肠道菌群在肝癌发生发展中的作用

肠道菌群在维持肠道和机体的平衡方面扮演着至关重要的角色,两者之间形成一种共生关系,共同维护着机体的健康状态。肠道微生物群的紊乱与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）的发生发展密切相关,其可能的机制包括激活Toll样受体4、影响代谢产物水平、产生内毒素以及促进炎症纤维化的进展等,这些机制共同参与了肝癌的发生和发展。目前有证据表明可以通过改善肠道菌群紊乱来辅助肝癌治疗,包括益生菌、免疫治疗、粪便微生物移植和抗生素等方法。本文将探讨肠道微生物群导致HCC发生的多种机制,以及针对肠道微生物群失调所采取的治疗措施。     

原发性肝癌合并肋骨转移三联方案强效缩瘤1例

<正>1 病例介绍患者,男,43岁,因“胸背部、左侧季肋区疼痛20余天”于2022年3月3日入我院。患者自诉因腰背部疼痛无法入睡,口服“阿片类”止痛药头晕严重,无法耐受,稀便6～7次/d。既往有“银屑病”病史多年。2022年3月4日实验室检查：甲胎蛋白(AFP)>120 000 ng/ml、HBV DNA 2.27×10⁷ IU/ml、HBsAg 3 674.997 S/CO 、HBeAg 8.170 S/CO、AST 188.6 U/LALT 325 U/L。     

Hiwi基因表达对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响

目的探讨Hiwi基因表达对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。方法使用western blot法分析62例乳腺癌患者的病理组织标本和24例确诊乳腺组织功能正常无癌变现象的志愿者的组织标本的Hiwi表达水平。结果 Hiwi在乳腺癌组织中的表达水平(1.708±0.065)显著高于正常乳腺组织中的表达水平(0.706±0.044),P0.05。正常表达组的穿膜乳腺癌细胞数为(73.55±6.43)个,显著高于下调表达组的穿膜乳腺癌细胞数(46.71±6.15)个,P0.05。结论 Hiwi基因表达水平与乳腺癌癌细胞侵袭和转移能力正相关。Hiwi基因有可能成为良好的乳腺癌检测指标和治疗靶点。     

StealthTMRNAi沉默人肝癌细胞Bcl-2表达抑制体外移植瘤生长的研究

目的探讨StealthTMRNAi抑制Bcl-2基因表达对体内移植瘤生长的影响。方法通过合成的人肝癌Bcl-2基因干扰序列转染入肝癌细胞内并从皮下移植到裸鼠，免疫组化检测瘤组织中Bcl-2蛋白的表达。结果荧光显微镜下显清晰的绿色荧光为转染成功细胞；RT．PCR检测转染组Bcl-2基因mRNA的表达水平下调（P〈0．01）。转染StealthTMRNA裸鼠皮下移植肿瘤生长缓慢，与对照组瘤体积比较差异有显著性（P〈0．01）；采用免疫组化法检测注射StealthTMRNA组，Bcl-2蛋白的表达下调（P〈0．01）。结论StealthTMRNAi可抑制Bcl-2基因表达，对移植瘤的生长有抑制作用。     

复方苦参注射液与5-氟尿嘧啶对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨复方苦参注射液与5-氟尿嘧啶对大肠癌LoVo细胞生长抑制及诱导凋亡的影响。方法 台盼蓝染色法测定药物对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系，用荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳对细胞凋亡进行检测。结果台盼蓝实验表明，经40μg／L复方苦参注射液单独处理细胞，LoVo细胞增殖的抑制率24h，12．8％；48h，25．4％；72h，42．2％。12．5mg,／L5-Fu单独处理的LoVo细胞，其增殖抑制率24h，16．3％；48h，23．1％；72h，29．3％；而当两者合用时，对LoVo细胞增殖的抑制率24h，26．8％；48h，72．3％；72h．84．6％。复方苦参注射液和．5-Fu对LoVo细胞的生长均有抑制作用，并诱导发生凋亡。实验范围内其细胞凋亡成时间与剂量依赖关系。并且复方苦参注射与低浓度的化疗药物有协同作用，可产生较强的抑制细胞增殖的作用。结论 复方苦参注射具有直接的抗肿瘤作用，并且具有增强5-Fu化疗药物作用的功效。     

抑制survivin 表达对肝癌细胞阿霉素化疗敏感性的影响

目的:探讨survivin基因沉默对人肝癌耐药株阿霉素化疗敏感性的影响.方法:针对人survivin基因设计并合成3条siRNA序列,分别用脂质体法转染人肝癌BEL-7402细胞(3组).以未转染的BEL-7402细胞为对照,分别用RT-PCR法,免疫细胞化学技术及MTT法检测各组细胞survivinmRNA与蛋白的表达,及对阿霉素敏感性.结果:与对照组比较,各转染组细胞survivin mRNA与蛋白的表达均明显降低(均P＜0.05)；对照组细胞对阿霉素的IC50值为(20.60±2.86) μg/mL,各转染组细胞对阿霉素的IC50值分别为(11.53±1.46) μg/mL,(14.13±1.82) μg/mL,(15.53±0.46) μg/mL,与对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论:抑制survivin基因的表达能增加BEL-7402细胞阿霉素化疗敏感性.     

脱氧核酶抑制COX-2基因表达并促进人肝癌细胞的凋亡

目的探讨利用脱氧核酶切割环氧化酶-2（COX-2）mRNA来抑制其基因表达以及对人肝癌细胞凋亡的影响。方法合成针对COX-2基因的“10～23”型脱氧核酶及其类似物，提取人肝癌细胞总RNA在胞外切割COX-2mRNA，检测其胞外切割活性；转染肝癌细胞，检测其在细胞内的切割活性及对细胞凋亡的影响。用RT-PCR检测COX-2和凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA水平，用荧光免疫方法测定相应的蛋白水平。结果非修饰脱氧核酶DzT和修饰的脱氧核酶DzTi（在DzT的3′末端添加倒位连接的T碱基）在胞外切割反应中能够有效地切割COX-2mRNA；在转染进入肝癌细胞后，DzTi比DzT显示更强的切割活性，显著地下调细胞内COX-2蛋白水平（P〈0.01）和bcl-2蛋白水平（P〈0.05），上调bax蛋白的表达（P〈0.01），抑制肝癌细胞的生长（P〈0．05）。脱氧寡核苷酸DzT′和DzTi′是由对DzT和DzTi的催化区进行碱基替换而成，在胞外和胞内均不能切割COX-2mRNA和促进肝癌细胞的凋亡。结论脱氧核酶能够有效切割COX-2mRNA，抑制COX-2蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡，有可能作为COX-2抑制剂用于医学临床。     

靶向bcl-2基因StealthTM RNA干扰诱导肝癌细胞凋亡的作用

目的 应用RNA干扰技术,构建靶向bcl-2基因StealthTM RNA,转染入人肝癌细胞株,探讨RNA干扰诱导人肝癌细胞凋亡的机制.方法 确定并合成3对人肝癌bcl-2基因干扰序列;脂质体法转染入肝癌细胞株内;荧光显微镜下观察转染细胞并计算转染率;倒置显微镜下观察转染前后细胞形态学的改变;SP免疫细胞化学技术检测StealthTM RNA处理前后细胞bcl-2蛋白表达变化;流式细胞术检测StealthTM RNA干扰对癌细胞凋亡和周期的影响.结果 各组转染成功,荧光镜下显清晰的绿色荧光;各转染组转染率与时间有关,各组48 h的转染率最高(P＜0.01);转染组间StealthTM RNA Ⅰ组的转染效率最高(P＜0.01);倒置显微镜下观察见转染后见部分细胞边缘圆,折光度降低,细胞增殖减慢且易脱落;未转染组细胞呈上皮性贴壁生长,生长旺盛.免疫细胞化学显示,StealthTM RNA干扰后各转染组发现细胞的bcl-2表达减弱,与未转染组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术结果示,各转染组细胞凋亡率明显升高,并出现凋亡峰,StealthTM RNA Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的凋亡率分别为(27.87±4.51)%、(24.50±0.89)%和(26.03±0.57)%,与未转染组细胞凋亡率(3.20±1.71)%,差异有统计学意义(P＜0.01).各转染组细胞发生显著的细胞周期阻滞,表现为S期细胞明显减少,G0/G1细胞明显增多.结论 靶向bcl-2基因StealthTM RNA成功的转染人肝癌细胞中,bel-2蛋白表达受抑制,并明显的诱导癌细胞发生凋亡.     

脱氧核酶抑制Bcl-2基因表达诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究利用脱氧核酶抑制Bcl-2表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响.方法 合成针对Bcl-2基因的“10～23”型脱氧核酶及其类似物;转染入肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Bcl-2mRNA的切割作用;荧光免疫方法测定脱氧核酶对Bcl-2蛋白表达的影响;流式细胞仪检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响.结果 “10 ～ 23”型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)在胞内能有效地切割Bcl-2 mRNA,DzTi比DzT的切割活性显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著地下调细胞内Bcl-2蛋白水平(P＜0.01),抑制肝癌细胞的生长(P＜0.05).流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰,与对照组细胞及脱氧寡核苷酸DzT和 DzTi凋亡率差异有统计学意义(P ＜0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降.结论 脱氧核酶可以有效切割Bcl-2 mRNA,抑制Bcl-2蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡.     

大鼠肝类固醇激素和异质素受体基因Nr1i2过表达载体的构建和表达

目的 构建类固醇激素和异质素受体(SXR)基因Nr1i2过表达质粒,并通过HEK-293细胞系验证其表达.方法 大鼠肝组织中的总RNA逆转录后将含相应酶切位点的引物扩增到Nr1 i2编码框,并将Nr1i2片段亚克隆至pcDNA3.1(+),同时对其进行酶切和测序鉴定,挑选pcDNA3.1(+)-Nr1i2转染至293细胞系中,48 h收集细胞进行荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),72 h后Western blot法检测.结果 成功扩增Nr1i2编码区,并将其克隆至载体pcDNA3.1中.HEK-293细胞系、pcDNA-3.1(+)、pcDNA3.1(+)-Nr1i2中SXR的FQ-PCR结果分别为1.00±0.09、4.88±0.94、473 274.04±28 784.24,后者分别与前两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建Nr1i2过表达载体,并在HEK-293细胞中成功表达.