荧光定量PCR技术快速检测rpoB基因突变及其临床应用

目的探讨荧光定量PCR技术检测基因突变的价值及其临床应用。方法针对结核分枝杆菌rpoB基因利福平耐药决定区(Rifampicin Resistance Determining Region,RRDR)526密码子和531密码子常见的突变形式设计探针(526CAC,526TAC,531TCG和531TTG),应用已知rpoB基因RRDR区序列的38株利福平耐药临床分离株和24株利福平敏感临床分离株以及5株非结核分枝杆菌菌株建立荧光定量PCR检测基因突变的方法。继而,应用该技术检测84份肺结核病例痰标本,与痰罗氏培养以及药敏结果进行比较,部分标本进行DNA测序证实。结果在38株利福平耐药、24株利福平敏感的临床分离株和5株非结核分枝杆菌中,其检测526密码子和531密码子突变的敏感性和特异性达100%。在84份肺结核病例的痰标本中,罗氏培养阳性62株,其中利福平耐药株48份,荧光定量PCR检测痰标本结核分枝杆菌DNA阳性为75例。荧光定量PCR检测到531密码子TTG突变65例,526密码子TAC突变7例。在48株利福平耐药株中,荧光定量PCR检测43株为531TTG突变,3株为526TAC突变,另2株利福平耐药株,经测序证实,1株514密码子TTC插入突变,1株为511密码子CCG和516密码子GGC联合突变。结论荧光定量PCR技术能快速检测rpoB基因突变,并能作为临床肺结核病人早期快速耐药诊断的辅助手段。     

TaqMan-PCR技术诊断结核病的临床应用研究

目的　探讨TaqMan-聚合酶链反应 (TaqMan-PCR)技术在结核病快速诊断中的临床价值。方法 对 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血应用TaqMan -PCR检测结核分支杆菌DNA ,痰、胸腔积液和脑脊液进行抗酸染色涂片检查 ,另外 ,痰标本还进行了BACTEC和改良罗氏培养；同期以52例肺癌患者的痰和外周血、50例恶性胸腔积液患者的胸腔积液以及 33例健康人的外周血作为对照进行TaqMan-PCR检测。 结果 155例活动性肺结核患者的痰和外周血、130例结核性胸膜炎患者的胸腔积液和外周血以及 61例结核性脑膜炎患者的脑脊液和外周血TaqMan-PCR的阳性率分别为 49.0%和 51.6%、45.4%和 38.5%以及 50.8%和 42.6% ,痰、胸腔积液和脑脊液TaqMan-PCR的阳性率显著高于抗酸染色涂片以及BACTEC和罗氏培养 (P＜0.05)。TaqMan-PCR检测痰、胸腔积液和外周血的特异性分别为 96.2%、98%和 96.5%。结论 TaqMan-PCR具有较高的敏感性和特异性 ,对结核病的快速诊断具有一定的价值。     

巨噬细胞在抗结核感染中的作用

巨噬细胞在结核病发病过程及机体抗结核免疫过程中扮演重要的角色。巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成细胞,同时又是一类主要的抗原提呈细胞。在天然免疫和获得性免疫中都起着关键的作用。结核病是由结核分枝杆菌引起的严重危害人类健康的主要传染病,结核分枝杆菌可以通过多种途径来干扰机体巨噬细胞的免疫应答。本篇综述的目的在于讨论宿主被结核分枝杆菌入侵后,巨噬细胞在各种抗结核感染的免疫应答中的作用机制。