小白鼠肝细胞和胰腺外分泌细胞的线状溶酶体研究

用电镜酶细胞化学方法,显示了小白鼠肝细胞和胰腺外分泌细胞的线状溶酶体。该溶酶体呈酸性磷酸酶(ACPase)阳性反应,长条状,长度2～8μm,横径0.15～0.3μm,分支或不分支,多蜿蜒走行在细胞器之间。     

小鼠巨噬细胞内吞体的形态学研究

小鼠巨噬细胞内吞体的形态学研究采用电镜形态学方法，观察胶体金（Ａｕ）标记的ＣｏｎＡ（ＣｏｎＡ－Ａｕ）与腹腔巨噬细胞（ＭΦ）表面ＣｏｎＡ受体结合，内吞及内吞体（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）的形态学演变过程。连续４天采用糖元注入法诱导小鼠腹腔ＭΦ增生，第５天将小鼠...     

高渗NaCl溶液治疗肉瘤180的光镜与透射电镜观察

用以NaCl为主的高渗溶液注射鼠肉瘤180内,治疗24h末肿瘤坏死面积与对照组相比有显著差异(P<0.01).透射电镜观察,对照组肿瘤细胞的结构清楚,几乎无循环障碍;治疗组,最初见到细胞和细胞器皱缩,电子密度增高,淤滞性充血和小血管内红细胞皱缩,继而细胞浆空胞化,核固缩和核溶解,表明肿瘤细胞已坏死。     

利用共焦镜检测凋亡早期巨噬细胞内pH的变化

用激光扫描共聚焦显微镜（ACAS570）和pH荧光探针SNARF－1／AM实时检测地塞米松处理巨噬细胞胞浆pH的动态变化。结果显示，加入地塞米松，巨噬细胞炮装发生快速、短期碱化，随后脑浆pH值缓慢降低。结果表明，胞浆酸化是细胞凋亡发展的必然过程，胞浆碱化则很可能与细胞凋亡的发生相关。     

人发角蛋白神经导管诱导兔胫神经修复时NGF和p75的表达及分布

目的 研究人发角蛋白(HHK)神经导管诱导兔胫神经缺损再生修复时神经生长因子(NGF)及其低亲和受体p75的表达及分布。方法 取正常胫神经、缝线连接的胫神经和：HHK导管桥接的胫神经术后不同时期的切口部位及相邻组织制作石蜡切片，用免疫组化法对切片进行染色。结果 正常胫神经组织中无NGF阳性染色。术后76d，HHK周围的新生组织中NGF免疫组化染色表现为强阳性，而缝线周围的组织中无阳性着色。术后100d，与正常胫神经组织无显著差异。正常胫神经组织中无p75阳性染色。术后76d，导管组HHK周围较成熟的神经组织中p75免疫组化染色为弱阳性，而新生组织中为强阳性。术后100d，导管组的p75免疫组化染色与正常神经组织无显著差别。结论 HHK及其降解产物能诱导NGF和p75的产生，为神经再生创造良好的微环境；而缝线无此诱导作用。在新生神经组织中NGF和p75含量多，较成熟的神经组织中含量少。     

烧伤皮肤微血管的电子显微镜观察

烧伤时微血管超微结构的研究多偏重于血管通透性增高的形态学的变化,用电镜研究烧伤后微血管内凝血的机理报道不多。我们以前的工作证实,血栓形成是导致烧伤皮肤微循环血流淤滞的重要因素,它对烧伤的程度、修复和预后均有重要的影响。为了进一步查明烧伤后皮肤微血管中血栓形成的超微结构基础,我们对兔耳窗部皮肤烧伤后的     

抑制性消减杂交法筛选植入人发角蛋白与单纯脊髓损伤大鼠基因表达的差异

目的:采用抑制性消减杂交筛选植入人发角蛋白大鼠损伤脊髓基因性差异表达。方法:实验于2004-11在汕头大学中心实验室进行。分别从植入人发角蛋白损伤组与单一损伤对照组4thw组织中提取mRNA,反转录成双链cDNA,经RsaI酶切、接头连接、两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链扩增,而后将消减cDNA产物进行T/A克隆和测序分析。结果:所获植入人发角蛋白脊髓损伤组织差异表达基因的消减cDNA产物散布在280～800bp范围。经蓝白筛选和酶切鉴定,共得到232个阳性克隆。对其中20个做测序分析获得了氨基酸转运蛋白系统A2(Ata2)、细胞色素氧化酶Ⅲ(COXⅢ)、抗过氧化物蛋白5(Prd5)、Tap1蛋白和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cst3)等5个表达蛋白。结论:prd5、Ata2和COXⅢ分别通过参与脊髓损伤后抗氧化损伤过程,起到抑制自由基、兴奋性氨基酸的产生,减轻Ca离子紊乱的程度,降低了继发性损害对脊髓组织的二次损伤程度;而Tap1蛋白和Cst3则参与人发角蛋白的降解过程。     

大鼠坐骨神经再生过程中许旺氏细胞的自噬作用

背景：Wallerian变性时髓鞘溃变碎片的清除对于神经的再生至关重要，但溃变碎片的清除机制一直没有彻底阐明，关于参与清除的细胞成分类型仍有很大争议。目的：探讨大鼠坐骨神经再生过程中许旺氏细胞的自噬作用。设计：完全随机自身对照研究。地点和对象：本实验由第一军医大学解剖教研室、汕头大学医学院中心实验室和西南大学达拉斯医学中心精神病学部共同完成，研究对象为成年Wistar大鼠30只，雌雄各半，体质量180—250g。干预：横切大鼠坐骨神经制作Wallerian变性模型，分别于造模后0，0．5，1，1．5，2，3，4，5，7，10，15d取远断端组织行电镜观察。主要观察指标：电镜观察轴突和髓鞘的超微结构，Gomori染色后检查酸性磷酸酶活性。结果：轴突在第0．5天时从髓鞘脱离，溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片，许旺氏细胞内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片，并与溶酶体融合形成自噬泡，呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞，1周后见大量幼稚细胞。第7天后许旺氏细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞，内有吞噬泡。结论：大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经许旺氏细胞自噬清除，许旺氏细胞脱分化为许旺氏细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。     

人发角蛋白人工腱诱导自生腱形成过程胶原Ⅰ型mRNA的表达

背景大量的动物实验和临床应用已经证实,人发角蛋白(human hair keratin,HHK)人工腱能诱导机体形成自生腱,自生腱形成的过程实质上主要是胶原Ⅰ型的合成、分泌和组装的过程.目的探讨胶原Ⅰ型mRNA在人发角蛋白人工腱诱导自生腱组织形成过程中的表达.设计以实验动物为观察对象,完全随机对照实验.单位南方医科大学组织学与胚胎学教研室和生物化学与分子生物学教研室.材料实验于2003-05/2004-09在解放军第一军医大学实验动物中心完成.实验动物中心提供实验用新西兰大白兔33只,体质量2.0～2.5 kg,雌雄不限.随机分成实验3,6,9,12,16,20周组,阴性对照9,20周组和正常对照组,其中实验3,6周组和正常对照组每组3只,其余每组4只.由生物化学与分子生物学教研室提供的人发角蛋白人工腱为经一系列生物化学处理的人发,按降解速度不同可分为快速(F)、中速(B)和慢速(Z)3个不同降解组分.人发角蛋白人工腱是由快速,中速和慢速这3种组分按433的比例混合编制而成.方法①实验组行双侧跟腱手术,切断跟腱长1 0～2.0 cm,两断端与人发角蛋白人工腱缝合,缝合腱膜,皮肤一期缝合.②阴性对照组为离断兔肌腱1.0～2.0 cm,断裂肌腱不进行连接,而缝合腱膜和皮肤.③正常对照组为正常兔肌腱.实验组分别于第3,6,9,12,16,20周取材,阴性对照组分别于第9,20周取材.通过反转录聚合酶链反应技术测量各时期胶原Ⅰ型mRNA表达.主要观察指标正常肌腱与人发角蛋白人工腱各个时期诱导形成的自生腱中胶原Ⅰ型mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GADPH)mRNA表达的比值.结果33只大鼠全部进入结果分析.①正常肌腱组织中Ⅰ型胶原mR-NA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA表达的比值为0.96±0.02.②阴性对照组9,20周组取材发现,两断端肌腱未连接,并且向两侧回缩.③实验组人发角蛋白人工腱植入后诱导形成的自生腱中Ⅰ型胶原mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA表达在第3周的已经出现,第3～6周为急骤上升,第6周到达高峰,第9～20周表达量呈稳定状态.实验组第6周表达量明显高于正常对照组(F=6.254,P＜0.05),实验组其余各周表达量也明显高于正常对照组(F=1.258～1.987,P＞0.05).结论人发角蛋白人工腱植入后,自生腱的形成主要是腱细胞增殖活化,合成并分泌胶原Ⅰ型蛋白,完成肌腱的修复.     

抑制性消减杂交法筛选植入人发角蛋白与单纯脊髓损伤大鼠基因表达的差异

目的：采用抑制性消减杂交筛选植入人发角蛋白大鼠损伤脊髓基因性差异表达。 方法：实验于2004-11在汕头大学中心实验室进行。分别从植入人发角蛋白损伤组与单一损伤对照组4^thw组织中提取mRNA，反转录成双链cDNA，经RsaⅠ酶切、接头连接、两次消减杂交和两次抑制性聚合酶链扩增，而后将消减cDNA产物进行T／A克隆和测序分析。 结果：所获植入人发角蛋白脊髓损伤组织差异表达基因的消减cDNA产物散布在280～800bp范围。经蓝白筛选和酶切鉴定，共得到232个阳性克隆。对其中20个做测序分析获得了氨基酸转运蛋白系统A2（Ata2）、细胞色素氧化酶Ⅲ（coxⅢ）、抗过氧化物蛋白5（Prd5）、Tap1蛋白和半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cst3）等5个表达蛋白。 结论：prd5、Ata2和COXⅢ分别通过参与脊髓损伤后抗氧化损伤过程。起到抑制自由基、兴奋性氨基酸的产生，减轻Ca离子紊乱的程度。降低了继发性损害对脊髓组织的二次损伤程度；而Tap1蛋白和Cst3则参与人发角蛋白的降解过程。