结核分枝杆菌北京基因型菌株rpoB基因突变特征研究

目的分析结核分枝杆菌临床分离株北京基因型的rpoB基因突变特点。方法同时采用IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）,间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）方法对102株结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型,确定北京基因型。采用反相斑点杂交方法检测ropB基因突变。结果 73.5%（75/102）的临床分离株是北京基因型,62株（60.8%,62/102）利福平耐药株中有52株（83.9%,52/62）为北京基因型,10株为非北京基因型;40株利福平敏感株中北京基因型23株,非北京基因型17株。47株北京基因型和7株非北京基因型存在ropB基因突变,最普遍的点突变发生在526位点。结论尽管北京基因型与非北京基因型在ropB基因突变特征上无显著性差别,但北京基因型菌株利福平耐药率和rpoB基因突变率显著高于非北京基因型菌株;以PCR为基础的反相斑点杂交方法具有较高的敏感度和特异度,适用于大批量结核分枝杆菌利福平耐药性的初筛。     

结核分支杆菌感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子表达的研究

目的 探讨巨噬细胞在感染结核分支杆菌后氮氧化物（NO）的产生和细胞因子表达的差异，了解结核感染的免疫应答过程，探讨死菌苗作为新的结核候选苗的可行性。方法 用ELISA和RT－PCR方法比较研究巨噬细胞在感染结核分支杆菌后NO的产生和细胞因子表达的差异。结果 （1）活的结核分支杆菌H37Rv能显著诱导巨噬细胞产生NO，IL－1，IL－12，IL－18，TNF－α以及iNOS的表达。（2）细菌数对NO的产生和细胞因子的表达也有很大的影响。结论 活的结核分支杆菌H37Rv能显著诱导巨噬细胞产生NO和细胞因子，而产生有利于宿主的免疫应答。同样量的死结核分支杆菌H37Rv不能显著诱导巨噬细胞产生NO和细胞因子，不宜作为新的结核候选疫苗。     

间隔区寡聚核甘酸分型技术(spoligotyping)的建立及其对结核分支杆菌菌株北京基因型的初步鉴定

目的:建立一种以PCR为基础的结核分支杆菌DNA指纹技术,即间隔区寡聚核甘酸分型技术(Spoligotyping),研究该方法在结核分支杆菌北京基因型鉴定中的应用,并探讨该方法在结核分支杆菌流行病学中的应用.     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

以PCR为基础的结核分支杆菌DNA分型技术及其应用

1998年结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组测序工作宣告完成，这就为建立分子生物学方法鉴定结核分枝杆菌并对其分型提供了更有力的依据。H37Rv整个基因组由4，411，529对碱基组成，含有约4000个基因，整个基因组内有56个区与插入序列(ISs)同源。在结核分枝杆菌基因组插入序列     

DNA固定技术对结核分枝杆菌PCR产物杂交结果影响的研究

目的 比较各种DNA 固定方法对结核分枝杆菌PCR 产物杂交结果的影响?方法 选取结核分枝杆菌PCR 扩增产物并点于尼龙膜上,用紫外线?加热和碱液三种方法固定DNA,然后以PCR 产物作探针用增强化学发光标记试剂进行标记,并对三种不同方法固定的PCR 产物杂交分析?结果 结核分枝杆菌DNA固定方法对PCR 扩增产物的检测结果具有较大的影响,碱液固定具有较好的敏感性和重复性?结论 各地结核分枝杆菌PCR 实验室可考虑用碱液法对PCR 产物固定进而进行杂交分析。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的:探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响.方法:用ELISA方法比较单独巨噬细胞组,巨噬细胞+LPS+卡介苗组,卡介苗+巨噬细胞组以及LPS+巨噬细胞组细胞因子表达的差异.     

结核分枝杆菌特异基因MPT64-Rv1985c融合蛋白的免疫诊断价值研究

目的表达和纯化结核分枝杆菌特异蛋白MPT64、Rv1985c及其融合蛋白MPT64-Rv1985c,探讨3种抗原在结核病免疫诊断中的价值。方法通过PCR获得基因MPT64、Rv1985c及其融合基因,并克隆到pET32a(+)表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后用镍柱进行纯化,再用SDS-PAGE及Western blot方法检测并鉴定目的产物。采用ELISA方法检测3种抗原在血清及胸腔积液样本中的结核病诊断效率。结果 3种目的蛋白均以包涵体形式表达。经过纯化及复性获得纯度较高的可溶性蛋白。血清及胸腔积液样本中特异性IgG抗体检测结果显示,融合蛋白MPT64-Rv1985c在诊断肺结核、肺外结核的敏感性为87.1%和88.9%,特异性为75.6%;诊断结核性胸膜炎的敏感性为91.2%,特异性为84.6%,敏感性较单一抗原MPT64及Rv1985c有显著提高(P﹤0.05)。结论融合蛋白MPT64-Rv1985c诊断效果显著高于单一抗原,在结核病诊断中具有重要的研究价值。     

翼点入路显微手术切除巨大复杂颅咽管瘤8例

目的探讨鞍区5个间隙在巨大复杂颅咽管瘤全切手术中的意义。方法在手术显微镜下经翼点人路鞍区5个解剖间隙切除鞍区肿瘤8例,术中注意保护肿瘤周围的视神经、颈内动脉及发出的垂体上动脉。结果8例鞍区肿瘤,全切除7例(87.5%),大部切除1例,复发1例(12.5%)。结论翼点人路行鞍区肿瘤的显微手术中,熟练掌握鞍区5个解剖间隙及垂体血供的显微解剖,是提高全切率、降低死亡及复发率的关键。     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。