大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞作用的电镜和电镜细胞化学观察

本文证实大蒜乳剂具有显著抑制肿瘤的作用,荷瘤小鼠的生命延长率和抑瘤率分别为81％和72％。在此基础上,我们利用电镜和电镜细胞化学技术,观察大蒜乳剂对S180腹水癌细胞超微结构及几种酶活性的影响。单次用药后2、6小时,部分肿瘤细胞表面微绒毛肿胀、脱落,核染色质浓缩,胞质内出现大量空泡;48小时后,肿瘤细胞膜表面微绒毛肿胀,脱落现象仍很严重,但细胞核和细胞质的受损程度已经减弱;72小时受损肿瘤细胞恢复正常。连续4次给药后,肿瘤细胞数量明显减少,细胞体积变小,部分肿瘤细胞的损伤程度与单次用药后6小时基本相似。连续4次给药后,肿瘤细胞的碱性磷酸酶(AlPase)、5核苷酸酶(5Nase),葡萄糖6磷酸酶(G6-Pase)活性下降。实验结果证明,大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞有明显的细胞杀伤作用。     

恒河猴骨髓间充质干细胞的体外培养及其端粒酶活性

目的：建立骨髓间充质干细胞(MSCs)的培养方法，并检测其细胞周期及端粒酶活性。方法：无菌抽取恒河猴胫骨骨髓，采用贴壁筛选法分离、培养骨髓MSCs；原位杂交方法检测其端粒酶活性；流式细胞仪检测细胞周期。结果：培养的骨髓MSCs呈梭形，平行排列或成集落；细胞端粒酶活性呈阳性反应；细胞周期中G1、S、G2期的细胞所占百分比分别为89．5％、7．8％、7．7％。结论：培养的骨髓间MSCs处于未分化阶段，具有较强的增殖能力。     

基因芯片检测自噬与凋亡的基因表达谱改变

目的:利用基因芯片研究自噬与凋亡关系,阐明两者间的分子调控机制.方法:采用4096条人类基因的cDNA芯片检测3-MA自噬抑制剂在诱导凋亡的人肝细胞株L02基因表达谱的改变,以探讨在自噬被抑制的情况下,凋亡的发生及其相关基因的变化.结果:L02细胞株cisplain凋亡诱导16小时的实验模型中,实验组在诱导凋亡前加入3-MA自噬抑制剂,诱导前后对照组与实验组相比,差异表达基因共151条.其中上调基因74条;下调基因77条.APG5基因无变化.结论:用基因表达芯片对3-MA自噬抑制剂在凋亡诱导的L02细胞株基因表达谱的改变进行高通量分析,能够有效地观察出凋亡基因及相关基因的表达.自噬被抑制的状态下,凋亡相关基因同样表达,说明3-MA自噬抑制剂并不能阻止凋亡的发生.     

应用改良的免疫胶体金包埋方法检测p38蛋白激酶在Raw细胞中的定位

目的:采用两种包埋方法Lowicryl K4M低温包埋和改良Spurr包埋,观察p38在Raw264.7细胞中的免疫电镜定位,摸索出一种操作简单、适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋方法。方法:分别采用低温包埋剂Lowicryl K4M和改良Spurr树脂包埋两种方法,经包埋后染色,观察p38蛋白激酶在Raw264.7中的超微结构分布。结果:改良Spurr树脂包埋后结果显示,未受刺激的及EGF刺激的Raw264.7中,p38在胞浆和胞核中金颗粒弥散在细胞的各个部分,受到LPS刺激后,细胞核区的金颗粒明显增多,而胞浆区域的金颗粒显著减少,观察到的Raw细胞超微结构清晰、免疫胶体金定位准确,与低温包埋剂Lowicryl K4M包埋结果完全一致。结论:相对于Lowicryl K4M,Spurr树脂价格低廉,粘度低、抗湿性能好、切割性能佳、操作简单,是一种适用于南方潮湿多雨天气的免疫电镜包埋剂,可以替代低温包埋剂Lowicryl K4M。     

大蒜乳剂抗实体型S180肿瘤细胞的组织细胞化学研究

注射大蒜乳剂后小鼠S180实体瘤体积缩小,抑瘤率为70.3%。肿瘤细胞呈致死性损伤,肿瘤细胞核固缩、细胞质空泡化、细胞崩解。瘤块内出现大量的中性粒细胞和少量的巨噬细胞,中性粒细胞多与肿瘤细胞紧密接触,细胞内有大量的过氧化氢酶阳性颗粒,提示大蒜乳剂既有对实体型S180肿瘤细胞的直接杀伤作用,又能调动中性粒细胞和巨噬细胞间接杀伤肿瘤细胞。     

IL-1β促进Schwann细胞增殖及分泌NGF的研究

为观察白介素-1β(IL-1β)对Schwann细胞增殖及分泌神经生长因子(NGF)的影响,本研究取3d龄的大鼠坐骨神经纯化培养Schwann细胞,然后分4组进行处理。处理方法为:A组加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,B组仅在纯化后第1d向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,C组每天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,D组隔天向培养基中加入2.0ng/mlIL-1β,分别培养5d。倒置显微镜下观察Schwann细胞的形态,用抗S-100蛋白免疫组化鉴定Schwann细胞,经流式细胞仪(FCM)检测细胞的分裂增殖情况,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测NGFmRNA表达的变化,酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测细胞培养基中NGF蛋白的表达量。结果显示:D组Schwann细胞增殖率、NGFmRNA合成量和NGF蛋白表达量均显著高于其他三组(P<0.05)。此结果说明IL-1β能够促进Schwann细胞的分裂增殖,并且促进胞内NGFmRNA的合成及胞外NGF的分泌,其作用持续时间大约为2d。     

自噬分子机制的研究动向

自噬是细胞对自身结构进行蛋白降解的一种方式。为从分子水平揭示细胞内部自噬调控机理 ,需研究该过程的各个环节。新近的研究 ,特别是近几年自噬基因的发现证实 ,蛋白磷酸化参与的自噬调控 ;自噬体膜的形成 ;微管系统传输自噬体以及自噬与凋亡的内在联系 ,都有分子水平的依据 ,这给更深入地研究自噬分子机理提供了重要的信息。     

长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca~(2+)浓度的相关性研究

目的　研究长春新碱 (VCR)诱导的L 0 2细胞自噬性凋亡时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ,以及自噬特异性抑制剂 3 methyladenine(3MA)对此自噬性凋亡和 [Ca2 +]i的影响。方法　应用已建立的VCR诱导L 0 2细胞自噬性凋亡模型 ,使用电镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;用Fluo 3/AM荧光探针经流式细胞仪测定L 0 2细胞平均 [Ca2 +]i。结果　电镜及流式细胞术检测证实VCR诱导L 0 2细胞发生了自噬性凋亡 ,此凋亡过程中 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显 :3MA可显著抑制VCR所致的 [Ca2 +]i升高并能降低凋亡细胞比例。结论　在体外条件下VCR可以诱导L 0 2细胞自噬性凋亡 ,其发生可能与VCR导致 [Ca2 +]i升高有关 ;3MA可能通过抑制 [Ca2 +]i升高而抑制自噬及VCR所致的自噬性凋亡。     

多核巨细胞在人发生物材料降解中的超微观察

目的：在超微结构水平观察人发生物材料修复周围神经缺损过程中自身的降解与多核巨细胞的关系。方法：制备SD大鼠坐骨神经缺损模型，用人发生物材料来桥接缺损的坐骨神经，电镜观察巨噬细胞与多核巨细胞对降解的人发生物材料吞噬消化过程。结果：术后3周，巨噬细胞聚集在人发周围，毛小皮已经开始剥脱断裂；6周时，人发周围出现由多个巨噬细胞融合形成的多核巨细胞，均质状的崩解颗粒及部分毛小皮碎片被巨噬细胞吞噬；12周时，有些皮质颗粒已降解为角蛋闩细丝，巨噬细胞内含有大量颗粒。结论：在人发生物材料的降解过程中，多核巨细胞作为屏障隔离了材料和宿主组织细胞，毛小皮断裂的碎片和疏松的皮质颗粒，被巨噬细胞所吞噬，然后在大量溶酶体酶的水解下，完成对人发生物材料的清除。     

三偏磷酸酶(TMPase)—电镜细胞化学的溶酶体标识酶

作为溶酶体标识酶的非特异性酸性磷酸酶(E.C.3.1.3.2)(ACPase,acid phosphata-se),以β-甘油磷酸(β-GP,β-glycero-phosphate)或磷酸—胞苷(CMP,cytidine5’-monophosphate)作反应底物,用Gomori方法已在细胞化学的领域内得到了广泛的证明与研究。三偏磷酸酶(E.C.3.6.1.2)(TMP-ase,Trimetaphosphatas)是近年来电镜细胞化学研究中颇受重视的一种无机磷酸酶,它以无机三偏磷酸作底物,已在许多组织细胞中显示出是一种可靠的溶酶体标识酶。其电镜细