人canstatin基因的克隆及其真核载体的构建

[目的]克隆人canstatin基因,构建并鉴定其真核表达载体pSecTag2/canstatin.[方法]采用RT-PCR方法从中国人胎盘脐带组织中扩增canstatin cDNA,T-A克隆到pUCm-T载体中,酶切后将人canstatin cDNA亚克隆入pSecTag2,构建真核表达载体pSecTag2/canstatin,重组质粒经限制性内切酶鉴定并进行测序分析.[结果]人canstatin基因片断正确插入载体,与Genebank中报道的序列一致.[结论]pSecTag2/canstatin真核载体的构建为进一步进行canstatin蛋白表达、活性鉴定和作用机制研究以及canstatin用于基因治疗奠定了基础.     

钙网蛋白相关信号通路在肿瘤中的研究进展

钙网蛋白（calreticulin,CRT）是参与多种细胞过程的高度保守的内质网伴侣蛋白。1974年,它首次被鉴定为钙离子结合蛋白,随后CRT与肿瘤之间信号通路相关关系被广泛的研究。另外,在人类多种肿瘤中,细胞表面的CRT被认为是1个"促吞噬"信号,由此CRT与癌细胞的巨噬细胞吞噬免疫系统的相关研究,有望为肿瘤综合治疗提供新的理论依据和策略。也有越来越多的证据表明CRT在不同肿瘤中的异常表达,将为CRT成为一种新的肿瘤标志物提供许多依据。以及CRT对各种肿瘤的发展具有很重要的影响且CRT对肿瘤形成和进展的影响取决于细胞类型和临床阶段。     

外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响

目的 探讨外源性p16基因导入对人原发性肝癌细胞迁移能力和VEGF及nm23表达的影响。方法 细胞划痕法检测外源性p16基因导入对人肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响；免疫细胞化学法分析外源性p16基因导入对VEGF表达的影响；Western blotting法分析外源性p16基因导入对nm23表达的影响。结果 外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组细胞迁移能力较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞明显下降。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组VEGF表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞减弱。外源性p16基因导入人肝癌细胞SMMC-7721后，转染组nm23表达较空载体对照组和空白对照组SMMC-7721细胞增强。结论 外源性p16基因导入能降低人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移能力。     

组织细胞肉瘤L-Ⅱ高侵袭转移瘤株的筛选及鉴定

目的取小鼠组织细胞肉瘤L-Ⅱ的肺转移灶细胞体内连续传代，筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株。方法L-Ⅱ瘤细胞接种小鼠胁部皮下，取其肺转移灶接种另一小鼠体内，再取其肺转移灶传代，如此数代后，建立L-Ⅱ肺高转移模型。检测：形态学，免疫组化，核型分析，流式细胞分析，肿瘤生长曲线，小鼠荷瘤生存时间，肺转移率。结果目前传至第7代，第1、第7代形态学上比较，光镜下无明显差别，染色体均为亚四倍体核型，众数66～70条。细胞周期1／7：G1期：70．1／50．8，S期：15．9／27．7，G期：14．0／21．6。DNA倍体为亚四倍体。平均荷瘤生存时间为22／16．33天，P〈0．01。免疫组化nm23第1代表达弱阳性，第7代未见表达。肺转移率：1／7为25％（3／12）／66．7％（8／12），P=0．099。结论筛选出L-Ⅱ高侵袭转移瘤株，为肿瘤的侵袭和转移的研究提供了理想的实验模型。     

CANSTATIN, A ENDOGENOUS INHIBITOR OF ANGIOGENESIS AND TUMOR GROWTH

Canstatin is a novel inhibitor of angiogenesis and tumor growth, derived from the C-terminal globular non-collageneous (NCI) domain of the α2 chain of type Ⅳ collagen. It inhibits endothelial cell proliferation and migration in a dose-dependent manner, and induces endothelial cell apoptosis. In vivo experiments show that canstatin significantly inhibits solid tumor growth. The canstatin mediated inhibition of tumor is related to apoptosis. Canstatin- induced apoptosis is associated with phosphatidylinositol 3-kinase/Akt inhibition and is dependend upon signaling events transduced trough membrane death receptor.     

甲基硝基亚硝基胍对裸鼠异种移植人胚胃粘膜的影响

目的观察甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ′－ｎｉｔｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎ，ＭＮＮＧ）对裸鼠异种移植人胚胃粘膜的影响。方法用ＭＮＮＧ直接诱导移植于裸鼠体内的人胚胃粘膜，ＨＥ和ＡＢ／ＰＡＳ染色观测胃粘膜组织形态，链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶免疫组化（ＳＰ）法检测胃粘膜ＰＣＮＡ，Ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｐ５３表达状态。结果对照组人胚胃粘膜的存活率为７２％（１８／２５），实验组为５６％（     

二甲基氨基偶氮苯诱发大鼠实验性肝癌的癌前期病理研究

本文采用二甲基氨基偶氮苯(DAB)以研究诱发大鼠实验性肝癌过程中的癌前期病变。动物分别于连续给药的第6周及停药后的第11周处死。通过光镜、电镜观察肝脏病变,同时应用免疫组织化学和组织化学方法研究了肝细胞胚胎性抗原(AFP)以及琥珀酸脱氢酶(SDH)、5′—核苷酸酶(5′—NH)和γ—谷氨酰转肽酶(γ—GT)的改变。结果表明:停用致癌剂后,致癌剂对肝脏的非特异性毒性作用可以解除,表现为肝细胞变性坏死和SDH、5′—NT活性的恢复;但由卵圆细胞转化而来的增生肝细胞结节却具有癌前期病变的特征,表现为肝细胞异型、γ—GT和AFP阳性。     

大肠癌及慢性溃疡性结肠炎的免疫组化研究

本文应用大肠癌单克隆抗体Hb_3对20例大肠癌、60例慢性溃疡性结肠炎(CUC)、12例正常成人大肠粘膜和12例胎儿大肠粘膜进行了免疫组织化学检查。结果表明,大肠癌HL_3反应阳性率是80％,CUC阳性率为41.7%,正常大肠粘膜阳性率是8.3%,胎儿大肠粘膜全为阳性。而且,在CUC病例中,直肠部位CUC的Hb_3反应阳性率明显高于直肠以上部位者,这与大肠癌好发于直肠的事实相符。作者认为,慢性溃疡性结肠炎表达肿瘤相关抗原是先于病理形态改变之前的极早期生化异常,进一步支持CUC是大肠癌的癌前期疾病,这对于CUC的追踪观察以及探讨CUC与大肠癌发生的关系有一定意义。     

LMP1经TRADD促进鼻咽癌SP18细胞增殖

目的:探讨潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端活化区2(CTAR2)的肿瘤坏死因子受体相关死亡结构域(TRADD)在鼻咽癌SP18细胞增殖中的作用及机制。方法:首先建立表达LMP1及CTAR2突变型LMP1(LMP1~(TRADD))的SP18细胞系。其次采用细胞生长曲线、平皿集落形成实验、软琼脂集落实验和流式细胞术观察LMP1~(TRADD)对SP18细胞增殖的影响。然后选用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1~(TRADD)细胞间的差异表达基因。结果:细胞生长曲线、软琼脂集落和平皿集落形成实验结果均显示,SP18-LMP1细胞生长与集落形成能力均较SP18-LMP1~(TRADD)细胞强(P0.01)。流式细胞术检测结果显示,SP18-LMP1细胞的增殖指数较SP18-LMP1~(TRADD)细胞高(P0.01)。筛选出63个增殖相关基因,其中SP18-LMP1~(TRADD)细胞中上调的基因33个,下调的基因30个。结论:TRADD活性区是LMP1促进SP18细胞增殖的重要功能活性位点。LMP1可能通过TRADD提高细胞增殖指数,诱导SP18细胞增殖。     

LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响

背景:课题组前期构建了CTAR3缺失突变型LMP1(LMP1△232-351)表达载体,初步了解该活性区在LMP1发挥作用中扮演十分重要的角色。目的:观察LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响。方法:采用逆病毒感染方式,建立稳定表达LMP1及CTAR3缺失突变型LMP1(LMP1△232-351)的鼻咽癌干细胞SP18细胞系,通过细胞生长曲线、软琼脂集落形成实验和平皿克隆形成实验观察LMP1△232-351对鼻咽癌干细胞SP18生长的影响,然后选用流式细胞术检测细胞周期,计算细胞增殖指数。另外,利用Western-blot检测细胞中JAK3蛋白的磷酸化水平。结果与结论:①与SP18-LMP1细胞比较,SP18-LMP1△232-351细胞生长速度减慢,增殖指数降低(P<0.01)。②在SP18-LMP1△232-351细胞中JAK3的磷酸化水平低于SP18-LMP1细胞。结果说明LMP1-CTAR3可能通过影响SP18细胞中JAK3的磷酸化,下调细胞的增殖指数,降低促细胞增殖的能力。