温脾汤对5／6肾切除大鼠残余肾脏的保护作用

背景：肾纤维化是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同通路，大多数抗肾纤维化的治疗尚处于实验阶段。研究表明中药具有良好的抗肾纤维化应用前景，温脾汤是临床上治疗慢性肾衰、保护肾功能的有效方剂。目的：探讨温脾汤对5／6肾切除大鼠残余肾脏功能和形态学的影响。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本实验在北京中医药大学细胞与生化实验室完成。实验选用雄性Wistar大鼠44只，质量(200±20)g。实验动物于术前按质量随机分组，其中36只大鼠接受5／6肾切除术(分别为温脾汤组、尿毒清组)，8只留作假手术组。采用5／6肾切除大鼠模型，动态观察温脾汤对病理大鼠质量、血清肌酐、尿素氮以及24h尿蛋白的影响。并对肾组织六铵银染色(PAM)结果进行光镜观察和图像分析，观察大鼠组织形态学变化。主要观察指标：假手术组大鼠与其他3组肾切除术前，术后4，8，12，16周血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白、体质量比较。结果：温脾汤组术后12，16周时血清肌酐[(9.4±1.0)，(12.8±2.2)mg／L]显著低于模型组[(11.7±1.7)，(16.1±1.7)mg／L]，差异有显著性意义(t=4.052，P<0.01)。温脾汤组大鼠血清尿素氮在术后呈缓慢上升趋势，但在术后12，16周时仍明显低于模型组(t=6.504～15.498，P<0.05)。温脾汤和尿毒清组大鼠24h尿蛋白呈缓慢上升趋势，在各时相点均明显低于模型组(t=9.548～19.595，P<0.01)。光镜下观察：温脾汤减轻了肾小球肥大、系膜细胞增生、肾小球硬化及肾小管间质病理损害。结论：温脾汤能够明显改善5／6肾切除大鼠的肾脏病理损害，保护残余肾脏的功能。     

金雀异黄素对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌功能的影响

目的：研究金雀异黄素对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞RAW264.7分泌功能的影响,探讨金雀异黄素抗炎作用及其机制,为临床应用提供理论基础。方法：用脂多糖诱导巨噬细胞株Raw264.7建立体外细胞炎症模型,金雀异黄素与巨噬细胞株Raw264.7温孵1h后,加入100ng·mL-1脂多糖以诱导巨噬细胞的活化,采用Griess试剂检测细胞培养液中NO的含量,通过双抗体夹心酶联分析法和细胞转染技术观察不同浓度金雀异黄素对脂多糖刺激巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10含量及对核转录因子NF-κB和AP-1表达的影响。结果：金雀异黄素（4～111μmolL-1）能明显抑制脂多糖刺激巨噬细胞生成一氧化氮产生（P〈0.05）;显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10（P〈0.01）,并能抑制核转录因子NF-κB和AP-1的表达。结论：本实验证明了金雀异黄素有抗炎作用,其能显著降低脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO及细胞因子TNF-α、IL-6和IL-10的释放,通过抑制这些炎症因子的释放来达到抗炎作用,金雀异黄素抑制核转录因子NF-κB和AP-1的表达来实现的。     

肾综合征出血热外周静脉血细胞因子的变化与病情的关系

目的观察肾综合征出血热(HFRS)患者各病期外周静脉血血管内皮生长因子(VEGF)、可溶性血管内皮生长因子受体2(sVEGFR2)、血管生成-素1(ANG-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)水平的变化及其变化与病程中血管渗漏的关系,为研究HFRS的发病机制提供依据。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了68例不同病期HFRS患者外周静脉血上述5种细胞因子,并以20例健康志愿者作为正常对照。同时对20例HFRS患者病程5期连续动态收集的外周静脉血标本中的VEGF进行了测定。结果在所有观察患者中,血浆VEGF水平从发热期开始增高[(337.6±238.0)ng/L],休克期达到峰值[(556.0±185.2)ng/L],少尿期开始迅速下降[(259.0±152.8)ng/L],在多尿期[(223.1±110.6)ng/L]和恢复期[(246.5±202.0)ng/L]回落到正常水平。HFRS患者sVEGFR2、ANG-1水平在休克、少尿、多尿期均低于健康对照组;TNF-α和IFN-γ水平在发热期、低血压休克期、少尿期和多尿期均高于健康对照组,其中大多数与后者比较差异有统计学意义。此外...     

胶原纤维与器官纤维化

胶原纤维是组成细胞外基质的主要成分，在正常组织中发挥着重要作用。临床上多发的各种器官纤维化的主要病因在于胶原纤维的过度生成和降解严重不足，从而导致细胞外基质过度沉积。胶原纤维的装配与降解过程受严格的细胞调控，并有多种细胞因子参与该过程。如今，探索如何从不同水平人工干预胶原纤维的装配，从而逆转各种器官的纤维化已经成为医学及生物学研究的热点。本文综述了近年来胶原纤维与多器官纤维化方面的研究现状和取得的新观点。     

姜黄素对肾小管上皮细胞转分化smad信号转导途径的影响

目的 探讨姜黄素(Cur)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)smad信号转导途径的干预作用.方法 以10 μg/L的TGF-β1作用人近端肾小管上皮细胞(HK-2)不同的时间(0、12、24、48和72h),以Western印迹方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.用递增浓度的Cur(1、5、10μmoL/L)预处理HK-2细胞24 h, 加入含TGF-β1(10 μg/L)培养液继续培养细胞48h后,收获细胞提取蛋白和mRNA,以Western印迹方法检测smad3、p-smad2/3、smad7、TFβR-II的表达;以RT-PCR方法检测ColⅠ、ColⅢmRNA的表达.结果 TGF-β1诱导HK-2细胞内smad2/3磷酸化的现象,既早于E-cadherin蛋白的下调,更先于新蛋白α-SMA的合成;姜黄素干预后,可明显抑制TFβR-II蛋白的表达、smad2蛋白磷酸化及ColⅠ、ColⅢmRNA的表达,增强抑制因子smad7的表达.结论 姜黄素可干预TGF-β1 /smads信号转导途径的多个位点,从而阻断EMT过程.     

高效液相色谱法测定经酸水解后莲房中槲皮素的含量

目的研究莲房的酸水解条件及其水解苷元槲皮素的HPLC含量测定方法,并分析不同收集地莲房中槲皮素的含量差异。方法莲房样品经甲醇-盐酸（55%,v/v）混合溶液（4:1,v/v）水解提取后,采用高效液相色谱法测定水解液中槲皮素的含量。结果经方法学考察与验证,确定莲房的最佳水解条件和含量测定方法。同时发现不同收集地的莲房样品中槲皮素的含量存在较大的差异。结论酸水解后经HPLC测定莲房中槲皮素含量的方法可用于药材质量评价。     

运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度

目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法.方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb) 3G1为一抗,FIX标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比.结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/ML.结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法.     

化疗损伤性卵巢功能早衰小鼠动物模型的研究

目的探索建立化疗损伤性卵巢功能早衰动物模型的适宜方法及最佳时间。方法以70只ICR雌性小鼠为研究对象,腹腔连续注射顺铂7~14 d,观察不同剂量和时间条件下顺铂对小鼠的体重、卵巢功能、肝肾毒性及卵巢组织抗氧化系统各指标的变化。结果顺铂可引起小鼠体重明显下降,卵巢功能减退,出现肝肾毒性,并可引起卵巢抗氧化及氧化损伤指标的异常,与对照组比较均有明显差异。结论3.0~4.0 mg/(kg.bw)的顺铂作用7 d后即可引起小鼠出现明显的卵巢功能衰退、肝肾损伤,氧化损伤是顺铂产生其毒性作用的可能机制之一。该模型的生殖内分泌和病理组织学变化,与人类化疗损伤性卵巢功能早衰病变过程相似。     

基于数据挖掘的牛建昭教授治疗更年期 综合征用药规律研究

目的：利用数据挖掘技术探究牛建昭教授治疗更年期综合征的用药规律,为更年期综合征的临床治疗提供参考。方法：收集并筛选牛建昭教授门诊中的更年期综合征病例,构建处方数据库,基于中医传承辅助平台使用关联规则和熵聚类算法对处方进行数据挖掘,分析用药频次、性味归经、组方规律、药物组合关联性、提取核心药物组合与创新处方。结果：数据挖掘得出高频单味药22个,高频药物组合28对,关联规则置信度高于0.95药物20组,高关联药对52个,三味药核心组合32个,新方7个。结论：牛建昭教授治疗更年期综合征的常用药物以补肾、柔肝、健脾相结合,兼以活血通络、安神定志;所用药四气以温寒平为主;所用药五味以甘苦辛为主;所用药物主要归肝、肾、肺经。基于挖掘结果可较好的分析牛建昭教授治疗更年期综合征的用药规律。     

转录因子MafB在非小细胞肺癌中的表达及对CD14+单核细胞分泌Ⅰ型干扰素的影响

摘 要：［目的］ 研究非小细胞肺癌（NSCLC）患者中转录因子MafB的表达变化,并评估MafB对NSCLC患者CD14+单核细胞分泌Ⅰ型干扰素和诱导CD4+T细胞分化的影响。［方法］ 入组41例NSCLC患者（28例鳞癌和13例腺癌）和21例健康志愿者。收集外周血和支气管肺泡灌洗液（BALF）,分离血浆和外周血单个核细胞（PBMC）,纯化CD14+单核细胞和CD4+T细胞。酶联免疫吸附实验检测血浆和BALF干扰素（IFN）-α和IFN-β的水平,反转录实时定量PCR检测外周血和BALF中MafB mRNA相对表达量,Western blot检测MafB蛋白水平。利用MafB siRNA转染CD14+单核细胞,观察抑制MafB对CD14+单核细胞分泌IFN-α和IFN-β的影响,检测干扰素调节因子3（IRF3）磷酸化水平。建立CD14+单核细胞和CD4+T细胞的直接接触和间接接触培养系统,通过ELISA法检测培养上清中IFN-γ、白细胞介素（IL）-4、IL-17和IL-21表达水平评估抑制MafB对CD14+单核细胞调控CD4+T细胞分化的影响。［结果］ 血浆IFN-α和IFN-β水平在健康志愿者和NSCLC患者之间差异无统计学意义,但肿瘤部位BALF中IFN-α（242.5±59.98pg/ml vs 282.5±45.24pg/ml,P=0.013）和IFN-β（12.40±2.81pg/ml vs 34.42±7.83pg/ml,P<0.0001）水平均显著性低于非肿瘤部位。PBMC中MafB mRNA相对表达量和蛋白水平在健康志愿者和NSCLC患者之间差异亦无统计学意义,但肿瘤部位BALF中MafB mRNA和蛋白水平则显著性高于非肿瘤部位（P<0.0001）。MafB siRNA转染可显著性抑制CD14+单核细胞中MafB mRNA和蛋白的表达。MafB siRNA转染可促进CD14+单核细胞IFN-β的分泌（16.09±5.79pg/ml vs 6.73±1.78pg/ml,P<0.0001）,增加IRF3磷酸化（P<0.0001）,但对IFN-α表达无明显影响（P>0.05）。而抑制NSCLC患者CD14+单核细胞中MafB对CD14+单核细胞和CD4+T细胞共培养系统中IFN-γ、IL-4、IL-17和IL-21的分泌水平并无显著性影响（P>0.05）。［结论］ NSCLC患者肿瘤部位过度表达的MafB可能诱导了Ⅰ型干扰素抑制,但MafB对肿瘤部位CD14+单核细胞的免疫调控功能可能无影响。