辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF κB通路的分子变化

目的：探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NFκB信号通路的分子变化，以说明辛伐他汀是否依赖NFκB信号通路参与K562细胞凋亡发生。方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞，接种于18只BALB/cnu/nu裸小鼠皮下，构建移植瘤模型。随机分为3组，每组6只。对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml，两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml（0.05 mg）和0.4 ml（0.08 mg）。均隔日注射，连续6次。采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化，RTPCR检测K562细胞中NFκB信号通路IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的差异表达。结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡，且高剂量组凋亡率高于低剂量组（P<0.01）;不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的表达下调（P<0.01）。结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡，可能与NFκB通路基因的表达下调有关。     

病毒性肝炎联合诊断寡核苷酸芯片的临床应用性研究

目的：制备联合诊断乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）肝炎病毒寡核苷酸（Oligo）芯片,并进行系列优化及临床应用性研究。方法：首先利用软件Array designer 3.0对BLAST检索所得的HBV、HCV、HDV种属保守序列逐一分析,设计出60mer Oligo探针。用PixSys5500型基因芯片打印仪将设计好的探针打印到氨基化玻片上制备成基因芯片,并对杂交条件进行系列优化以适应临床血清标本的检测。结果：芯片杂交条件进行优化后,芯片检测的敏感性、特异性都大大增强,还缩短了检测时间;杂交结果显示,Oligo芯片检测HBV、HCV、HDV的敏感性、特异性分别为92.2%,85.7%,91.3%和96.0%,94.5%,98.0%。结论：制备的长链Oligo集合肝炎病毒检测芯片检测敏感性、特异性均佳,为下一阶段进行中试规模的临床血清样品检测做好了准备,同时也为集合更多种、不同亚型肝炎病毒联合检测芯片的制备打下了坚实的基础。     

疟疾诊断靶抗原的研究进展

疟疾是广泛流行于热带、亚热带及温带地区的一种重要虫媒传染病 ,极大地威胁着人类的健康。疟疾的早期诊断和早期正规治疗是 WHO和我国疟疾控制的研究重点 ,其意义在于不仅能够降低重症病人和死亡的发生 ,还能防止其传播 ,延缓疟原虫对抗疟药产生抗性[1 ] 。疟疾流行区由于熟练镜检技术人员及设备缺乏 ,仅依靠传统厚薄血膜镜检法已越来越不能适应当前疟疾诊断的需要[2 ,3 ] 。 2 0世纪 80年代以来随着分子生物学的发展而出现的基因诊断技术 (分子杂交[4] 、PCR[5] 、套式 PCR[6 ] 、荧光定量 PCR[7] 等 ) ,显示了较高的敏感性和特异性 …     

以史释理 以实证理——谈研究式教学法在高职高专思想政治课教学中的运用

从高职高专教学实际出发,论述＂以史释理,以实证理＂的研究式教学法在高职高专思想政治课教学中的运用,并结合教学内容提出例证。     

锌指蛋白ZNF652在乳腺癌组织和细胞中的高表达可促进乳腺癌的发生发展

目的 揭示锌指蛋白ZNF652在乳腺癌组织和细胞中的表达水平及其对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 利用TCGA数据库挖掘ZNF652在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异,分析ZNF652的表达与分子分型、病理类型、TNM分级和临床分期等临床病理特征的相关性;RT-qPCR和Western blot鉴定ZNF652在MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3、UACC-812和BT-474乳腺癌细胞系中的表达;通过慢病毒系统构建稳定表达ZNF652的乳腺癌细胞株,利用siRNA敲低ZNF652的表达;通过CCK-8实验和克隆形成实验分析过表达及敲低ZNF652对乳腺癌细胞增殖和集落形成能力的影响;通过Transwell细胞迁移、侵袭实验以及伤口愈合实验阐明过表达及敲低ZNF652对乳腺癌细胞体外迁移和侵袭的影响;采用免疫荧光实验明确ZNF652的亚细胞定位。结果 ZNF652在乳腺癌组织中表达显著上调（P<0.001）;对于不同乳腺癌分子分型,ZNF652在TNBC型乳腺癌组织中表达下调,而在HER2+型、Luminal A型及Luminal B型乳腺癌组织中表达升高（P<0.01或P<0.001）;除粘液癌外,ZNF652在不同病理类型乳腺癌组织中的表达均较癌旁组织升高（P<0.05）;高表达ZNF652与乳腺癌远处转移、恶性程度显著相关（P<0.01或P<0.001）;ZNF652在5种乳腺癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平均高于正常乳腺细胞（P<0.05或P<0.001）;过表达ZNF652促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,而敲低ZNF652后作用相反;ZNF652定位于细胞核。结论 ZNF652在乳腺癌组织和细胞中高表达,促进乳腺癌发生发展,有望作为乳腺癌诊断和治疗的潜在分子靶标。     

HBV多表位复合基因在NS-1细胞的表达

目的 研究HB4颗粒为呈现载体的阳V多表垃复合基因在哺乳动物细胞NS-l内的表达。方法 PCR扩增HBc 1-72aa及93-183aa编码序列并合成HBV多表位复合基因，定向克隆至pcDNA3．1( )。经双酶切及核苷酸序列测定等方法筛选阳性克隆。阳性质粒以Lipofetamine介导转染NS-l细胞，通过ELISA及间接免疫荧光等方法检侧细胞表达产物。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约890bp的HBc与HBV多表位复合基因的杂合基因。重组于成功转染NS-l细胞并表达HBc-Mep融合蛋白。结论 HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS-l内正确表达目的蛋白。为研究pHBc-Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。为后期检测核酸疫苗pHBcMep的细胞免疫效果提供靶细胞。     

miR-638在乳腺癌血清中的表达及其临床应用价值

目的评估miR-638在乳腺癌患者血清中的表达水平及其临床应用价值。方法以152例乳腺癌患者作为疾病组,102例体检健康者作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清中miR-638的表达水平,并比较血清miR-638在不同的乳腺癌病理分期、手术前后和化疗前后的表达水平差异;采用ROC曲线分析血清miR-638单独及其联合CEA、CA125、CA15-3等肿瘤标志物对乳腺癌的筛查效能,并采用Z检验进行统计学分析。结果在乳腺癌组中,血清miR-638的表达水平[3.6(1.3,10.5)]较对照组[79.0(52.5,120.8)]明显降低(P0.01);线性回归结果表明,化疗及病理分期是影响血清miR-638表达水平的重要因素;血清miR-638单独筛查乳腺癌时的ROC曲线下面积(AUC~(ROC))为0.954,当cut-off值为27.47时,其敏感性为94%,特异性为86.2%;miR-638与CEA、CA125、CA15-3联合筛查乳腺癌的AUC~(ROC)为0.978 8,当cut-off值为0.29时,其敏感性为95.4%,特异性为89.5%。两种方法的AUC~(ROC)差异无统计学意义(Z=1.68,P=0.091)。结论血清miR-638可能是潜在的乳腺癌筛查的分子标志物。     

Circ-0003910在HER2阳性乳腺癌中的表达、定位、生物学作用及蛋白质组学研究

背景与目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,2020年已成为全球新发病例最多的癌症。人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2,HER2）阳性型乳腺癌约占所有乳腺癌病例数的20%,是一种复发转移率高的分子分型。因此,探索HER2阳性型乳腺癌相关生物标志物具有十分重要的意义。本文旨在探讨circ-0003910在HER2阳性型乳腺癌组织和细胞中的表达水平和定位,阐明circ-0003910对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响,探索高表达circ-0003910对乳腺癌细胞蛋白质组学的影响。方法：通过高通量环状RNA（circular RNA,circRNA）芯片筛选在HER2阳性乳腺癌细胞中差异表达的circRNA,选择显著高表达的circRNA作为研究目标;RNA荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验检测circ-0003910的亚细胞定位;采用BaseScope实验分析circ-0003910在乳腺癌组织中表达水平及临床诊断意义;通过体外转染克隆质粒和siRNA构建过表达和敲低circ-0003910的乳腺癌细胞;采用transwell迁移和侵袭实验检测circ-0003910对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;通过TMT定量蛋白质组学技术,初步探索circ-0003910促进乳腺癌细胞迁移和侵袭的分子机制。结果：CircRNA芯片分析显示,在HER2阳性乳腺癌细胞和正常乳腺细胞中共筛选出1 843个差异表达的circRNA（fold change≥2,P<0.05）,其中上调的circRNA有845个,下调有998个。与正常乳腺上皮细胞相比,circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中的差异表达倍数为24.39。实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）实验结果显示,circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中表达水平高于其他分子分型乳腺癌细胞;BaseScope实验结果表明,circ-0003910分布于HER2阳性乳腺癌细胞的细胞质和细胞核,但主要定位于细胞质中。过表达circ-0003910促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移和侵袭;敲低circ-0003910抑制SK-BR-3乳腺癌细胞的迁移和侵袭。蛋白质组学鉴定结果显示,过表达circ-0003910后,共有197个蛋白表达发生改变,其中104个蛋白质上调,93个蛋白质下调。GO和KEGG富集分析提示,差异表达蛋白质参与细胞黏附分子合成和癌症中转录失调等重要生物学进程。结论：Circ-0003910在HER2阳性乳腺癌细胞中表达上调,能够促进乳腺癌细胞迁移和侵袭,可能是HER2阳性乳腺癌新的生物标志物和抗肿瘤转移治疗靶点。     

肺炎衣原体实时定量PCR检测方法的建立

目的:探讨实时定量PCR检测肺炎衣原体(chlamydia pneumonia,Cpn)的方法.方法:根据GenBank提供的肺炎衣原体基因序列,选取高特异性和保守型的区域进行引物设计,并建立实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)的检测方法.同时用肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒对Cpn引物的特异性进行分析.对呼吸道感染患者200个咽拭子样本和68个肺泡冲洗液样本进行检测,以荧光抗体检测法作对照,评价实时定量PCR检测Cpn的准确性.结果:Cpn PCR引物对肺炎支原体、肺炎双球菌、流感病毒、副流感病毒以及腺病毒均显示阴性,对Cpn显示为阳性,特异性良好;荧光实时定量PCR技术检测的准确性优于荧光抗体检测法.结论:荧光实时定量PCR技术检测Cpn体灵敏度高、周期短,可作为临床诊断Cpn的手段.