加强基础研究促进组织工程学协调发展

组织工程(tissue engineering)一词最早是由美国国家科学基金委员会于1987年正式提出和确定的。种子细胞、生物支架材料和组织构建技术是组织工程学研究的主要科学问题。组织工程的提出和建立虽然只有10多年的时间，但已在国际上得到迅猛发展。     

去分化与细胞组织损伤再生

去分化是发育生物学和形态学领域一个古老又常新的现象。既往研究多注重去分化和肿瘤发生的关系。我们的系列研究发现去分化和细胞组织损伤再生有着重要和必然的联系。在周围神经损伤再生中发现局部有大量施万细胞通过自噬机制吞噬消化自身髓鞘成分和衰老的细胞器，同时以胞质脱落的方式芽生出部分胞质脱落体，细胞内含大量游离核糖体和多聚核糖体等原始细胞器，保留极少量有活力的线粒体和高尔基体，呈现去分化后的幼稚化状态。在长春新碱诱导L02(肝细胞株)细胞损伤实验中发现L02细胞中有大量的自噬体，细胞周围也出现大量发芽脱落后游离于细胞外的胞质脱落体．细胞耐过之后呈现幼稚化．我们也称之为去分化。细胞经过去分化减轻代谢负担，清除衰老和受损的细胞器，恢复活力．接着大量增殖以修复重建损伤组织。在当前大部分科研人员一致看好干细胞在组织损伤再生中的重要作用的背景下，本研究根据长期观察实践．提出成熟细胞去分化幼稚化参与再生重建的观点，以供同行专家讨论。     

急性CCl4肝损伤的研究进展

急性四氯化碳 (CCl4 )肝损伤时肝脏中自由基清除剂和细胞因子 ,粘附分子会发生变化并在此过程中起作用 ,或促进肝损伤或预防肝损伤。许多对肝脏具有保护作用的中、西药物其作用机制各不相同。     

人发角蛋白材料植入修复受损骨骼肌后降解过程的观察

目的阐明人发角蛋白(HHK)材料植入体内后的降解过程。方法7只新西兰兔随机分为术后1、3、6周实验组和正常对照组。实验组进行骨骼肌切除后植入HHK材料,按期进行常规形态学和泛肽组化观察。HHK材料由3种降解速度的F、B、Z组分混合编制而成。结果光镜形态学观察显示材料植入后第1周出现HHK材料毛小皮脱落,HHK材料呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞;到第3周时可见降解成颗粒的材料被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬。泛肽酶组化显示第1周时HHK材料及其周围的巨噬细胞、多核巨细胞呈阳性反应;第6周时材料进一步降解,同时伴有新生肌肉。电镜形态学观察显示毛发被降解成小的颗粒状。结论HHK材料的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的HHK材料降解成颗粒,随后细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的材料颗粒进行降解,且具有协同作用;同时肌卫星细胞被活化形成新生肌组织。     

应用组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损

目的:由于肌腱来源受限及人工代用品力学性能差等缺点限制了临床肌腱损伤的修复,为此探索组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损的可行性,以期为肌腱修复提供实验依据。方法:实验于2000-08/2001-12在第一军医大学中心实验室完成。30只新西兰白兔分为2组:人发角蛋白(HHK)组:用HHK材料修复兔跟腱缺损;组织工程化肌腱组:骨髓间充质干细胞(MSCs)与HHK在模拟微重力条件下形成细胞-材料复合体,修复兔跟腱缺损。采用组织学和免疫组织化学方法观察术后3,6和12周损伤肌腱的修复情况。利用分子生物学手段检测新生肌腱Ⅰ型胶原mRNA表达。结果:扫描电镜下可见MSCs-HHK组织工程化肌腱上有大量梭形的MSCs贴附生长,细胞平行排列,细胞间有突起相连。与HHK组相比,组织工程化肌腱组新生肌腱组织Ⅰ型胶原mRNA呈较高表达,腱细胞增生活跃,胶原纤维更为成熟。结论:在模拟微重力条件下以MSCs为种子细胞,HHK为支架材料构建的组织工程化肌腱能够有效地修复兔跟腱缺损。     

人发角蛋白植入大鼠损伤脊髓部位的电镜观察

目的:脊髓外伤后的继发性病理改变,是影响脊髓神经组织再生修复的重要因素。采用人发角蛋白(humanhairkeratin,HHK)植入脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)部位,以期达到减轻继发性损害,诱导和促进损伤脊髓组织的再生。方法:采用改制Ⅱ型纽约大学(NewYorkUniversity,NYU)装置,在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,将经过特殊处理后能在体内降解的HHK植入大鼠损伤脊髓部位,对植入后1,4,12,26周的损伤脊髓组织进行电镜观察。结果:第1周为急性炎症时期,HHK周围结构紊乱,集聚大量的炎症细胞,灰质出现坏死;第4周时,炎症细胞减少,巨噬细胞吞噬髓鞘,胶质细胞增生;第12周时,多核巨噬细胞出现在HHK周围,HHK开始崩解,崩解物被多核巨细胞所吞噬;第26周时,神经轴突沿HHK间隙排列生长,灰质中神经元数量增加,HHK周边细胞有序生长。结论:植入的人发角蛋白具有诱导神经胶质细胞增生,阻止脊髓空洞的形成,从而减轻了脊髓损伤组织的继发性伤害的程度,改善了神经元再生的外环境,并可以桥接诱导神经轴突定向再生的作用。     

测量细胞内吞过程中膜受体流动性的新方法

本文首次提出用ABC（AvidinBiotinComplex）法标记细胞膜受体，通过FRAP（Fluorescencerecoveryafterphotobleaching）技术，测量细胞内吞过程中受体流动性变化的方法。实验选择巨噬细胞ConA受体，比较了用ConA－Biotin＋A－vidin－FITC（ABC法）和ConA－FITC（直接法）标记的股表面ConA受体荧光强度和内吞过程中受体的流动性测量结果。结果显示ConA－Biotin＋Avidin－FITC标记的巨噬细胞膜受体的平均荧光强度比用ConA－FITC标记的平均荧光强度高大约3倍；ABC法标记的受体，测量结果误差小、灵敏度高；ConA刺激15min后，巨噬细胞膜表面ConA受体的扩散系数和荧光恢复率较静息状态时明显下降。讨论了两种标记方法对测量结果的影响。     

人发角蛋白导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探索用人发角蛋白（HHK）制成的导管对大段缺损的周围神经的修复效果。方法 将25只新西兰兔分成3组，对照组不接受手术；另2组切除胫神10mm，分别用缝合线（无HHK组）和HHK导管（HHK组）连接神经两断功能恢复快，解剖观察发现，神经两断端之间以及HHK导管的腔隙被白色新生组织充满，人发部分消失，残余的人发易脆易断。在光镜下可见人发周围大量再生的雪旺细胞和较幼稚的神经纤维，神经纤维无序 排列，人发被初步降解，术后1年，人发被完全降解。神经缺损部位修复完好。结论 HHK导管可诱导神经纤维再生，跨过10mm的缺损间隙，从而修复神经缺损，HHK是制作神经导管的较为理想的材料。     

脊髓损伤模型的建立及其评价标准

脊髓损伤 (ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ ,ＳＣＩ)是非常严重的疾病 ,多见于交通伤和战伤等。最新的统计数字表明 ,美国每年有2 5万人罹患不同程度的ＳＣＩ,年发生率为 2 8～ 5 0 /百万人。由于脊髓是许多神经功能的中介通路 ,ＳＣＩ及其继发性病理生理反应可直接导致神经功能损伤 ,从而引起组织、器官功能障碍 ,致残率与致死率非常高。目前 ,对ＳＣＩ的治疗效果仍不佳 ,预后难以预料 ,原因是ＳＣＩ后的病理生理机制非常复杂 ,人们对此认识还很不全面、深入。为了寻求新的、更有效的治疗药物或方案 ,更透彻地阐明ＳＣＩ所涉及的复杂机…     

转化生长因子-β1对人胚肌腱细胞增殖和胶原及内源性Smads基因表达的影响

目的 探讨转化生长因子（TGF）－β1对人胚腱细胞增殖和代谢及其下游信号分子Smad的影响。方法 采用^3H－胸腺嘧啶脱氧核苷和^3H-脯氨酸掺入法观察TGF－β1对人胚腱细胞的DNA和胶原合成的影响。采用半定量反转录聚－合酶链反应（RT－PCR）检测TGF－β1作用24h肌腱细胞Smad2、3和7mRNA表达水平的变化。结果 在体积分数为0．5％胎牛血清条件下TGF－β1可刺激腱细胞增殖,其作用在0．5－10．0μg/L之间呈剂量依赖性增强（P＜0．05）,饱和剂量10μg/L增加DNA合成73％。TGF－β1各剂量组对胶原蛋白合成均有促进作用（P＜0．05）,最大效应剂量为5μg/L（107％）。TGF－β1能显著下调Smad2和Smad3基因的表达水平,同时诱导TGF－β1信号拮抗因子Smad7的产生。结论 TGF－β1能有效促进腱细胞增殖及胶原合成,同时能对其细胞内信号分子Smad的表达起自身调控作用。