三七皂甙Rg1、Rb1对大鼠脑缺血、缺氧损害的保护及机理研究

目的: 本文研究缺血再灌流时大鼠脑损害及脑细胞凋亡规律以及与转录因子的关系,探讨三七皂甙Rg1、Rb1对脑缺血、缺氧损伤的保护作用及作用机理.方法:(1)动物模型复制及实验分组: Wistar大鼠随机分为5组:模型组、Rg1组、Rb1组、正常对照组和假手术组.模型组采用大脑中动脉闭塞/再灌流模型, 采用线栓法制成.大鼠麻醉后仰卧固定,取颈正中切口,分离左侧颈总动脉,颈内动脉、颈外动脉.结扎并剪断颈外动脉,剪口将尼龙线栓经颈内动脉插入颅到大脑前动脉起始处,阻断自颈内动脉和大脑前动脉流向大脑中动脉的血流. Rg1组、Rb1组分别于手术后立即腹腔注射Rg1、Rb1.(2)标本收集及检测指标:采集大脑标本及血清标本,Tunel原位杂交和免疫组化方法检测细胞凋亡、测定TNFα、sPLA2、cPL A2 、PGE2及c-fos、c-jun表达的变化以及Rg1、Rb1对其影响.结果: (1) 正常组及假手术组仅偶见Tunnel阳性细胞.缺血再灌24-48 h凋亡细胞数位于高峰,再灌60 h,可见凋亡细胞数量下降.(2) 正常及假手术组未见明显的c-fos、c-jun阳性细胞,缺血再灌0.5 h 在大脑皮层、海马可见阳性细胞,24 h达高峰,Rg1、Rb1明显抑制缺血再灌后c-fos、c -jun的蛋白表达.(3) 大鼠血清TNFα、sPLA2在缺血再灌12 h达高峰,PGE2呈双相变化,峰值分别在0.5 h和12 h,此后处于平台期.Rg1、Rb1明显抑制血清TNFα、s PLA2、PGE2水平.(4) Rg1、Rb1对sPLA2蛋白表达的影响:正常组及假手术组大脑切片可见有少量sPLA2蛋白表达,缺血再灌12 h sPLA2表达达高峰.Rg1、Rb1组sPLA2蛋白表达明显减少,Rg1、Rb1可抑制sPLA2的蛋白表达.讨论和结论: Rg1、Rb1对缺血再灌注引起的大脑皮层、海马细胞的凋亡和脑损害, 其机理在于:(1)抑制c-fos、c-jun的蛋白表达,阻断刺激信息的传递;(2)抑制PLA 2基因的表达;(3)抑制TNFα水平,阻止TNFα诱导脑神经细胞凋亡及阻止TNFα参与众多的细胞因子形成的网络系统;(4)抑制sPLA2活性及蛋白表达,sPLA2直接或通过脂类介质参与脑细胞凋亡与坏死过程,是神经元损伤的重要原因.     

几种线粒体DNA提取方法的比较

目的将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到最方便快速提取线粒体DNA的方法.方法采用健康成年雄性Wistar大鼠,取回肠上皮细胞样本18份,每份含3×10?6细胞,每6份分别用碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法提取线粒体DNA,紫外分光光度法定量.再用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase6亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA.结果3种方法提取线粒体DNA量差别明显改进高盐沉淀法量最多,为(1.26±0.23)μg;碱变性法次之,为(0.52±0.18)μg;Triton法为(0.31±0.16)μg.A260/A280均大于1.7.说明改进高盐沉淀法提取线粒体DNA具有操作简单,产量多的优点.将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNAATPase8亚基基因序列,说明该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序.讨论和结论线粒体在细胞凋亡,衰老及程序化死亡中发挥重要作用.已在多种疾病中发现mtDNA突变.对线粒体疾病的分子遗传机理的研究可以进一步阐明这些疾病的病因,并为治疗提供理论指导.胡义德、Tamura和Palva等用碱变性法提取了人血白细胞、心肌等组织中mtDNA;戴纪刚等建立的Triton法先除去细胞核,再分离提取胞浆中mtDNA.而高盐沉淀法通过SDS(十二烷基硫酸钠)破坏细胞膜、核膜,使蛋白质变性,从而游离出核酸,EDTA抑制细胞中DNA酶的活性,蛋白酶K进一步将蛋白质降解成小肽,加入饱和乙酸钠后,绝大部分线性大分子量DNA和蛋白质在SDS作用下变性形成沉淀,环状mtDNA仍为自然状态,通过高速离心,即可得到mtDNA.3种方法各有优缺点碱变性法操作时间较短,要求条件比较严格,不易重复;Triton法通过核质分离提取mtDNA操作时间短,但产量低,易降解.而高盐沉淀法操作简单,易重复,产量多,可依需用量扩大反应体系,使mtDNA质量得以容易控制.     

失血性休克肠上皮细胞线粒体形态与功能变化的研究

目的定量分析大鼠失血性休克肠上皮细胞线粒体形态与功能的改变,探讨失血性休克缺血缺氧时肠上皮细胞线粒体结构和功能的改变。方法Wistar大鼠随机分为对照组、失血性休克2h和5h组,采用计量电镜法观察、生物体视学测量线粒体形态,用clark氧电极测线粒体呼吸功能。结果失血性休克2h,线粒体平均截面周长、长径、平均直径及其面密度、体密度分别较对照组增加24%、27%、25%、26%、44%,失血性休克5h,平均截面面积、周长、长径、短径、平均直径及其面密度、体密度分别较对照组增加100%、45%、45%、50%、45%、47%、122%,嵴和基质破坏明显。休克2h组线粒体比表面与正常组比较下降14%。休克5h组线粒体比表面和数密度与对照组比较分别下降32%、24%。休克2h、5h组线粒体呼吸控制率（RCR）与对照组比较均有显著性改变,休克5h组线粒体呼吸控制率比对照组减少32%。结论和讨论失血性休克时大鼠肠上皮细胞线粒体形态发生显著改变。对休克大鼠肠线粒体形态学改变的定量分析表明,休克发生发展过程中,线粒体形态主要改变是,线粒体截面积、周长、长径、短径、平均直径、面密度、体密度、比表面显著增加,数密度下降。定量说明休克缺血缺氧时肠上皮细胞线粒体肿胀发展较快。休克2h后,线粒体膜尚完整,部分线粒体嵴紊乱,有髓样小体、小空泡形成。休克5h后,线粒体显著肿胀,嵴不规则、溶解、断裂和消失,在有嵴存在的线粒体,嵴内腔扩大较2h重,可见较大空泡形成。休克5h线粒体数量明显减少。形态变化是功能改变的基础,体视学方法准确反映了休克时线粒体形态变化过程。 呼吸控制率是表达线粒体功能最灵敏的指标。休克2h后,线粒体呼吸控制率已开始下降,至休克5h已下降32%,说明线粒体状态已明显改变,合成ATP能力下降。线粒体为细胞能量代谢的重要细胞器,三羧酸循环位于基质内,电子传递链和氧化磷酸化的部位在内膜,两者紧密相连。线粒体的结构与其呼吸功能及能量合成功能密切相关。嵴和基质的破坏,引起线粒体三羧酸循环破坏,电子传递受阻,氧摄取困难,加上基质内pH改变,ATP合成酶数量减少,这些因素都影响了线粒体合成ATP的功能。线粒体对缺血缺氧非常敏感,是细胞损伤最早累及的细胞器之一,是细胞保护的重点。保护线粒体,消除细胞内能量代谢障碍,可减轻细胞损伤。预防休克后肠屏障功能破坏对继发的脓毒血症、MODS有重要意义。     

失血性休克肠上皮细胞线粒体DNA ATPase 6,8亚基基因的改变

目的 观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNA ATPase6，8亚基基因的改变。方法 将6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA，采用PCR技术扩增后测序，检测突变点。结果 Wistar大鼠mtDNA ATPase6，8亚基基因存在多态性，休克组存在A 7797缺失和一定数量点突变：A7863G，G7950T，C8294G，T8505G。结论 失血性休克5h，肠上皮细胞mtDNA ATPase 6，8亚基基因会发生突变，由此可导致所编码的氨基酸的改变，有可能是酶活性改变的原因。     

心动过速射频消蚀治疗18例报告

1资料和方法1．1对象：20例心内电生理检直患者．其中18例有适应症者进行了射频消蚀术。男8例，女10例。年龄22～70岁（平均45±12）。18例患者均无器质性心脏病。1．2电生理检查方法：按统一的方法进行。1．3射频仪：成都锦江电子仪器厂产品。1．4消蚀电极导管：美国WERBERSTER公司生产大头电极导管。1．5左侧分路消蚀方法：本组中左侧务路6例，其中显性1例．隐匿性5例。显性劳路在窦性心律下标测定位；隐匿性旁路在右心定起搏下，根据V－A里高标测定位。1．6右侧房室旁路消蚀：本组2例右侧游离壁旁路，消蚀成功。1．7房室结汉通道消…     

线粒体DNA表达与损伤修复

高等动物线粒体 DNA(m t DNA)分为编码区和非编码区。编码区共 37个基因 ;非编码区控制 m t DNA的复制和转录。m t DNA比核 DNA突变率高。m t DNA以 D-环形式进行复制 ,转录兼有细菌、噬菌体和真核基因转录的很多典型特征。线粒体蛋白质合成系统和细胞质系统对专一的抑制剂的敏感性不一样。 mt DNA中碱基切除修复 (BER)最为普遍 ,并辅以其他方式修复多种损伤。线粒体缺乏核苷切除修复机制     

胎儿的无疤痕愈合

近来的实验和临床观察提示胎儿对损伤的反应与成人绝然不同,胎儿皮肤伤口修复迅速,且无疤痕形成。胎儿组织无疤痕修复的机理尚不清楚,可能与胎儿细胞或伤口环境,或两者共同有关。胎儿动脉氧分压低,只有20mmHg,损伤后炎性反应极轻微,以及无菌的羊水富含生长因子等可能都不是主要因素。在整个妊娠期,胎儿组织氧分压持续处于低水平,但大鼠或羊胎儿在妊娠后期的皮肤伤口修复与成人相似,也有疤痕形成。此外,Sinpson和Ross已证     

用DNA扩增法诊断血红蛋白病

本文介绍一种快速、灵敏的基因诊断技术——聚合酶链反应体外扩增DNA,及其在α-和β-地中海贫血产前诊断和HbS基因检测的应用。聚合酶链反应的样本可以直接用溶解的羊水细胞或绒毛标本,也可以用从干血纸片抽提的DNA。扩增DNA的分析毋需放射性DNA探针和Southern杂交,产前基因诊断可在5小时内完成。     

结节性甲状腺肿术后复发的相关因素分析及再手术治疗

目的分析结节性甲状腺肿术后复发的相关因素,同时探讨如何避免再次手术术后并发症。方法选择2004—2009年于我院行手术治疗的257例结节性甲状腺肿患者,105例行甲状腺次全切术,152例行甲状腺全切除术,术后平均随访48个月。结合患者的临床资料进行统计分析。结果随访过程中有63例复发,统计分析结果显示,首次手术行甲状腺次全切除术较行全切除术术后更易复发。复发患者均再次手术,46例术中解剖保护喉返神经,术后未出现喉返神经损伤症状;17例术中未保护喉返神经,术后有3例出现喉返神经损伤症状,分析认为术中保护喉返神经可有效防止喉返神经损伤。结论甲状腺全切除术可有效降低结节性甲状腺肿的复发,再次手术术中保护喉返神经可有效防止喉返神经的损伤。     

失血性休克大鼠肠上皮细胞mtTFA、COX Ⅰ、COX Ⅳ基因表达的改变

目的 探讨失血性休克(简称休克)大鼠肠上皮细胞核转录因子mtTFA基因以及核编码线粒体蛋白基因COX Ⅳ和线粒体编码COX Ⅰ基因表达的改变.以探讨在缺血缺氧性损害中核转录因子mtTFA对线粒体基因组表达的影响.方法 采用RT-PCR方法观察休克大鼠肠上皮细胞mtTFA、COX Ⅰ和COX Ⅳ基因mRNA量的改变.结果 休克早期mtTFA mRNA表达变化不明显,至休克4h有所增强,到休克5h下降到休克前水平;休克1h大鼠肠上皮细胞COXⅠ mRNA表达开始增加,3h达高峰,后又降低,到休克5h显著低于休克前水平.休克大鼠肠上皮细胞核基因编码COXⅣ mRNA休克3h略有增高,休克4h后开始下降,至休克晚期低于休克前水平.结论 mtTFA mRNA表达变化在休克时发生较晚,且升高幅度较小,说明休克时该基因对细胞缺血缺氧性损害的敏感性较低.休克时COX Ⅰ mRNA比COX ⅣmRNA上调速度快,维持时间长,说明休克早期线粒体基因表达的改变在细胞缺血缺氧性损伤的保护中起着更重要的作用.