同型半胱氨酸加重大鼠脑出血：与促进血肿周围细胞氧自由基产生及脑出血后的细胞凋亡相关？

摘要 背景：目前公认同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy是脑血管疾病的独立危险因素之一,其在脑血管疾病中的作用日益受到重视。 目的：探讨实验性脑出血后Hcy的损伤作用机制,并为预防及治疗脑出血提供实验理论基础。 设计、时间及地点：开放性实验。实验于2007-04/2008-04在泸州医学院附属医院分子生物实验室完成。 材料：健康雄性SD大鼠75只,体重在280～320g,鼠龄5～7月,由中国医学科学院实验动物研究所提供（动物质量合格证号：SCXK（京）2007-2008）;原位凋亡检测试剂盒由美国Roche公司提供、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）测试盒由南京建成生物工程研究所提供;同型半胱氨酸(Hcy)由美国Sigma公司提供、1%戊巴比妥钠由泸州医学院药理教研室提供粉剂并于实验前配制。 方法：应用立体定向技术,将自体不凝血注入大鼠壳尾核制备脑出血模型,SD大鼠（n=75）随机分为假手术组(n=25)、ICH组(n=25)、Hcy组(n=25),Hcy组于术后30min分别予血肿同侧颅内直接注射Hcy,按断头取脑时间各分为6h、12h、24h、72h、1w 5个亚组,每亚组5只动物,采用Bederson标准测定神经功能障碍,干湿重法检测脑含水量,TUNEL原位染色法标记细胞凋亡,显微镜下计数阳性细胞,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,数据用SPSS13.0统计分析。 主要的观察指标：观察同型半胱氨酸(Hcy)对脑出血模型大鼠神经功能障碍、脑含水量、血肿周围神经细胞凋亡、超氧化物歧化酶(SOD)活性的表达、丙二醛(MDA) 含量的变化等表达的影响。 结果：（1）与假手术组比较,Hcy组神经功能障碍评分﹑SOD活性均明显下降（P<0.05）,脑含水量、MDA含量明显增高（P<0.05）;与ICH组比较,Hcy组神经功能障碍评分、脑含水量差异无统计学意义(P>0.05),SOD活性、MDA含量12h、24h、72h时间点差异有统计学意义(P<0.05)。（2）假手术组偶可见TUNEL细胞表达,ICH组和Hcy组6h在血肿周边可见少量TUNEL染色阳性细胞数出现,24h增高明显,72h达到高峰,在1w时仍可看到较多表达,各观察时间点与假手术组比较差异均有统计学意义（P<0.05)。Hcy组升高更为明显,与ICH组比较,12h、24h、72h时间点差异有统计学意义(P<0.05)。（3）ICH组和Hcy组各观察时间点神经功能障碍评分与相应时点血肿周围脑组织含水量呈明显负相关(r＝-0.714,P＝0.000<0.05;r＝-0.681,P＝0.000<0.05);与SOD活性呈明显正相关(r＝0.704,P＝0.000<0.05;r＝0.641,P＝0.001<0.05);与MDA含量呈明显负相关(r＝-0.696,P＝0.000<0.05;r＝-0.655,P＝0.000<0.05)。ICH组和Hcy组术后各观察时间点血肿周围脑组织含水量与相应时点血肿周围脑组织SOD活力呈明显负相关(r＝-0.448,P＝0.025<0.05;r＝-0.612,P＝0.001<0.05),与MDA含量呈明显正相关(r＝0.542,P＝0.005<0.05;r＝0.684,P＝0.000<0.05)。 结论：自体血注入法制作大鼠脑出血模型方法较为简单,成功率较高。无论脑出血大鼠是否应用Hcy干预,均出现出血后3天脑水肿最明显,SOD活性明显降低,MDA含量明显升高,细胞凋亡达到峰值。脑出血大鼠应用Hcy干预后发现Hcy并未明显引起脑出血后脑水肿加剧和神经功能缺损,考虑脑出血后脑水肿形成由多种因素综合作用,可能与Hcy只能作用于其中部分因素或者存在后期累加效应有关。脑出血大鼠应用Hcy干预后发现Hcy可以促进氧自由基产生,同时加重神经元的损伤,促进脑出血后的细胞凋亡,进一步证实Hcy为脑血管疾病的独立危险因素之一。为预防及治疗脑出血提供了实验理论基础。     

人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活和分化

背景：神经干细胞移植可明显改善受损的神经功能,但在体内外多种因素的影响下,移植的神经干细胞其分化数量和分化方向受到限制。 目的：观察人胚神经干细胞植入大鼠脑梗死区后的存活、迁移和分化情况。 设计、时间及地点：细胞学体内观察,于2007-04/2008-04在泸州医学院附属医院分子生物实验室完成。 材料：SD雌性大鼠30只,由中国医学科学院实验动物研究提供。流产胎儿由泸州医学院附属医院妇产科提供。 方法：取流产胎儿大脑皮质,剪碎后消化离心,过滤后取沉淀细胞重新悬浮,加入含成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、白血病抑制因子的DMEM/F12培养基,体外培养获得人胚神经干细胞。30只大鼠通过结扎颈外动脉建立脑梗死模型,行走时向右侧转圈者为成功模型,剔除5只无上述明显症状的失败模型鼠。于造模后24 h,以前囟尾侧0.8 mm,中线右外侧1.2 mm为注射点,每只大鼠移植行BrdU标记的1×109 L-1人胚神经干细胞悬液10 μL,深度为硬脑膜下3.0~3.2 mm。 主要观察指标：免疫组织化学及免疫荧光染色观察植入的人胚神经干细胞在脑梗死区的存活、迁移和分化状态。 结果：人胚神经干细胞体外培养48 h后聚集成球悬浮生长,传三四代后加入血清诱导可见巢蛋白免疫荧光染色呈阳性,发出绿色荧光并聚集成球。BrdU阳性细胞为椭圆形棕褐色,移植后第2,4周均可见其在脑梗死区存活并向周围迁移,且第4周时迁移的范围更广。移植后2周,皮质颗粒层和皮质下均见较多的BrdU阳性细胞,且BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞多于BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞;移植后4周脑梗死区BrdU阳性细胞数明显减少,主要存在于脉络丛和微血管中,且BrdU/胶质纤维酸性蛋白双阳性细胞多于BrdU/微管相关蛋白2双阳性细胞。 结论：人胚神经干细胞能存活于脑梗死的环境中,并逐渐分化成神经元或星形胶质细胞。移植后期脑实质内存活的神经干细胞明显减少,大量迁移到侧脑室脉络丛和脑表面微血管内,被内皮吞噬系统消化。     

显微手术切除CPA区脑膜瘤的术后护理体会

目的探讨显微手术切除桥小脑角（CPA）脑膜瘤术后护理的方法和特点。方法总结34例桥小脑角脑膜瘤显微手术治疗的护理体会。结果绝大多数患者临床症状明显缓解,预后良好,无由于护理不当造成的并发症。结论桥小脑角脑膜瘤术后护理对患者的康复是必要的。     

神经外科重症监护病房医院感染的调查分析

目的调查分析神经外科重症监护病房（NICU）医院感染发生情况、原因和危险因素,探讨护理干预措施。方法回顾性分析NICU927例患者年龄,疾病种类、感染的部位、原因、病原菌种类、危险因素等临床资料。结果927例患者巾,发生医院感染116例,医院感染率为12．5％,60岁以上患者感染率最高;疾病种类以重型颅脑损伤、脑血管疾病的感染率最高;感染部位依次为呼吸道、泌尿道、胃肠道;189例次医院感染总共检出96株病原菌,依次是铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、白色念球菌、金黄色葡萄球菌;并与创伤性操作、机体抵抗力下降、抗菌药物应用不合理、医务人员缺乏交叉感染意识、住院天数长和高龄等因素有关。结论NICU医院感染发生率高,应加强护理干预措施．包括病室管理、规范洗手、严格遵守无菌原则、改善环境因素和治疗操作中易导致污染和感染的环节、以及对呼吸、泌尿系统的护理,合理应用抗生素、缩短住院时间等措施才能有效的预防NICU的医院感染。     

体温控制法指导急性有机磷中毒中阿托品用量的临床研究

目的探讨体温控制法作为阿托品治疗急性有机磷中毒（AOPP）调整用药指征的安全性和可行性。方法将128例AOPP患者随机分为治疗组（68例）和对照组（60例）。治疗组以体温控制法作为阿托品停药与减量的指征,对照组以“阿托品化”作为阿托品用药过程中停药与减量的指征,评价治愈率、阿托品中毒率和住院时间。结果治疗组治愈率高于对照组,阿托品中毒率和住院时间明显少于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）结论以体温控制法指导有机磷中毒治疗中阿托品用量具有明显的安全性和可行性,可以作为急性有机磷中毒治疗的可行性方案。     

抓住机遇培养跨世纪优秀中青年科技人才

科技人才是科学技术创造性灵魂的载体,是科学技术高水平发展的关键。卫生部关于加速卫生科学技术进步的意见中明确指出“选拔培养一批跨世纪优秀学科、学术带头人是加速卫生科技队伍代际交替,面向未来的重要战略部署。”大力培养中青年跨世纪学术骨干及学科带头人已成为...     

产志贺毒素大肠杆菌O157∶H7的亚碲酸钾抗性基因簇分布和抗性水平

目的 了解产志贺毒素大肠杆菌O157：H7的亚碲酸盐抗性基因簇的分布和抗性水平的关系。方法运用PCR和核酸杂交方法进行基因检测，使用平皿法检测亚碲酸钾抗性水平。结果在所检测的志贺菌、沙门菌、霍乱弧菌、耶尔森菌、泌尿道致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠黏附性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌中，只有大肠杆菌O157：H7具有ter(tellurite resistance，ter)基因簇。所检测的34株产志贺毒素的大肠杆菌O157：H7有33株具有ter基因簇，所检测的18株不产生志贺毒素的大肠杆菌O157，4株具有ter基因簇，但是没有该毒力岛的其它基因。ter基因阳性的33株菌中，亚碲酸钾的抗性水平一般较高，4株在750μg/ml以上，19株为500～750μg/ml，10株为250～500μg/ml；而4株ter基因簇阴性的菌株，也表现了高水平的耐药性，其抗性水平均为500～750μg/ml。其它ter基因簇阴性的菌株，20株耐药性为5～10μg/ml，1株10～20μg/ml，6株20～50μg/ml，2株50～100μg/ml，1株100～250μg/ml。结论ter基因簇在产志贺毒素的大肠杆菌O157：H7中高频率存在，而在其它病原菌中没有检测到。高水平的亚碲酸钾抗性可以作为选择性分离产志贺毒素大肠杆菌O157：H7的指标之一。     

体温控制法指导有机磷中毒中阿托品用量的应用观察

目的:探讨体温控制法作为阿托品治疗急性有机磷中毒(AOPP)调整用药指征的安全性和可行性.方法:将128例AOPP患者随机分为两组.治疗组以体温控制法作为阿托品停药与减量的指征,对照组以"阿托品化"作为阿托品用药过程中停药与减量的指征,评价治愈率、阿托品中毒率和住院时间.结果:治疗组治愈率高于对照组(P<0.05),阿托品中毒率和住院时间明显少于对照组(P<0.01).结论:以体温控制法指导有机磷中毒中阿托品用量具有明显的安全性和可行性,可以作为急性有机磷中毒的可行性方案.     

骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管疾病的研究近况

学术背景：近年来研究发现骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，在缺血性脑卒中、脑损伤等疾病中可替代神经细胞，并具有修复神经系统的功能。目的：缺血性脑血管病的发病机制复杂。骨髓间充质干细胞作为神经干细胞的来源。深入认识其在治疗缺血性脑血管疾病中的作用。检索策略：由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库和Highware数据库2002-01／2007-05的相关文献。检索词“Mesenchymal stem cells（MSCs），cerebral ischemia”。并限定文章语言种类为English。共检索到119篇文献。对资料进行初审。纳入标准：①涉及骨髓间充质干细胞的特点。②与骨髓间充质干细胞在缺血性脑血管病或脑卒中的研究进展相关。排除标准：①重复研究。②Meta分析。文献评价：文献的来源主要是通过对骨髓间充质干细胞的特点及其在缺血性脑血管病或脑卒中的应用进行汇总分析。所选用的36篇文献中．17篇为综述，其余均为临床或基础实验研究。资料综合：①骨髓间充质干细胞具有跨胚层分化潜能，可在中枢神经系统内存活并能分化为神经样细胞。在体外也可通过诱导向神经细胞转化。②骨髓间充质干细胞取材方便、体外扩增迅速，且能以多种途径移植包括静脉移植、脑内移植，对脑缺血、脑外伤等疾病的神经功能的缺损有改善作用。⑧目前尚存在如何提高骨髓间充质干细胞向有功能的神经细胞转化，如何提高其在体内的成活率和向神经细胞定向分化的能力，移植时机、移植途径及移植安全性，寻找和鉴定骨髓间充质干细胞所特有的细胞表面标志分子，明确其移植后改善缺血性脑损伤功能的机制等问题。结论：骨髓间充质干细胞能在体内外分化为神经细胞。易获得、增殖快，能够进行自体移植。为缺血性脑血管病的治疗开辟了一条新的技术平台，在中枢神经系统损伤修复领域的临床应用前景广阔。