KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞 HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究

目的：探讨大鼠KLF4基因沉默,对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒（pGPU6-1,pGPU6-2,pGPU6-3）以及阴性对照。采用实时荧光定量RT-PCR（ Real-time RT-PCR ）和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默最好的干扰质粒,将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3,转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA和蛋白的表达。 Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照,用2－ΔΔCt法进行分析计算。 western blot的方法以β-actin蛋白为内参照,进行分析。结果 Real-time RT-PCR结果显示, pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0敂．358±0．038,0．298±0．041和0．478±0．048;而MMP-13 mRNA的表达则上升为1．712±0．034。 Western Blot检测中,pG-PU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,以β-actin为内参照,Ⅰ型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0．326±0．051,0．283±0．074和0．331±0．039;而MMP-13蛋白的表达则上升为1．273±0．038。结论 KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,其机制与增加MMP-13表达,而抑制TIMP-1的表达有关。     

糖原合成酶激酶3β对卵巢癌紫杉醇耐药性的影响及机制研究

目的探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)对卵巢癌紫杉醇耐药性的影响及机制。方法运用氯化锂(Li Cl)增加卵巢癌细胞内失活性GSK-3β的表达,MTT法测定紫杉醇的半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测p-GSK-3β(ser9)的表达量,免疫荧光观察其细胞内定位情况。结果 Li Cl 20mmol/L处理1 h后,24、48、72 h SKOV3细胞紫杉醇的IC50从(10.11±0.87)、(1.07±0.17)、(0.03±0.01)μg/m L增加至(11.56±0.96)、(1.74±0.24)、(0.06±0.01)μg/m L,除24 h外差异均有统计学意义(P<0.05)。Li Cl处理后SKOV3细胞内p-GSK-3β(ser9)的平均荧光强度由(661.67±37.63)增加到(841.67±41.53),差异有统计学意义(P<0.05)。Li Cl处理后SKOV3细胞核内p-GSK-3β(ser9)表达水平上调。结论 GSK-3β失活性磷酸化水平的增加,尤其是细胞核内表达水平的上调可导致卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的增强。     

天然产物多级膜与高压差提取器联用的设计与开发

天然产物高压差提取分离浓缩器的核心技术在于多级膜与高压差提取器的联用设计。它是通过合理的结构设计、流程与自控设计以及排污和安装设计,将高压差提取、微滤澄清、超滤分离、纳滤或反渗透浓缩、在线清洗、过程自控等多技术单元进行组合,形成完整的技术及成套装备,可较好地实现中药提取物全过程低温（20℃以下）制备,达到洁净区流程化生产的目的。     

血清NAG在肝病诊断中的应用

目的:观察血清N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性对临床上几种肝病诊断的价值。方法:用酶法检测50例健康体检者和62例肝病患者(慢性活动性肝炎组,肝硬化组,原发性肝癌组和急性肝炎组)血清中NAG的活性。结果:4组肝病患者血清NAG活性分别为20.7±6.0 V·L-1(P<0.01),22.7±8.7 V·L-1(P<0.01),18.9±6.0 V·L-1(P<0.05),19.3±5.4 V·L-1(P<0.01),均显著高于健康对照组(14.3±2.9)。结论:血清NAG活性测定对临床各种肝病的诊断有价值。     

手法疏通辅助治疗哺乳期急性乳腺炎

母乳是婴儿最理想的食品,但是许多产妇哺乳早期常因乳头皲裂、感染,乳腺管阻塞或乳房过度充盈等导致乳腺炎发生,甚至发生乳腺脓肿,不仅影响正常的哺乳,而且危及产妇的生命.我科对117例急性乳腺炎患者采取手法疏通治疗,取得较好效果,报告如下.     

N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂神经毒性研究进展

谷氨酸介导的兴奋性神经毒性对多种神经性损伤和精神疾病的发生发展起着极其关键的作用,因而谷氨酸受体拮抗剂成为研究的热门,对其最主要的亚型N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体及其拮抗剂的研究更是成为重中之重.目前NMDA受体拮抗剂在临床上应用的范围越来越广,但其中大多数药物却显示有神经保护和神经毒性的双重作用.本文综述临床常用NMDA受体拮抗剂的神经毒性研究进展,说明相关神经毒性机制.     

干姜中五个新的姜辣素类化合物

运用Diaion HP-20、Sephadex LH-20、硅胶、半制备高效液相等多种色谱分离技术分离纯化研究干姜中化学成分,利用理化性质及MS和NMR波谱学技术鉴定了5个姜辣素类化合物:4-(2-丁基-6-甲基-4H-吡喃-4-基)-2-甲氧基苯酚(1)、4-(2-己基-6-甲基-4H-吡喃-4-基)-2-甲氧基苯酚(2)、1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)十三烷-3,5-二醇(3)、[10]-gingerdiol (4)和1-[1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3-氧代-5-基]吡咯烷-2-酮(5a、5b),化合物1～3、5a、5b均为新化合物。     

姜皮中两个新的单萜类化合物

运用Diaion HP-20、MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20、ODS、硅胶和半制备高效液相等多种色谱分离技术分离纯化研究姜皮中的化学成分。通过理化性质和波谱数据鉴定了7个萜类化合物:(4R,6S)-1-(羟甲基)-5,5-二甲基二环[3.1.1]庚-2-烯-4-醇(1)、4-(羟甲基)-1-异丙基环己-2-烯-3,4-二醇(2)、3,5,6-trihydroxy-7-megastigmen-9-one(3)、3-(3-hydroxybutyl)-2,4,4-trimethyl-2,5-cyclohexadien-1-one (4)、angelicoidenol (5)、grasshopper ketone (6)和dihydrophaseic acid (7),其中化合物1、2为新化合物,命名为:(4R,6S)-1-(羟甲基)-5,5-二甲基二环[3.1.1]庚-2-烯-4-醇和4-(羟甲基)-1-异丙基环己-2-烯-3,4-二醇,化合物3～7均为首次从该植物中得到。     

GnRH/M2融合蛋白致敏DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的抑制

目的:制备促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)与M2的融合蛋白(GnRH/M2),研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用.方法:构建表达载体pET28a-ansB-C-GnRH3-hinge-MVP-M2质粒,该质粒转化的工程菌在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵体形式表达,经超声破碎、洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2释放出来,并通过DEAE-52阴离子交换层析进行分离.将此融合多肽致敏DC获得DC疫苗.构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤模型,按接种疫苗不同,分为:环磷酰胺组(CTX)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC组(GDC)、肿瘤细胞裂解物致敏DC组(BDC)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+环磷酰胺组(GDCTX)、肿瘤细胞裂解物致敏DC+环磷酰胺组(BDCTX)和生理盐水组(NS),观察GnRH/M2疫苗对模型小鼠的移植瘤生长、CTL杀伤能力和T细胞增殖的作用.结果:成功构建pET28a-ansB-C-GnRH3-hinge-MVP-M2质粒并高效表达融合蛋白.GDC组移植瘤生长明显慢于NS组(P＜0.05),且与BDC组相似(P ＞0.05);GDCTX组抑瘤效果虽进一步提高,但与CTX组相比差异无统计学意义(P＞0.05).各实验组对B16F10细胞的杀伤作用和对T细胞增殖作用均优于阴性对照组(P ＜0.05或P＜0.01),且GDC组与BDC组间差异不显著(P＞0.05).结论:初步证明融合多肽GnRH/M2致敏的DC疫苗能有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长.     

澳门儿童家庭被动吸烟状况及其影响因素

目的了解澳门儿童家庭被动吸烟状况, 探讨其危险因素, 为儿童被动吸烟干预措施的制定提供科学依据。方法采用方便抽样方法抽取澳门花地玛堂区875名6～14岁儿童家长, 调查儿童家庭被动吸烟状况, 采用非条件logistic回归分析方法分析影响儿童家庭被动吸烟的危险因素。结果在回收的875份有效问卷中, 儿童家庭总被动吸烟率为37.0%, 儿童每日被动吸烟率为28.3%, 不同性别儿童被动吸烟率差异无统计学意义(χ²=0.326, P>0.05);父亲吸烟率高达43.7%, 母亲和祖父母或外祖父母吸烟率分别为3.8%、8.3%;父亲吸烟是导致儿童家庭被动吸烟最主要的危险因素(OR=34.061, 95%CI=21.819~53.173), 而父亲文化程度(OR=0.606, 95%CI=0.513~0.716)和母亲年龄(OR=0.973, 95%CI=0.950~0.997)是父亲吸烟的保护因素, 与双亲家庭相比, 单亲母亲的吸烟率较高(OR=8.137, 95%CI=3.209~20.637)。结论澳门儿童被动吸烟率较高, 父亲吸烟是儿童家庭被动吸烟最主要的危险因素。提高父亲的文化程度和自身修养, 建立良好的家庭关系有益于降低父母的吸烟率, 从而有效降低儿童家庭被动吸烟率。