结核分支杆菌感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子表达的研究

目的 探讨巨噬细胞在感染结核分支杆菌后氮氧化物(NO)的产生和细胞因子表达的差异，了解结核感染的免疫应答过程，探讨死菌苗作为新的结核候选疫苗的可行性。方法 用ELISA和RT-PCR方法比较研究巨噬细胞在感染结核分支杆菌后NO的产生和细胞因子表达的差异。结果 活的结核分支杆菌H37Rv能显诱导巨噬细胞产生NO、IL-1、IL-12、IL-18、TNF-α以及iNOS的表达。细菌数对NO的产生和细胞因子的表达也有很大的影响。结论 活的结核分支杆菌H37Rv能显诱导巨噬细胞产生。NO和细胞因子，而产生有利于宿主的免疫应答。同样量的死结核分支杆菌H37Rv不能显诱导巨噬细胞产生NO和细胞因子，不宜作为新的结核候选疫苗。     

天津地区临床分离株结核分枝杆菌分子流行病学研究

目的探讨天津地区结核分枝杆菌临床分离株分子流行病学特征。方法连续收集天津市海河医院2005年8月16日～11月25日就诊病人痰培养阳性的结核分枝杆菌100株，采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列（VNTR）两种方法进行基因分型，并运用软件对二者的结果进行分析。依据北京分化支的定义。运用多重和实时定量PCR方法将其区分为W菌/典型北京家族菌株和非典型北京菌株，x^2检验分析两种亚群与患者年龄和耐药性之间的联系。结果排除污染菌株，共对96株结核分枝杆菌临床分离株进行两种方法的基因分型，Spoligotyping结果为91．7％为北京基因型（含3株类北京基因型）结核分枝杆菌（88／96）。VNTR分型可将北京基因型分为60种基因型。在北京分化支结核分枝杆菌中，W菌/典型北京家族菌株占93．2％（82／88）。两种北京分化支亚群与患者年龄和耐药性没有显著性统计学差异（P〉0.05）。结论天津地区结核病患者临床分离的结核分枝杆菌中，北京基因型呈现较为明显的优势。VNTR的分辨率明显高于Spoligotyping。北京分化支的两种亚群在天津地区临床结核病患者中均存在流行，但以W菌/典型北京家族菌株为主。     

γ干扰素释放反应在结核分枝杆菌潜伏感染及结核病诊断中的临床意义

目的 探讨三种结核分枝杆菌抗原刺激外周血单个核细胞（PBMC)后γ干扰素(IFN-γ)释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染及结核病的诊断意义。并与结核菌素皮试(TST)进行比较。方法 研究对象共分三组，活动性结核组(57例)，健康对照组(27例)，肿瘤组(29例)，分别用结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)，早期分泌抗原靶6kDa蛋白(early secretary antigenic target 6kDa protein ESAT-6)，38kDa抗原与PBMC共同培养5天，后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ的浓度。结果 ①健康组：TST与BCG接种史及排菌病人密切接触程度呈正相关(B=0．047和P=0．041)，ESAT-6为抗原的IFN-γ释放水平与结核病接触程度密切相关(P=0．005)，而与BCG接种史无明显相关。②当阴阳性界定值定为1000pg／ml时。38kDa抗原刺激后的IFN-γ浓度对于结核病诊断的敏感性为64．9％，特异性为89．3％.结论 ESAT-6刺激后的IFN-γ释放反应对结核分枝杆菌潜伏感染的诊断意义可能优于TST。38kDa抗原刺激后的IFN-γ释放反应可能有结核病的辅助诊断意义。     

分枝杆菌的多相分类鉴定

分枝杆菌属除麻风分枝杆菌外,主要包括结核分枝杆菌复合群和非结核分枝杆菌.近年来,随着结核病(结核分枝杆菌复合群为其致病菌)的回潮,非结核分枝杆菌感染率由4%急速上升到10%,快速和准确地鉴定它们显得非常重要.在我国非结核分枝杆菌的表型鉴定一直沿用以生化实验为核心的传统鉴定方法,且欠缺数值分类的补充分析.全细胞脂肪酸气相色谱分析这种表型鉴定方法仅在有条件的省份开展.随着分子生物学的发展以及系统发育理论的提出,与之相应的基因分型方法也被用于分枝杆菌属的鉴定.本文详细阐述了系统发育的理论以及应用于非结核分枝杆菌的遗传学分类鉴定方法,即DNA-DNA杂交和16S rDNA基因序列分析.为进一步提高表型鉴定的准确性,又详细介绍了一些用于数值分类的应用软件.总之,多相分类鉴定已被广泛应用于非结核分枝杆菌的分类鉴定中.本文也介绍了一些结核分枝杆菌复合群基因分型鉴定方法及其在结核分子流行病学中的广泛应用.     

DNA测序、PCR-SSCP和phaB间接药敏实验检测结核分枝杆菌利福平耐药性的比较

地点:印度Chennai结核病研究中心。目的:利用表型和基因型方法快速鉴定耐多药结核分枝杆菌。设计:对两种基因型分析方法,即 DNA测序法和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)法和一种表型分析方法,即噬菌体生物增殖法(phaB)进行了实验室内的标准化,并利用这三种方法测定101株RFPr和100株RFPs临床分离结核分枝杆菌 的利福平耐药性。结果和结论:将三种方法的检测结果与常规间接药敏实验进行比较。DNA测序法的灵敏度和特异度分别为97％和100％,PCR-SSCP法为76％和100％,而phaB实验为97％和84％。DNA测序法的灵敏度和特异度高于其它两种方法。     

重组结核分枝杆菌黏附素、MPT64、38kD蛋白在结核性胸膜炎中的诊断价值比较

目的 探讨重组结核分枝杆菌黏附素(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)、MPT64、38kD蛋白在结核性胸膜炎中的诊断价值.方法 选取结核性胸腔积液患者54例、恶性胸腔积液患者40为研究对象,以HBHA、MPT64、38kD蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者胸腔积液中IgG抗体滴度.结果 结核性胸腔积液组3种抗原对应的IgG抗体吸光度均数分别为0.630,0.430,0.470;恶性胸腔积液组3种抗原对应抗体吸光度均数分别为0.340,0.248,0.271,结核组高于恶性胸腔积液组,差异有统计学意义(P＜ 0.001);ROC曲线分析结果显示,胸水中HBHA抗体的诊断临界值定为0.46时用于鉴别诊断结核性胸膜炎和癌性胸水的敏感度为90.7％、特异度为90.0％、准确度为90.4％.诊断准确度高于MPT64及38kD蛋白.结论 HBHA蛋白抗体对于结核性胸膜炎与癌性胸水的鉴别诊断具有重要价值,优于MPT64及38kD蛋白.     

结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度与gyrA基因突变的相关性分析

目的以氧氟沙星为例,探讨阈值的划分对实验室早期检测出耐氧氟沙星结核分枝杆菌的影响。结合DNA序列分析探讨gyrA基因点突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星耐受程度的相关性。方法 （1）在含氧氟沙星改良罗氏培养基上检测101株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的敏感性。（2）测序以检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的特征。结果 （1）52株耐氧氟沙星5.0μg/ml的临床分离株中,17株能在含氧氟沙星10.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占32.69%）,49株对氧氟沙星5.0μg/ml敏感的临床分离株中,有2株能在含氧氟沙星2.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长（约占4.08%）。（2）基因扩增产物测序发现;耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变主要发生第90、91和94位点上,有10株在不同的gyrA基因位点上发生了碱基缺失或插入的变异,101株被检测的结核分枝杆菌临床分离株中,发生在第95位点的碱基突变率为100%。结论 （1）判定耐药结核分枝杆菌上、下限的阈值对耐药结核菌的早期检出具有重要的作用。（2）发生在耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因上的点突变是多变的,但与结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度没有明显的相关性。     

γ-干扰素与结核病

据估计,全球约有1/3的人感染过结核分枝杆菌(M.tb),然而,在感染人群中仅有1/10发病。也就是说,全球将近18亿人口感染过M.tb却不发展为结核病。既便在发患者群中也有一部分未经任何治疗而自愈。这就表明机体存在着有效的保护性免疫反应。这种保护性免疫反应主要是由Th1细胞介导的,而γ-干扰素(IFN-γ)则是保护性免疫中的关键细胞因子。1 IFN-γ的发现1957年,Isaass等在研究病毒的干扰现象时,发现将56℃l小时灭活的流感病毒加入鸡胚绒毛尿囊膜碎片中,经孵育后此膜不但获得了抗流感病毒的能力,而且释放了一种具有干扰病毒活性的因子,即IF…     

硝酸盐还原酶试验检测结核分枝杆菌耐药性的研究

目的 探讨一种快速、廉价、方便的结核分枝杆菌耐药性分析方法，缩短结核分枝杆菌药敏试验时间。方法 采用硝酸盐还原酶试验(Nitrate Reductase Assay，NRA)与绝对浓度法对照，验证新方法的灵敏度和特异性。结果 两种试验方法可比性好，与绝对浓度法相比较，硝酸盐还原酶试验敏感性为91．7％，特异性为100．0％，NRA法比传统绝对浓度法平均缩短时间2～3周。结论 硝酸盐还原酶试验优于传统绝对浓度法。