人发角蛋白材料植入修复受损骨骼肌后降解过程的观察

目的阐明人发角蛋白(HHK)材料植入体内后的降解过程。方法7只新西兰兔随机分为术后1、3、6周实验组和正常对照组。实验组进行骨骼肌切除后植入HHK材料,按期进行常规形态学和泛肽组化观察。HHK材料由3种降解速度的F、B、Z组分混合编制而成。结果光镜形态学观察显示材料植入后第1周出现HHK材料毛小皮脱落,HHK材料呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞;到第3周时可见降解成颗粒的材料被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬。泛肽酶组化显示第1周时HHK材料及其周围的巨噬细胞、多核巨细胞呈阳性反应;第6周时材料进一步降解,同时伴有新生肌肉。电镜形态学观察显示毛发被降解成小的颗粒状。结论HHK材料的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的HHK材料降解成颗粒,随后细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的材料颗粒进行降解,且具有协同作用;同时肌卫星细胞被活化形成新生肌组织。     

应用组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损

目的:由于肌腱来源受限及人工代用品力学性能差等缺点限制了临床肌腱损伤的修复,为此探索组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损的可行性,以期为肌腱修复提供实验依据。方法:实验于2000-08/2001-12在第一军医大学中心实验室完成。30只新西兰白兔分为2组:人发角蛋白(HHK)组:用HHK材料修复兔跟腱缺损;组织工程化肌腱组:骨髓间充质干细胞(MSCs)与HHK在模拟微重力条件下形成细胞-材料复合体,修复兔跟腱缺损。采用组织学和免疫组织化学方法观察术后3,6和12周损伤肌腱的修复情况。利用分子生物学手段检测新生肌腱Ⅰ型胶原mRNA表达。结果:扫描电镜下可见MSCs-HHK组织工程化肌腱上有大量梭形的MSCs贴附生长,细胞平行排列,细胞间有突起相连。与HHK组相比,组织工程化肌腱组新生肌腱组织Ⅰ型胶原mRNA呈较高表达,腱细胞增生活跃,胶原纤维更为成熟。结论:在模拟微重力条件下以MSCs为种子细胞,HHK为支架材料构建的组织工程化肌腱能够有效地修复兔跟腱缺损。     

人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。     

人血清白蛋白诱发大鼠肝纤维化模型早期超微结构及细胞化学观察

<正> 用人血清白蛋白诱发大鼠肝纤维化,其发生率可达80％以上。我们对模型早期还未出现光镜所见纤维化改变的标本,进行超微结构及细胞化学观察,以期对新产生的模型提供依据。材料与方法选成年Wistar大鼠16只,分为两组。(1)实验组12只,先皮下分四点注射加弗氏佐剂的人血清白蛋白(美国Alpha公司制品),每隔两周注射一次,共四次,每次总量4.0mg(0.5ml)。用电泳法测出大鼠血清抗人血清白蛋白抗体阳性者,改用0.5ml生理盐水稀释人血清白蛋白尾静脉攻击,每周两次,共攻击九次。第一次为2.5mg,第二次为3.0mg,第三次为3.5mg,第四次以后每次为4.0mg。于停止攻击后30天,动物在麻醉下用1.25％戊二醛     

含人自噬基因hAPG12穿梭载体构建及其在酵母自噬中的作用

目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭栽体pESC—URA—EGFP—hAPG12，将构建好的栽体转化到酵母菌内．以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP—hAPG12融合基因，鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌一酿酒酵母穿梭载体pESC—URA中，构建载体pESC—URA—EGFP—hAPG12并将其转化到酵母，荧光显微镜下观察，用自噬诱导剂诱导酵母自噬以观察hAPG12在酵母内的表达定位。结果证实EGFP-hAPG12基因已完全正确亚克隆到pESC—URA中，荧光显微镜观察结果证明EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中成功表达，以诱导培养24h的荧光最强。EGFP—hAPG12定位于酵母的自噬体中。结论成功构建了具有报告基因的重组真核表达栽体pESC—LIRA—EGFP—hAPG12；EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中得到表达，hAPG12在酵母自噬体形成过程中起作用。     

冰冻技术的电镜改装

冰冻技术的电镜改装在生物电子显微学的研究中，低温冰冻技术由于具有独特的优点获得越来越广泛的应用。高分辨生物大分子电子晶体学的研究，因为可应用冰冻－水合技术大大减轻电子束的幅射损伤和真空损伤，从而成为基本技术。但冰冻技术在应用中也遇到一些困难：其中一个...     

生后至8个月龄大鼠肝贮脂细胞的电镜观察

用透射电镜观察了生后至8个月龄大鼠肝(贝宁)脂细胞的超微结构并讨论了其功能。新生鼠的(贝宁)脂细胞呈幼稚状态,核仁不明显;生后1—2个月的大鼠(贝宁)脂细胞核切迹深而多;成鼠(贝宁)脂细胞核质比率减小,核仁明显,粗面内质网发达。(贝宁)脂细胞含较多脂滴和致密小体,在脂滴和致密小体周围有糖元颗粒包绕,这支持了糖元可由吞饮摄取的葡萄糖合成的观点;并认为碳水化合物参与脂肪的合成。在狄氏隙内有大量胶原原纤维,提出(贝宁)脂细胞有合成胶原原纤维的作用。     

婴儿脊髓性肌萎缩1例报告

脊髓性肌萎缩是一种神经系统遗传性疾病,其婴儿型又称为Werdnig-Hoffmann氏病,现将我们所见1例报告如下。 患者,男,2岁5个月,因全身软弱无力2年余,发热咳嗽3天,于1984年4月入院。患儿为第一胎,足月顺产。其父母为非近亲配偶,家族中无同样     

受体介导内吞引起的巨噬细胞膜磷脂流动性的改变

用光敏感磷脂荧光探针NBD－C6－HPC和FRAP（FluorescenceRecoveryAfterPhotobleaching）技术，测量了刀豆素A（ConA）、麦芽凝集素（WGA）、酵母多糖（Z．A）3种配体刺激前后巨噬细胞膜磷脂扩散系数及荧光恢复率的变化．结果显示，静息状态下膜磷脂的扩散系数D＝（11．37±1．22）×10－10cm2／s，荧光恢复率R＝86．2±7．7（％，漂白后200s）；3种配体刺激30min后，膜磷脂扩散系数和荧光恢复率（漂白后200s）分别为D＝（3．24±1．38）×10-10，R＝80.5±9．5（ConA）；D＝（5．30±1．55）×10－10，R＝50．9±9．8（WGA）;D＝（1．45±1．4）×10－10，R＝56.4±8．7（Z.A）．膜磷脂扩散系数的降低，与配体-受体复合体流动性的降低相关．     

海水直接肺损伤的犬模型研究

目的建立海水直接肺损伤的犬模型,为研究海水及其成分对肺直接损伤机制及其治疗提供研究平台。方法排除低氧血症和酸中毒等因素对海水直接肺损伤的影响,选择18只健康犬随机分为3组(n=6), 即全肺海水灌注组( A组)、右肺海水灌注组( R组)和右膈叶海水灌注组即海水直接肺损伤组(D组)。对比观察三组血流动力学、血气酸碱、电解质等指标以及肺组织细胞学改变,以支气管纤维镜连续观察D组三级支气管内海水灌注前后的变化,检测支气管肺泡液和血液乳酸脱氢酶(LDH-L)、碱性磷酸酶(ALP)浓度。结果(1)D组的动脉氧分压(PaO2)、动脉二氧化碳分压(PaCO2)、pH、实际重碳酸盐(AB)、过剩碱(BE)、呼吸频率、潮气量值与其余两组比较有显著差异(P<0.01)。(2)A组和R组各时段PaO2、Pa-CO2、pH、AB、BE、潮气量、呼吸频率值与海水灌注前相比有显著差异(P<0.01)。(3)D组血流动力学和血气酸碱及电解质等指标与海水灌注前相比无统计学差异(P>0.05)。(4)三组海水灌注区肺组织损伤均明显,出现充血水肿,局部有暗红色片状改变和梗死出血灶,光镜下可见肺泡水肿、肺泡萎陷、肺间质充血水肿明显及大量中性粒细胞浸润和肺出血。电镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、呼吸膜增宽、血小板附壁。(5)支气管纤维镜连续观察D组海水灌注区支气管有不同