大鼠坐骨神经再生过程中许旺氏细胞的自噬作用

背景 Wallerian变性时髓鞘溃变碎片的清除对于神经的再生至关重要 ,但溃变碎片的清除机制一直没有彻底阐明 ,关于参与清除的细胞成分类型仍有很大争议. 目的 探讨大鼠坐骨神经再生过程中许旺氏细胞的自噬作用. 设计 完全随机自身对照研究. 地点和对象 本实验由第一军医大学解剖教研室、汕头大学医学院中心实验室和西南大学达拉斯医学中心精神病学部共同完成 ,研究对象为成年 Wistar大鼠 30只 ,雌雄各半 ,体质量 180- 250 g. 干预 横切大鼠坐骨神经制作 Wallerian变性模型 ,分别于造模后 0,0.5,1,1.5,2,3,4,5,7,10,15 d取远断端组织行电镜观察. 主要观察指标 电镜观察轴突和髓鞘的超微结构 ,Gomori染色后检查酸性磷酸酶活性. 结果 轴突在第 0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状.第 2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,许旺氏细胞内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶 (AcPase)阳性.第 4天时内膜区偶见幼稚细胞 ,1周后见大量幼稚细胞.第 7天后许旺氏细胞内自噬泡数量开始减少.实验全程偶见巨噬细胞 ,内有吞噬泡. 结论 大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经许旺氏细胞自噬清除,许旺氏细胞脱分化为许旺氏细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程.     

利用绿色荧光蛋白筛选酵母突变株的新方法

目的建立快速简便筛选酵母突变株的方法。方法利用同源重组技术,通过转座子上的GFP基因,从酵母基因组文库中,检测发生突变的菌株,从而筛选出酵母突变株。结果应用荧光显微镜观察SC-ura 选择平板筛选出的酵母,有绿色荧光发出的即为阳性菌落。结论利用同源重组技术,初步筛选出了所需的酵母突变株。     

在体组织工程新概念

基于对人发角蛋白(HHK)人工腱长达10余年的实验和临床应用研究的结果,我们提出了在体组织工程化肌腱的概念,即HHK人工腱及其降解产物能诱导周围组织内的成腱干细胞增殖、分化为腱细胞并刺激其他细胞分泌某些细胞因子参与调节,最终形成自体腱。我们在实验中还发现,HHK植入损伤骨组织、神经组织和肌组织后在原位构建出相应的组织。从而进一步提出“在体组织工程”新的理论体系。它是指可吸收性生物支架材料植入体内后,通过材料本身及其降解产物激活周围组织自身的成体干细胞分裂、增殖、分化,并在体内生理条件下与基质材料达到最佳的有机融合,并最终完成替代基质材料形成在解剖、组织学意义上与自体组织几乎完全一致的结构,从而在体内完成构建完整的组织工程化组织或器官的过程。在体组织工程不仅利用体内微环境和体内精细的调节机制“在体培养”种子细胞,消除了现行组织工程化组织或器官(传统组织工程)中种子细胞的排斥反应、变异和功能退化及复杂的保存、运输和高额费用等问题,最重要的是更贴近临床需要。不仅有巨大的临床应用潜能,而且尚具有重要的理论价值。     

运用组织工程学原理构建间充质干细胞的三维培养体系

目的　探讨普通重力和模拟微重力条件下构建人间充质干细胞的三维培养体系。方法　将人间充质干细胞和人发角蛋白共同置于普通重力和模拟微重力条件下进行培养。结果　当转速为 37.2r min时 ,人发角蛋白在旋转式细胞培养系统中呈悬浮状态 ,沿一条与氧交换膜的轴心垂直的环形轨道随液体流转动 ,1× 10 3个 ml的人间充质干细胞和人发角蛋白共培养 7d ,在模拟微重力条件下有较多的间充质干细胞贴附生长于人发角蛋白表面 ,密集、平行排列 ,细胞在人发表面几乎形成密集的一层 ,在普通重力条件下人发角蛋白表面生长的间充质干细胞较稀疏 ,大多呈多角形。结论　普通重力和模拟微重力条件均适合于间充质干细胞的三维培养 ,而后者更有利于人间充质干细胞的三维培养体系的构建     

IL-1β激活后的许旺细胞与人发角蛋白三维培养构建人工神经桥接体

目的 探索白细胞介素-1β（IL-1β）激活后的许旺细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体,修复神经缺损.方法 体外培养纯化的许旺细胞经IL-1β激活前、后与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处.S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白共培养情况,原位杂交法观察人发角蛋白降解及神经生长因子（NGF）在坐骨神经内的表达,移植术4周后检测坐骨神经功能指数.结果 经IL-1β激活后的许旺细胞能更好地黏附于人发角蛋白表面,进行分裂、增殖.3～4周,桥接体内的人发角蛋白开始降解,其周围可见IL-1β激活后的处于增殖分裂期的许旺细胞NGF表达强阳性,坐骨神经功能恢复时间提前.结论 经IL-1β激活后的许旺细胞与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白复合培养构建成人工神经桥接体,具有修复神经缺损的同时还能够加速坐骨神经损伤后功能的恢复.     

淋巴细胞自噬性凋亡的超微结构细胞化学研究

本实验用诱电镜和细胞化学染色法放线菌酮处理和γ射线照射大鼠胸腺、脾脏和肠系膜淋 的超微结构。结果显示，放线菌酮注射后４ｈ；或γ射线照射２ｈ后引起大鼠胸腺、脾脏及肠系膜淋巴结中的淋巴细胞凋亡。凋亡淋巴细胞发生一系更的形态学变化，其胞核染色持凝集，重排、使核呈没的形态；凋亡淋巴细胞的线粒体，内质网、溶酶体等细胞器大量增殖，我们称之为细胞反跳现象；大部分凋亡淋巴细胞凋恨时呈现典型的自噬性凋亡特征，即内持     

BMP的信号转导

骨形态发生蛋白能调节细胞的生长、分化、趋化和细胞凋亡，在胚胎发育中具有重要作用。本对骨形态发生蛋白的分子结构及其受体，Smad蛋白的分类及其在骨形态发生蛋白信号转导通路中作用的研究进展进行了综述。     

腹腔巨噬细胞的受体介导的内吞与自噬体的形成

目的：探讨巨噬细胞受体介导内吞过程中细胞膜源性小泡、小管与自噬体形成的关系。方法：采用刀豆素A-胶体金(ConA-Au)示踪电子显微镜技术，对小鼠腹腔巨噬细胞膜进行标记，分别于5min、10min、20min的变化后，收集细胞进行电镜观察。结果：标记ConA-Au 5min后，巨噬细胞表面及其突起的微绒毛上结合大量的ConA-Au颗粒，     

人发角蛋白人工腱诱导自体腱形成中胶原原纤维的形态学变化

目的观察人发角蛋白(HHK)人工腱诱导自体腱形成过程中胶原原纤维形成的形态学变化。方法制备肌腱损伤动物模型,植入HHK人工腱,于术后3、6、9、12、16周取出,进行光镜及电镜观察。结果自体腱形成过程中,先后有一级、二级和三级胶原原纤维形成。结论HHK人工腱诱导自体腱形成过程中,人工腱植入区肌腱断端和腱膜下的腱细胞去分化,分泌大量的胶原蛋白,并在细胞外生成一级胶原原纤维,再逐级融合形成二级和三级胶原原纤维,最终多数腱细胞胶原化而消失。