哈萨克族食管癌组织肿瘤修复基因表达及相关性

目的研究2种肿瘤修复基因人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)与错配修复基因1(hMLH1)在哈萨克族食管癌患者癌组织及其远癌正常组织中的表达及其与病程特征的关系。方法采用逆转录聚合酶链式反应方法(RT-PCR)检测48例哈萨克族食管癌切除标本中MGMT与Hmlh1 mRNA表达水平,并分析两者与临床病理特征的关系。结果 48例食管癌癌组织中,MGMT mRNA表达阳性42例,阳性率为87.5%;正常组织者中34例,阳性率为70.8%,差异有统计学意义(t=3.032,P<0.05);hMLH1 mRNA表达阳性38例,阳性率为79.2%,正常组织中23例,阳性率为47.9%,差异有统计学意义(t=4.156,P<0.05);MGMT表达与浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分期等关系有统计学意义(P<0.05);hMLH1表达与浸润深度、淋巴结转移、分化程度及肿瘤分期等关系有统计学意义(P<0.05);哈萨克族食管癌组织中MGMT与hMLH1表达呈正相关(k=0.560,P<0.05)。结论 MGMT与hM-LH1在哈萨克族食管癌的发生、进展、转移等过程中起到一定作用。     

食管癌ECA109细胞中Survivin shRNA干扰对核因子κB表达的影响及调控机制

目的探讨Survivin作为基因表达调控因子,对核因子κB(NF-κB)基因的转录及蛋白水平活性的影响及与NF-κB的调控关系。方法采用Survivin短发夹RNA(shRNA)干扰技术,脂质体转染食管癌ECA109细胞,检测Survivin沉默效果,选择最佳转染浓度;半定量RT-PCR检测Survivin shRNA干扰后食管癌ECA109细胞中NF-κB及其通路的上游调控因子核因子κB抑制蛋白α(IKKα)、IKKβ表达变化;Western blotting方法检测NF-κB蛋白的表达变化;流式细胞术检测干扰之后食管癌ECA109细胞增殖、凋亡指数的变化。结果 Survivin shRNA干扰食管癌ECA109细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达明显下调;NF-κB mRNA表达变化无明显差异,但其蛋白磷酸化水平降低,NF-κB上游因子IKKα、IKKβmRNA表达下调;食管癌ECA109细胞凋亡明显增加,G2期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞周期受阻。结论 Survivin通过在转录水平影响IKKα、IKKβmRNA表达,调控NF-κB蛋白活化水平,提示Survivin在肿瘤信号调控网络中可作为一个新的基因表达调控因子。     

食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA的表达变化及意义

目的观察食管鳞癌组织中错配修复基因hMLH1 mRNA的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用RT-PCR法检测60例食管鳞癌组织与癌旁组织中的hMLH1 mRNA。结果食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA相对表达量（0.761 7±0.035 7）明显低于癌旁正常组织（1.025 2±0.047 4）,P〈0.05;hMLH1 mRNA的相对表达量与食管鳞癌分化程度、肿瘤浸润深度和淋巴结转移无关（P均〉0.05）,与病理分期有关（P〈0.05）。结论hMLH1 mR-NA表达缺失参与了食管鳞癌的发生或发展。     

MMP-7、MMP-2在新疆维吾尔族食管癌中的表达及其相关性研究

目的：探讨基质金属蛋白酶7（MMP7）基因、基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因在维吾尔族食管癌和正常组织中的表达及相互关联性。方法：采用逆转录-聚合酶链式反应（RTPCR）方法检测MMP-7、MMP2在30例食管癌组织及其相应30例正常组织中的表达。结果：MMP-7、MMP-2在30例癌组织中的阳性表达率均为90．0％（27／30）,在30例正常组织中的阳性表达率均为56．7％（17／30）,MMP-7、MMP-2的表达在癌组织与正常组织中的差异有统计学意义（Pd0．05）。MMP7和MMP2mRNA的表达与肿瘤大小、分化程度,分期及淋巴结转移之间差异无统计学意义（P〉O．05）。MMP-7和MMP-2mRNA在癌组织中的表达有正相关性。结论：MMP7、MMP-2基因的表达可能与维吾尔族食管癌的发生、发展有关,两者之间可能具有协同作用,共同促进食管癌的发生及发展。     

内皮型一氧化氮合酶基因多态性与新疆汉族原发性高血压的相关性研究

目的研究新疆汉族人内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）基因第7外显子G894T及第4内含子4b/a VNTR多态性与原发性高血压（essential hypertension,EH）的关系。方法分别采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（Polymerase chain reaction-restricted fragments length polymorphism,PCR-RFLP）技术及PCR技术检测176例原发性高血压患者、131例对照组eNOS基因G894T和4b/a多态性的基因型,分析其对原发性高血压的影响。结果原发性高血压组和对照组eNOS基因G894T、4b/a多态性的等位基因频率及基因型分布在两组间差异无统计学意义。结论 eNOS基因894G→T变异及4b/a VNTR多态性与新疆汉族原发性高血压无明显关联。     

HPV16 E6/E7融合基因真核表达载体的构建

目的构建pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。方法应用聚合酶链反应技术(polymerasechain reaction,PCR)从SiHa细胞中扩增出人类乳头瘤病毒16型(HPV16)E6/E7基因全长片段,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-N1上。结果获得了包含全长阅读框架的HPV16E6/E7基因,并成功克隆到真核表达载体中。结论成功构建了pEGFP-N1-E6/E7融合基因真核表达载体。     

新疆维吾尔族耳鸣耳聋中医辨证分型的研究

目的进行新疆维吾尔族耳鸣耳聋疾病的分子流行病学调查,观察总结肾虚血瘀型在耳鸣耳聋疾病中的比例,为耳鸣耳聋的辨证分型提供理论依据。方法对137例耳聋患者进行临床资料采集,采用调查问卷形式,并全面的体格检查、耳鼻咽喉专科检查以及听力学评估（包括纯音听阈和声导抗多频率测定）。按照严格的纳入和排除标准分别筛选,然后对其进行肾虚血瘀、非肾虚血瘀辨证分型,比较肾虚血瘀型和非肾虚血瘀型之间的构成比有无差异。结果耳聋组137例中肾虚血瘀型105例（76.6%）,非肾虚血瘀型32例（23.4%）,即耳聋组分型构成比有差异,耳聋组肾虚血瘀型发生率高于非肾虚血瘀组。结论对新疆维吾尔族耳聋患者区分肾虚血瘀型和非肾虚血瘀型有临床意义,区分肾虚血瘀型和非肾虚血瘀型可以指导临床诊断,为耳聋耳鸣的分型论治提供理论依据。     

在Eca109细胞中Lrig1对Survivin和Caspase-9的调控研究

目的采用多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(Lrig1)过表达的方式,确定在食管鳞癌细胞(Eca109细胞)中是否存在Lrig1对Survivin和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-9)的调控。方法使用重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞使其过表达Lrig1;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法分别检测细胞中Lrig1、Survivin和Caspase-9的信使核糖核酸(m RNA)及蛋白的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞24 h后,在m RNA水平,Lrig1表达量显著增高(P0.01),而Survivin和Caspase-9无明显变化(P0.05);在蛋白水平,Lrig1和Cleaved-Caspase-9表达量都显著增加(P0.05),而Survivin表达量无明显变化(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,与GV-219(NC组)相比,重组质粒GV-219-Lrig1转染的Eca109细胞24 h细胞晚期凋亡率增加1.6%。结论在Eca109细胞中,过表达Lrig1使其在转录和蛋白水平的表达量显著增加,可明显增加Cleaved-Caspase-9的蛋白水平。但对Survivin的表达没有影响。其调控机制尚待进一步研究。     

哈萨克族食管癌中cdc42启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体

目的构建cdc42基因启动子区CpG岛及全基因共构建真核表达载体,研究cdc42基因启动子区的甲基化状态对该基因表达及功能的影响。方法采用PCR方法从新疆哈萨克族食管癌的cDNA表达阳性的标本中扩增出cdc42基因,以阳性组织基因组DNA扩增出cdc42基因启动子区CpG岛,cdc42基因经双酶切后与真核表达载体pEGFP-N1相连,并转入甲基化酶缺陷的大肠杆菌E.coliER1793中扩增。经测序成功后,将重组质粒及cdc42基因启动子区CpG岛用HindⅢ酶切,连接后再次转入E.coliER1793中扩增。将重组质粒转染至食管癌细胞株Eca-109中,荧光显微镜观察结果。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的cdc42基因及其启动子区CpG岛,并将双序列成功克隆入真核表达载体pEGFP-N1中。转染后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白。结论成功构建真核表达载体,为进一步探讨cdc42基因启动子区CpG岛甲基化状态对该基因在哈萨克族食管癌细胞株中的表达及功能的影响奠定了基础。     

Survivin、CyclinD1基因在哈萨克族食管癌中表达及其意义的研究

目的：研究Survivin和CyclinD1基因在哈萨克族食管癌组织中的表达。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术检测Survivin和CyclinD1基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达。结果：20例食管癌组织中Survivin基因的总阳性率为50%,相应癌旁组织中Survivin基因的总阳性率为20%,且其表达量均低于其对应的癌组织。在20例食管癌组织中有10例表达CyclinD1基因,阳性率为50%,而在20例癌旁组织中有13例表达,阳性率为65%,且癌组织的表达低于其对应的癌旁组织。结论：提示Survivin基因的异常表达引起的细胞凋亡抑制在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起到一定的作用。CyclinD1在哈萨克族食管癌中的作用与其在其它民族中的作用可能有所不同。