复方斑蝥胶囊对中晚期结直肠癌患者转化生长因子-β_1和肿瘤微血管密度影响的前瞻性临床研究

目的观察复方斑蝥胶囊对中晚期结直肠癌患者转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、肿瘤微管密度(MVD)的影响。方法将46例中晚期结直肠癌患者随机分为2组,每组各23例。对照组采用FOLFOX4化疗方案治疗,治疗组在对照组治疗基础上联合复方斑蝥胶囊治疗,分别检测化疗前及化疗1、2、3个周期后2组患者血清TGF-β_1水平及MVD变化,并对2组患者近期临床疗效进行评价。结果 2组化疗后第1、2、3周期,血清TGF-β_1水平及MVD均较本组化疗前降低,且治疗组低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);近期综合临床疗效统计显示,治疗组客观反应率(ORR)和疾病控制率(DCR)均高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论复方斑蝥胶囊能下调结直肠癌组织中的TGF-β_1的表达、降低肿瘤组织MVD,抑制肿瘤生长、浸润,其作用机制可能与肿瘤血管的抑制和癌细胞的死亡有关。     

千金藤素通过调节miR-150和miR-182促进A549细胞凋亡

目的:探讨千金藤素对人肺癌A549细胞生长的影响及可能机制。方法:千金藤素处理A549细胞后,采用MTT法检测细胞生长抑制率;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;real-time PCR检测微小RNA(miR)-150、miR-182、p53 mRNA和FOXO1 mRNA的表达变化;通过软件预测miR-150和miR-182的下游靶基因;采用Western blot法分析细胞中p53和FOXO1蛋白表达的变化。结果:在千金藤素作用下,A549细胞生长受到抑制,凋亡率明显增加;千金藤素作用后,细胞内miR-150和miR-182的表达水平显著下降;在10μmol/L的千金藤素作用后,细胞内p53和FOXO1的表达水平升高,而在30μmol/L时,细胞内p53和FOXO1的表达水平降低;在细胞内转染miR-150后,p53表达明显减少,而转染miR-182后,FOXO1表达显著降低。结论:千金藤素能够抑制A549细胞生长,促进A549细胞凋亡,可能是通过抑制miR-150和miR-182表达发挥作用;而miR-150和miR-182可能分别通过下调p53和FOXO1的表达发挥作用。     

微量元素与儿童健康关系调查分析

微量元素与健康的研究是现代生命科学的重要课题,各种元素是构成机体并决定生命活动的基本要素[1] .微量元素参与生物体代谢的调控、酶的合成、呼吸链的组成、免疫系统的生长发育,是生命活动及繁衍等不可缺少的元素.儿童体内某种元素摄入不足时,就会引起机体生物学功能障碍,进而影响生长发育,甚至产生疾病.为了解儿童微量元素与健康关系,我们调查了3～6岁儿童5种微量元素水平,并对其分析,现将结果报告如下.     

丙戊酸钠对癫痫大鼠海马组织中Homer1a、mGluR5表达的影响

目的 探讨在戊四氮(pentetrazole,PTZ)致癫痫大鼠海马组织中Homer1a、mGluR5的表达以及丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)对其表达的影响。方法 将SD大鼠分为正常对照组(NC)、PTZ组和VPA干预组。PTZ腹腔注射达到点燃标准,腹腔注入VPA 15 mg/(kg·d),对致痫大鼠进行治疗;30 min后,腹腔注射PTZ诱发癫痫发作;两周后分别于致痫大鼠发作后8 h、24 h处死大鼠;应用实时定量PCR(realtime-PCR)、Western blot技术检测海马组织Homer1a、mGluR5的表达。结果 1)NC组无癫痫发作,VPA干预组癫痫发作较PTZ组减轻;2)PTZ组Hmoer1a于癫痫发作后8h明显升高,24 h后则明显降低;VPA干预组Homer1a表达于癫痫发作后8 h及24 h均升高;3)PTZ组mGluR5表达于癫痫发作后8 h无显著变化,而24h后明显升高;VPA干预组mGluR5表达于癫痫发作后8 h无显著变化,24 h后明显降低。 结论 1)丙戊酸钠可明显改善致痫大鼠发作表现;2)Homer1a 在癫痫发作后早期短暂性升高;mGluR5 在癫痫发作后早期无明显变化,而发作后24 h升高;3)丙戊酸钠可能通过调节Homer1a表达进一步影响mGluR5而发挥抗痫作用。     

K-ras反义核酸抑制肺腺癌细胞A549的生长

目的: 探讨K-ras反义核酸抑制肺癌生长的机制。方法: 应用Western blotting检测K-ras基因在6例肺腺癌标本和A549细胞中的表达;构建K-ras基因的反义表达载体(命名为antisense-K-ras-pcDNA3.1),转染后,MTT法测细胞的生长曲线,Annexin V检测细胞凋亡;Western blotting检测cyclin A、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK4、P53、Rb和caspase-3的表达。结果: 在A549细胞和6例肺腺癌标本中,A549细胞和4例标本中K-ras基因高表达;MTT结果显示从第4 d开始,转染K-ras反义核酸的细胞生长明显受到抑制,而且细胞凋亡现象较明显;Western blotting显示转染反义K-ras基因的细胞中cyclin A、cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达降低,而caspase-3、P53和Rb的表达升高。结论: K-ras基因反义核酸能够抑制细胞生长,可能与cyclin A、cyclin D1、cyclin E、CDK2和CDK4的表达降低和caspase-3、P53、Rb的表达升高有关。     

顺铂致A549细胞miR-16与bcl-2表达的变化

目的研究顺铂作用于A549细胞后,miR-16和bcl-2的表达变化,并探讨两者的相关性。方法采用MTT法测定顺铂对A549细胞的抑制率、锥虫蓝拒染法检测细胞凋亡率,倒置显微镜观察细胞形态,确定合适的药物浓度;然后提取细胞中的miRNA,用实时定量PCR技术定量分析miR-16在对照组细胞和加药组细胞中的表达变化;通过microRNA_org等分析软件预测miR-16的下游调控基因;采用Western blot方法分析细胞中bcl-2蛋白的表达变化。结果在顺铂诱导作用下,A549细胞凋亡率明显增加; miR-16在顺铂作用后的细胞中表达显著升高,而bcl-2蛋白显著低表达。结论顺铂可以促使肺癌A549细胞凋亡;miR-16具有抑癌基因活性,能负调控bcl-2蛋白的表达,参与顺铂致A549细胞死亡的作用。     

有效EDRF启动子驱动GFP基因表达的研究

目的 通过克隆不同长度红系分化相关因子(EDRF)基因启动子,驱动GFP基因的表达,探讨EDRF启动子的特点.方法 利用PCR扩增5种不同长度的EDRF启动子(长度分别为697、496、484、372、283 bp),并将启动子分别克隆至pcDNA-GFP栽体上,构建驱动GFP表达载体后,转染NIH3T3和MEL细胞,采用荧光显微镜、流式细胞术比较不同长度启动子的活性.结果 经荧光检测,在NIH3T3和MEL细胞中,372 bp长的启动子(EDRF基因的-116～+256 bp区)驱动GFP荧光强度最亮、阳性细胞最多.FACS分析发现,在MEL细胞中,372 bp启动子组GFP细胞的阳性率明显高于其他长度启动子组(P<0.01);在NIH3T3细胞中,372 bp启动子组GFP细胞的阳性率为(31.0±0.7)%,高于其他长度启动子组(P<0.01),但其他长度启动子组GFP阳性率均高于20%,说明在NIH3T3细胞中EDRF启动子驱动GFP表达的特异性差,而在MEL细胞(红细胞系)中该启动子驱动GFP表达的特异性较强.结论 EDRF启动子(-116～+256)bp区为最有效的驱动基因表达区域,可以用于驱动基因表达的后续研究.     

miRNA在去甲斑蝥素致K562细胞凋亡中的作用研究

目的: 探讨miRNA在抗肿瘤药物去甲斑蝥素(DMC)诱导K562细胞凋亡过程中的作用。方法: DMC诱导细胞凋亡后,通过基因芯片技术分析miRNA表达改变,进一步用RT-PCR和定量PCR验证部分miRNA的表达变化;并应用基因信息软件分析miRNA相关的基因,ELISA验证相关基因表达情况。结果: DMC致凋亡组,基因芯片技术检测到290多种miRNA的表达发生明显改变,用RT-PCR和定量PCR分析结果示:在DMC处理组,miR-16、miR-34a和miR-125等表达增高1.5倍以上,而miR-106和miR-150的表达降低60％以上。通过microRNA TargetScan和miRanda软件分析发现癌基因( bcl-2、E2F1、E2F3 )和抑癌基因( RB1、p53 )表达可能受上述miRNA表达的调控。 ELISA结果示:在DMC组,RB1和P53蛋白表达显著增高,而Bcl-2、E2F1 和E2F3蛋白的表达显著降低。结论: DMC能诱导K562细胞发生凋亡,并能引起细胞内miRNA及相关基因的表达发生改变。     

CNV-seq技术在流产组织遗传病因学中的临床应用价值

目的利用CNV-seq技术对流产组织或绒毛进行染色体异常分析,探讨早期流产和晚期流产患者的遗传学病因,为再生育提供指导。方法收集2015年7月—2021年8月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行流产手术患者的流产物绒毛或肌肉组织,采用CNV-seq技术进行染色体异常检测。结果检测样本622例,共检出染色体异常369例(59.3%),包括常染色体非整倍体210例(33.8%),性染色体非整倍体60例(9.6%),染色体微缺失/微重复83例(13.3%),非整倍体合并微缺失/微重复16例(2.6%)。早期流产和晚期流产患者染色体异常比例分别为62.5%(324/518)和43.3%(45/104)。早期流产患者常染色体非整倍体发生率(37.3%)高于晚期流产患者(16.3%),差异有统计学意义(χ^(2)=19.50,P<0.05),早期流产患者性染色体非整备体、染色体微缺失/微重复发生率(9.8%、12.4%)与晚期流产患者(8.6%、18.3%)比较,差异均无统计学意义(χ^(2)=0.47、2.62,均P>0.05)。所有流产胚胎中共检测出83例CNVs,其中“致病性”35例(42.2%)、“可能致病性”4例(4.8%)、“临床意义不明”41例(49.4%)、“可能良性”和“良性”3例(3.6%),35例“致病性”CNVs中发现22例微缺失/微重复综合征。结论利用CNV-seq技术进行流产组织的遗传学病因分析可以明确流产原因,为遗传咨询提供依据,为再生育提供指导。     

基因组拷贝数变异测序技术联合染色体核型分析在产前诊断中的应用价值

目的 探讨基因组拷贝数变异测序技术(CNV-seq)联合染色体核型分析在产前诊断中的应用价值。方法 选取2017年4月—2022年3月在聊城市东昌府区妇幼保健院进行产前诊断的1 826例孕妇为研究对象，抽取羊水进行染色体核型分析及CNV-Seq,比较分析两种方法的检测结果。结果 1 826例羊水标本中，染色体核型分析异常检出率为8.21%(150/1 826),CNV-seq异常检出率为16.59%(303/1 826),两种方法联合应用的异常检出率为17.80%(325/1 826)。染色体核型分析与CNV-seq均检出数目异常93例；染色体核型分析检出结构异常34例，其中平衡性结构异常16例(CNV-seq未检出),非平衡性结构异常18例(CNV-seq也检出);CNV-seq额外检出168例染色体拷贝数变异(CNVs)。结论 CNV-seq与染色体核型分析联合检测可以提高染色体异常的检出率，降低出生缺陷发生率，还可以对结构异常片段进行精确定位，为临床遗传咨询提供更精准的信息。