大鼠原生殖细胞的形态学及分化特性

目的 研究大鼠胚胎原生殖细胞（Primordial germ cells, PGCs）的形态及其分化特性。方法 取受精后10.5 d的大鼠胚胎作HE染色,取受精后11.0~12.5 d的大鼠胚胎生殖嵴进行PGCs原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶 (ALP) 染色检测细胞的分化程度。结果 大鼠PGCs位于卵黄囊内胚层深部的间充质内,体积大,呈椭圆形或不规则形;核大,染色质细密,含1~2个核仁。体外培养可见PGCs大而圆,散在分布,或聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,ALP反应呈阳性;培养4~5 d,PGCs形态不规则,有伪足,ALP反应减弱,进一步分化可形成神经元样细胞、表皮细胞、心肌细胞、分泌细胞以及类似血管、心脏的管腔样结构等。由PGCs分化来的细胞ALP反应均呈阴性。结论 大鼠生殖嵴来源的PGCs是一种具有发育全能的、可分化形成3个胚层衍生物的胚胎多能干细胞。     

受体介导内吞对巨噬细胞膜电位、胞浆和溶酶体pH的影响

本文利用荧光标记方法测量了刀豆素Ａ、麦芽凝集素、酵母多糖刺激引起的巨噬细胞膜电位、胞浆ｐＨ、溶酶体ｐＨ的变化。结果显示三种配体均导致细胞膜电位超极化,胞浆ｐＨ降低,溶酶体ｐＨ上升高,三个生理参量趋于稳定时间稍有不同。胞浆叫的降低可能有抑制内香的作用,溶酶体ｐＨ上升是触发溶酶体内容物外排的基本因素。内吞引起的这些变化是细胞代谢过程中自我调节和保护的表现。     

Studies on the translocation of p38 mitogen-activated protein kinase in cardiomyocytes of nude mice on the stimulation of LPS

Milogen-activate(l I)rotejn kinase (MAPK) is the major mediator to lransduce the extracellular signals from tilem(fll]1)rarle to internal nucleus"l. p38 MAPK pathway isone of 1\he 4 pathways that have been identified sofar',.,"'. l[ was proved that the aotivati(,n of I)38 MAPKall'e(fled Ills I)r(>(t'fsses of (tell growth, cell 'lycle and aPOptosis. afl(1 was involve(l ifl the uvula[1()n of inflammationan(l sir(>ss l-c):il)onses. Tile sin(ly ')f the exa(II (lellular location oj' I)n)lo…     

生长分化因子5基因原核表达质粒构建和表达及其体内成软骨的诱导活性

背景:生长分化因子5在软骨、四肢和关节的发育、形成中起着重要作用,是目前最常应用的研究早期关节发育的标志分子.克隆人生长分化因子5基因可为软骨、关节缺损的修复奠定研究基础.目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子5成熟肽,探讨重组蛋白的体内诱导活性.设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2006-01,06在南方医科大学分析测试中心完成.材料:人流产胚胎膝关节区软骨组织取自解放军广州军区总医院妇产科,标本获取征得家属同意.10只KM小鼠购自南方医科大学实验动物中心,雌雄各半,体质量18-22 g,6～8周龄.方法:通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胚胎软骨组织克隆生长分化因子5完整成熟肽基因,将所得基因片段插入pET22b(+)载体构建重组原核表达载体pET22b(+)-GDF5,重组质粒转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达.凝胶介质镍离子螯合法纯化目的蛋白,植入小鼠后肢股部肌袋内常规苏木精-伊红染色进行生物学活性鉴定.主要观察指标:琼脂糖凝胶电泳观察目的基因表达条带,测序观察目的基因序列,SDD-PAGE电泳观察目的蛋白表达条带,组织学观察生长分化因子5诱导活性.结果:RT-PCR产物长约350 bp,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350 bp的片段,测序表明与Genbank中的序列完全一致.SDS-PAGE电泳显示重组子转化菌在相对分子质量14 100位置处出现特异外源蛋白表达带,和成熟肽相对分子质量13 600接近.纯化后体内植入实验组织切片显示,大量的间充质干细胞聚集和增生,并分化成为成软骨细胞,分泌软骨基质并埋入其中变为软骨细胞.结论:通过RT-PCR法从人胚胎软骨组织中成功克隆出人生长分化因子5完整成熟肽基因,可在大肠杆菌中得到高效表达,经纯化后在动物体内具有成软骨诱导活性.     

在体组织工程新概念

基于对人发角蛋白(HHK)人工腱长达10余年的实验和临床应用研究的结果．我们提出了在体组织工程化肌腱的概念,即HHK人工腱及其降解产物能诱导周围组织内的成腱干细胞增殖、分化为腱细胞并刺激其他细胞分泌某些细胞因子参与调节,最终形成自体腱。我们在实验中还发现,HHK植入损伤骨组织、神经组织和肌组织后在原位构建出相应的组织。从而进一步提出“在体组织工程”新的理论体系。它是指可吸收性生物支架材料植入体内后．通过材料本身及其降解产物激活周围组织自身的成体干细胞分裂、增殖、分化．并在体内生理条件下与基质材料达到最佳的有机融合,并最终完成替代基质材料形成在解剖、组织学意义上与自体组织几乎完全一致的结构。从而在体内完成构建完整的组织工程化组织或器官的过程。在体组织工程不仅利用体内微环境和体内精细的调节机制“在体培养”种子细胞．消除了现行组织工程化组织或器官(传统组织工程)中种子细胞的排斥反应、变异和功能退化及复杂的保存、运输和高额费用等问题,最重要的是更贴近临床需要。不仅有巨大的临床应用潜能,而且尚具有重要的理论价值。     

白藜芦醇对大鼠脊髓损伤后受损局部Ca2+,Mg2+-ATP酶活性的影响

目的：探讨白藜芦酶（resveratrol,Res)对脊髓损伤（SCI）后受损部位局部Ca^2 ,Mg^2 -ATP酶活性的影响，分析SCI后局部部微环境改变及Res的作用。方法：采用重物下落撞击法制备成年大鼠的脊髓损伤,于损伤后即刻腹腔注射给于Res50mg/kg,100mg/kg或甲基强的松龙（MPSS）100mg/kg，并于给药后1h,24h,48h时分别取受损脊髓，利用测磷法检测Ca^2 ,Mg^2 -ATP酶活性。结果：Res100mg/kg对Ca^2 -ATP，Mg^2 -ATP及Ca^2 ,Mg^2 -ATP酶活性在SCI后的活性抑制有明显的改善作用（P＜0．05或0．003），最大改善率分别在71％，180％和120％以上，基本以1h时影响较大，但对Mg^2 -ATP酶活性的最大影响在48h时，MPSS对SCI后1hCa^2 Mg^2 -ATP酶活性影响最大。Res的作用与MPSS相当或更强。结论：Res通过调节Ca^2 Mg^2 -ATP酶活性改善SCI后局部微环境，可能有效缓解SCI后继发性反应而产生保护作用。     

糖原诱出小鼠腹腔巨噬细胞的形态学及细胞化学研究

本实验用电镜及定量细胞化学技术证明糖原诱出的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)体积增大,皱折和伪足增多。细胞质中吞噬体和溶酶体增多。酸性磷酸酶(AcPase)、非特性酯酶(ANAE)、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性增强,而5核苷酸酶(5Nase)活性则与对照组无明显差别。     

脊髓损伤模型的建立及其评价标准

脊髓损伤 (ｓｐｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｊｕｒｙ ,ＳＣＩ)是非常严重的疾病 ,多见于交通伤和战伤等。最新的统计数字表明 ,美国每年有2 5万人罹患不同程度的ＳＣＩ,年发生率为 2 8～ 5 0 /百万人。由于脊髓是许多神经功能的中介通路 ,ＳＣＩ及其继发性病理生理反应可直接导致神经功能损伤 ,从而引起组织、器官功能障碍 ,致残率与致死率非常高。目前 ,对ＳＣＩ的治疗效果仍不佳 ,预后难以预料 ,原因是ＳＣＩ后的病理生理机制非常复杂 ,人们对此认识还很不全面、深入。为了寻求新的、更有效的治疗药物或方案 ,更透彻地阐明ＳＣＩ所涉及的复杂机…     

外源重组基因表达产物亚细胞定位的研究现状

目的：将外源基因通过重组然后在宿主细胞中表达,以研究其功能.资料来源：应用计算机检索Medlinel997-01/2004-12与外源基因重组表达产物亚细胞定位的相关文献,检索词“foreign recombined gene,subcellure location”等分别进行检索提炼,限定文献语种为English.资料选择：就检索到的500余篇资料进行初审,纳入标准：①有关外源基因重组策略.②与表达产物定位检测方法相关.排除标准：文献中重复研究、综述、Meta分析类文章.未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法.资料提炼：共收集到80余篇关于外源基因重组表达后定位相关的文章.其中研究内容相似的,以近5年内发表在较权威杂志者优先.对符合标准的38篇文献进行分析.资料综合：外源重组基因在宿主细胞中表达后,可以通过多种方法进行亚细胞定位,如报告基因,免疫电镜,免疫荧光技术等,且大规模的外源重组基因亚细胞定位具有重要的意义.结论：因为外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系,所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位,对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说有很重要的意义.