抑癌基因RASSF1A在胰腺癌组织中表达的研究

目的：探讨抑癌基因RASSF1A在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌发生、发展的关系。方法：采用免疫印迹方法检测48例胰腺癌组织及其癌旁（正常）组织RASSF1A基因蛋白的表达水平。结果：癌旁组织RASSF1A蛋白的表达量高于高分化腺癌组织的表达量（P<0.05);高分化腺癌组织RASSF1A蛋白的表达量高于中、低分化腺癌组织（P<0.05)。TNM分期Ⅲ期RASSF1A蛋白的表达量低于Ⅰ,Ⅱ期(P<0.05)。RASSF1A基因蛋白表达与性别、年龄,肿瘤发生部位无明显关系(P>0.05)。结论：RASSF1A表达缺失或低下在胰腺癌的发生、发展中起重要作用。     

双源CT在先天性心脏病诊断中的应用价值

目的探讨双源CT在先天性心脏病诊断中的应用价值。方法采用西门子Siemens Somatom Definition DSCT增强扫描检查先天性心脏病50例,其中40例采用心电门控扫描模式,10例因心率过快采用普通胸部增强扫描模式。50例均行心脏超声检查,其中27例经手术证实、9例经X线心血管造影证实。本组以手术或X线心血管造影结果为标准,比较双源CT和心脏超声的诊断准确率。结果经手术或X线心血管造影证实的36例先天性心脏病中,含单纯房间隔缺损、单纯室间隔缺损、主动脉弓离断、单心室、完全型大动脉错位、肺动脉起源异常、冠状窦无顶综合征各1例,单纯动脉导管未闭、校正型大动脉错位、冠状动脉起源异常、肺动脉闭锁并室间隔缺损、左室双出口各2例,右室双出口4例,主动脉缩窄5例,法洛四联症10例。36例共计107处畸形,均以手术或X线心血管造影结果证实,其中心内畸形30处,双源CT和心脏超声诊断准确率分别为93.33%和96.67%（P=1.000）。心外畸形77处,双源CT和心脏超声诊断准确率分别为96.10%和87.01%,双源CT诊断准确率高于心脏超声（χ2=4.117,P=0.042）。双源CT与心脏超声联合诊断准确率为99.21%。结论双源CT对比增强扫描对先天性心脏病心外畸形的诊断准确率高于心脏超声,但二者联合可提高对先天性心脏病的诊断准确率。     

罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMPK活性的影响

目的观察罗格列酮对高脂饲养大鼠骨骼肌AMP激活的蛋白激酶(AMPK）α、葡萄糖转运体4(GLUT4）、胰岛素受体底物1(IRS1）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ）表达的影响,为临床有效的预防和控制脂毒性提供科学依据。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照、高脂和高脂加罗格列酮［1?mg/(kg·d)］三组,每组10只。喂养5个月后,采用Real time PCR法测定大鼠骨骼肌中AMPKα1、AMPKα2、GLUT4的mRNA水平,RT PCR法测定IRS1、PPARγmRNA的表达,Western blot法测定P AMPK、T AMPK和GLUT4的含量。结果高脂组大鼠除AMPKα1和IRS1的mRNA表达无变化外,AMPKα2、 GLUT4、PPARγ的mRNA水平及P AMPK、T AMPK、 GLUT4的蛋白水平均比对照组降低（P<0.01或P<0.05）。与高脂组相比,罗格列酮显著增加大鼠骨骼肌GLUT4、PPARγ、IRS1的mRNA水平及 P AMPK、GLUT4的蛋白水平（P<0.01或P<0.05）, 而对AMPKα1、AMPKα2的mRNA水平和T AMPK的蛋白水平无明显影响。结论罗格列酮可增加高脂喂养大鼠的骨骼肌P AMPK、GLUT4、PPARγ和IRS1的表达,提示其具有参与改善胰岛素抵抗、缓解脂毒性的作用。     

高渗高胶溶液降低颅脑肿瘤患者颅内压的疗效观察

目的观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液（HSS40）对颅脑肿瘤手术患者颅内压及循环稳定的影响。方法择期颅脑肿瘤手术患者26例,随机分为HSS40组和20％甘露醇组（M组）,每组13例,局麻下经L3～4椎间隙穿刺置管监测脑脊液压(CSFP)。两组均采用静吸复合全麻,在15?min内静脉输注HSS40注射液200?mL和20％甘露醇250?mL,分别于输注前（T0）、输注完即刻（T1）、输注完15?min（T2）、30?min（T3）、60?min（T4）和120?min（T5）记录平均动脉压（MAP）、心率（HR）、中心静脉压（CVP）、CSFP及尿量,计算脑灌注压（CPP）。结果两组患者各时点MAP、HR比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与T0比较,HSS40组CVP在T2～T4时升高, M组在T4、T5时降低;HSS40组CSFP在T2～T5时降低,M组在T3～T5时降低;HSS40组CPP在T3时升高,M组在T4时升高（P＜0.05）;与M组比较,HSS40组CSFP在T3时点降低,CVP在T4、T5时升高;HSS40组尿量在T2 3、T3 4、T4 5时段减少（P＜0.05）。结论在颅脑肿瘤手术中,HSS40溶液降低颅内压的作用优于20%甘露醇,并且有助于术中循环稳定。     

荧光巨细胞病毒的构建及活性检测

目的构建表达绿色荧光蛋白的巨细胞病毒Towne株,检测其活性,研究其在抗巨细胞病毒药物筛选中的应用价值。方法将PHM673质粒扩增纯化,采用脂质体转染法转入原代培养的人胚肺成纤维细胞,感染人巨细胞病毒,获得重组病毒GFP HCMV,采用空斑法纯化重组病毒,采用PCR法鉴定,获得携带绿色荧光蛋白的重组巨细胞病毒。用抗病毒药物更昔洛韦进行干预,检测重组病毒荧光表达强度与药物浓度的关系。结果成功构建携带绿色荧光蛋白的重组巨细胞病毒,荧光病毒的活性与原始病毒的活性差异无统计学意义（P＞0.05）,生长繁殖并没有受到影响。重组病毒的荧光表达强度与抗巨细胞病毒药物更昔洛韦抑制病毒的效价有关。结论该荧光病毒可以作为研究病毒致病机制和抗病毒药物筛选的新型工具。     

卵母细胞线粒体移植对年老小鼠植入前胚胎线粒体膜电位的影响

目的探讨卵母细胞线粒体移植（MIT）对年老小鼠植入前胚胎线粒体膜电位(△Ψm)的影响。方法6～8周龄雌性昆明种小鼠经超排卵、卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)及培养液空注后形成的胚胎为A组,12月龄雌性昆明种小鼠经同样处理后形成的胚胎为B组,12月龄雌性昆明种小鼠经超排卵、ICSI及MIT后形成的胚胎为C组。比较植入前各阶段3组胚胎的△Ψm以及各组胚胎植入前各阶段△Ψm的变化趋势。结果在二细胞期和桑椹胚期,A、C两组胚胎△Ψm均高于B组（P＜0.01）,而在四细胞期、八细胞期和囊胚期,A、C两组胚胎△Ψm亦均高于B组（P＜0.05）。3组中,桑椹胚和囊胚△Ψm均高于二细胞期、四细胞期和八细胞期胚胎（P＜0.05）,而前两者间以及后3者间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论卵母细胞MIT可明显提高年老小鼠植入前胚胎各阶段△Ψm,且不改变其变化趋势。     

以神经内肽酶为靶点筛选治疗阿尔茨海默症天然药物的实验研究

目的筛选具有提高神经内肽酶(NEP)活性从而降低神经细胞β 淀粉样肽（Aβ）水平的药物,为临床治疗阿尔茨海默症（AD）提供实验依据。方法以脂质体LipofectamineTM2000介导瑞典突变型淀粉样肽前体蛋白(sweAPP)表达质粒pcDNA3.1 sweAPP转染神经母细胞瘤细胞SK N SH,G418筛选获得稳定表达细胞株作为AD模型细胞,采用蛋白印迹技术检测sweAPP表达情况,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养基中Aβ40和Aβ42含量变化,进而以MTT法检测各天然药物对SK N SH细胞增殖能力的影响,确定药物的有效浓度及最佳作用时间,以NEP肽酶实验检测药物对NEP酶活性影响,ELISA法检测药物对Aβ水平的影响。结果Western Blot结果显示,转染后SK N SH细胞高表达sweAPP蛋白;ELISA结果显示,转染后的SK N SH细胞分泌Aβ40、Aβ42明显升高,分别为转染前的7.26?和3.27倍（P<0.05）。NEP肽酶实验检测结果显示,茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3能够明显提高NEP酶活性,分别为（117±2.8）%、（131±4.0）%和（121±1.6）%。ELISA结果显示,经茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3作用后,细胞培养基中Aβ40和Aβ42水平明显降低,分别为对照组的（82±0.78）%和（85±2.21）%、（74±1.61）%和（99±3.31）%、（83±5.31）%和（76±6.74）%。结论成功构建AD模型细胞;茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3可提高NEP酶活性,从而有效降低Aβ的水平;本研究为茶多酚、人参皂苷Rb1、Rg3在临床上的应用以及分子机制研究提供了试验数据。     

双源CT检测窦房结动脉及其临床意义

目的探讨双源CT检测窦房结动脉的价值及其临床意义。方法选择利用双源CT进行冠状动脉成像的成人207例,根据窦房结动脉显示的长度和清晰度进行评分和分级、评价双源CT对窦房结动脉的显示情况。对窦房结动脉的直径、开口与其起源的冠状动脉起点之间的距离（S O间距）进行测量,观察窦房结动脉开口处冠状动脉壁钙化对窦房结动脉显示情况及管径的影响。结果共显示239支窦房结动脉,其中右侧型、左侧型、双侧型分别占64.3%、20.3%、15.5%。左、右窦房结动脉显示良好率分别为77.0%和81.2%。正常窦房结动脉的平均直径约为(0.20±0.04)mm,当窦房结动脉开口处的冠状动脉壁出现钙化时其直径为(0.18±0.03)mm,具有统计学差异（t＝2.558,P=0.011）。同时,钙化也影响窦房结动脉长度、清晰度及总体情况的显示(P＜0.05)。结论双源CT是显示窦房结动脉的良好方法,冠状动脉钙化可能影响窦房结动脉的血供。     

重组表达载体plRES Rb94的构建及其对肺腺癌A549细胞株中SphK表达的影响

目的构建真核表达质粒pIRES Rb94,观察Rb94基因对鞘氨醇激酶（SphK）表达的影响。方法根据Rb94基因序列设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点（IRES）相连的Rb94基因的真核表达质粒pIRES Rb94,经脂质体转染A549细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用Real time RT PCR和Western boltting法检测Rb94基因并观察其对人肺腺癌A549细胞株SphK表达的影响。结果成功构建重组表达质粒pIRES Rb94,转染A549细胞后获得稳定转染细胞株pIRES Rb94 A549,该细胞株中Rb94基因高效表达;SphK1表达下调而SphK2表达上调。结论真核表达质粒pIRES Rb94构建成功并可有效转染A549细胞,Rb94基因抑制SphK1的表达,增强SphK2的表达。     

高血压患者外周血单核细胞载脂蛋白E基因的表达及血脂分析

目的探讨人外周血单核细胞载脂蛋白E（Apo E）基因表达状况及其与高血压、血脂的相关性。方法分离外周血单核细胞,采用RT PCR方法,分析120例标本外周血单核细胞Apo E基因表达,并测定其血脂总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG) 高密度脂蛋白(HDL C)、低密度脂蛋白(LDL C)、载脂蛋白A1（apo A1）、载脂蛋白B100（apoB100）和脂蛋白α［Lp(α)］含量。结果Apo E基因可以在人外周血单核细胞表达,高危和极高危高血压患者外周血单核细胞Apo E基因表达水平较健康人明显下调（P＜0.05）,随着危险度的增高,下调更明显。Apo E基因表达水平与LDL C呈负相关（r=-0.979,P＜0.05）,与TC、TG、apoB100、apoA1、Lp(α)无明显相关性（P＞0.05）。结论高危和极高危高血压患者外周血单核细胞Apo E基因表达水平明显下调,并与血脂代谢异常相关联,提示Apo E基因表达水平变化与高血压的发生发展相关联。