼠,按常规单克隆抗体技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0 细胞融合,采用有限稀释法筛选能稳定分泌抗preM/EⅢ单抗的杂交瘤细胞株。接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔,抽取腹水纯化单克隆抗体。采用间接ELISA和Western blot对抗体特异性和效价进行分析,并对临床样本进行检测。结果 获得了1株能稳定分泌preM/EⅢ蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为ME1。纯化后抗体效价为10-6,其亚类为IgG1。ME1单抗均能与西尼罗病毒preM/EⅢ蛋白以及西尼罗病毒发生特异性反应,而与日本脑炎病毒(JEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、黄热病毒(YFV)和登革热病毒(DENV)无交叉反应。临床诊断准确率为97.78%。结论 ME1单克隆抗体具有较高的特异性,临床诊断准确性较高,具有临床应用价值。     

370例女性继发性不孕症患者支原体感染分析

目的 分析继发性不孕症女性支原体感染状况,为临床诊治提供参考.方法 采用回顾性分析方法,选取解放军广州总医院生殖中心门诊就诊的继发性不孕症女性患者370例作为不孕组,将同期半年内自然受孕女性300例作为对照组.收集2组患者妇科检查数据及解脲支原体和人型支原体培养结果,对所有数据进行统计学分析.结果 不孕组患者解脲支原体和人型支原体的阳性率分别为57.8%和7.6%,高于对照组(20.0%和1.7%)(P均<0.05);不孕组患者单项感染206例(55.7%),混合感染18例(4.9%);不孕组支原体阳性患者其输卵管堵塞、子宫内膜病变、盆腔粘连及流产史的发生率显著高于阴性者(P均<0.05).结论 继发性不孕症患者支原体感染率高,且支原体感染者盆腔输卵管病变发生率增高,提示支原体感染可能是继发性不孕症发病的重要因素之一,育龄妇女应加强支原体的筛查和治疗.     

基于CRISPR/Cas13a技术检测肿瘤驱动基因TP53R248W的研究

目的：建立一种基于 CRISPR/Cas13a 的 TP53 R248W 变异体的快速检测技术。方法：根据 Over?lap PCR 技术,以 TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒;对TP53R248W变异体扩增产物大小,扩增反应条件及crRNA长度和浓度进行优化,初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法;利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆 ctDNA,评价 CRISPR/Cas13a 方法的检测灵敏度。结果：建立的 CRISPR/Cas13a 方法成功检测出产物大小为 368 bp 的 TP53 R248W片段;在0.05~0.25 μmol/L浓度范围内,crRNA浓度越高,检测结果相对荧光值越高;该方法检测TP53 R248W变异体的灵敏度为1×104 拷贝/μL,最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、 特异等优点,为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。     

B细胞连接蛋白的结构、功能及其在B细胞相关疾病发展中的作用

B细胞连接蛋白,是B细胞受体通路的关键接头蛋白。B细胞连接蛋白通过自身的结构特性及蛋白互作网络参与调控 PLC-γ的活性和Ras通路激活,在B细胞受体信号转导中发挥重要作用,广泛参与调控B细胞的增殖、分化、凋亡及信号传导等过 程,并与过敏性疾病、多发性硬化症、染色体组非整倍体、无丙种球蛋白血症、B淋巴细胞白血病、淋巴瘤的发生发展密切相关。 本文对B细胞连接蛋白的结构、生物学功能及其在B细胞相关疾病中的作用进行综述：B细胞连接蛋白可与多个效应蛋白协作, 激活B细胞受体信号通路,从而影响着B细胞的发育成熟及功能调节;B细胞连接蛋白发生功能性突变,会破坏B细胞稳态并影 响B细胞发育成熟,从而导致B细胞相关疾病的发生。全面总结B细胞连接蛋白的生物学功能不仅有助于了解B细胞相关疾病 的发生机制,也有望将B细胞连接蛋白作为相关疾病的治疗靶标提供新思路和突破口。     

CRISPR/Cas9文库筛选技术的发展及在肿瘤研究中的应用

近年兴起的CRISPR/Cas9［Clustered regularly interspaced short palindromic repeats（CRISPR）/CRISPR-associated（Cas）9］技术因其能快速、简便、精准地实现基因敲除、敲入、激活、干扰等编辑功能而成为一种强大的遗传筛选工具,目前已在各类细胞系和小鼠及斑马鱼等多种动物模型中得到大规模运用。利用CRISPR系统构建基因组文库进行高通量筛选,是研究疾病特别是肿瘤靶标基因的主要策略。本文就CRISPR/Cas9文库筛选技术的原理和发展,脱靶效应的改进方案,文库筛选的基本流程以及近年来该技术在肿瘤研究中的应用进行总结。     

医院获得性耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌感染的调查及对策

笔者对我院2008-2009年耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)流行情况进行调查,并有针对性地采取措施,降低了MRCNS的医院感染发生率. 1 资料与方法 1.1 资料 2008年MRCNS医院感染患者51例(常规组),2009年MRCNS医院感染患者63例(干预组). 1.2 方法 干预措施包括启动MRCNS网络筛查、监控、报告流程;对患者执行接触隔离措施;加强探视者管理;建立暴发流行预警机制;强化对医护人员的宣传教育.     

西尼罗病毒前膜蛋白在果蝇细胞S2中的表达与鉴定

目的克隆西尼罗病毒(WNV)前膜蛋白(prM)基因,将其在果蝇细胞(S2)中表达,为制备研制诊断试剂所需的单克隆抗体奠定基础。方法以质粒WNV-CME为模板,PCR扩增获得prM基因,与T载体连接,测序正确后酶切,酶切产物与果蝇表达载体pMT/Bip/V5-HisC重组,重组质粒与pCoBlas共转染果蝇S2细胞,25μg/ml Blasticidin筛选获得抗性细胞,500μmol/L CuSO4溶液诱导表达,72h后收集细胞与细胞上清进行Western blot鉴定。结果酶切与测序结果表明成功构建重组表达载体WNV-prM-pMT,Western blot显示目的蛋白在果蝇细胞S2内稳定表达。结论在果蝇S2细胞内成功地稳定表达WNV prM蛋白,为下一步WNV单克隆抗体的制备奠定了实验基础。     

伤口分泌物涂片与实时荧光定量PCR对产气荚膜梭菌快速诊断的意义

目的比较涂片镜检查找革兰阳性粗大杆菌与实时荧光定量PCR这两种方法对快速诊断产气荚膜梭菌的意义。方法选取疑似气性坏疽且伤口分泌物涂片镜检发现革兰阳性粗大杆菌的患者16例,取其伤口分泌物进行实时荧光定量PCR及细菌培养。结果 16例涂片镜检查到革兰阳性粗大杆菌的患者中,有6例实时荧光定量PCR为阳性并培养出产气荚膜梭菌。结论与传统的涂片方法相比,实时荧光定量PCR方法能更准确,更灵敏地诊断产气荚膜梭菌。     

新疆伊宁市1306名7～9岁儿童六龄齿患龋率调查分析

目的了解新疆伊宁市7～9岁儿童第一恒磨牙(六龄齿)患龋率水平及其主要原因,为预防和治疗儿童龋病提供参考依据。方法选择1 306名7～9岁儿童作为调查对象,由接受过口腔健康调查培训的口腔专业医师使用常规口腔检查器械对龋病现况进行调查记录,按照不同年龄、性别、民族分为7、8、9岁组和民、汉男女童组,并对各组患龋率进行分析。结果 (1)伊宁市7～9岁儿童患龋率为29.94%,各年龄组患龋率分别为13.92%、28.30%、36.90%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)不同性别及不同民族儿童间患龋率差异均有统计学意义(P<0.05)。结论伊宁市7～9岁儿童六龄齿患龋率随着年龄增长而增加,女童患龋率高于男童,少数民族儿童患龋率高于汉族儿童。