茶多酚对人癌细胞和人体细胞增殖及凋亡的实验研究

目的 选用4种人癌细胞和3种人体正常细胞进行试验，比较茶多酚(TP)对人肝癌细胞Bel—7402等和人体肝细胞CLC增殖周期的影响和诱导凋亡的作用。方法 用MTT法测定TP对人癌细胞和人体正常细胞的细胞毒作用，用流式细胞仪(FCM)观察TP对细胞的周期改变和诱导凋亡作用。结果 TP对人癌细胞Bel—7402，CNEl，KB和H—29的IC50依次为68．2，104．63，119．83和148．61μg／mL；对人体正常细胞CLC，HEK—293和HD—MEC的IC50均＞400μg／mL。150和300μg／mL TP处理Bel-7402细胞12，24和36h，细胞凋亡率分别为13．2％，37．6％，40．7％和17．1％，39．9％，57．7％。表明TP可诱导Bel—7402细胞凋亡，使细胞周期停滞于S—G2／M期，而对CLC细胞无此作用。结论 TP对人癌细胞的细胞毒作用显著高于对人体正常细胞的作用，提示TP对人癌细胞有一定的选择杀伤作用。     

靶向G-四链体配体SYUIQ-5抑制Akt-FOXO3a通路诱导鼻咽癌细胞自噬性死亡

背景与目的：SYUIQ-5是具有吲哚和喹啉结构的白叶藤碱衍生物,已有报道它能稳定和诱导G-四链体形成,抑制c—myc启动子和端粒酶活性。本实验主要研究SYUIQ-5对鼻咽癌细胞自噬的诱导作用及其机制。方法：用免疫印迹法检测SYUIQ-5处理前后鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和HONE1中微管相关蛋白轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3）、Akt、p-Akt以及自噬相关基因BNIP3（Bcl-2／adenocarcinoma E1819KD interacting protein 3）和Beclin1的蛋白表达水平。用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测鼻咽癌细胞中LC3和BNIP3的mRNA水平。用siRNA干扰BNIP3,检测BNIP3在SYUIQ-5诱导自噬过程中的作用。用共聚焦免疫荧光法观察FOXO3a的定位。结果：用0．25～2．0μ g／mL的SYUIQ-5处理鼻咽癌细胞CNE1、CNE2和HONE148h,其LC3的表达在蛋白和mRNA水平均明显增强,且呈浓度依赖性。SYUIQ-5能显著抑制CNE2细胞的p-Akt水平,总的Akt表达基本无变化。用3μg／mL SYUIQ-5作用CNE2细胞24h后,共聚焦免疫荧光观察可见FOXO3a由细胞浆移位到细胞核。SYUIQ-5处理的鼻咽癌细胞中自噬相关基因BNIP3蛋白显著增加,而Beclin1无明显变化。用siRNA干扰BNIP3表达后,SYUIQ-5诱导的LC3-II形成的功能受到抑制。结论：SYUXQ-5可能通过抑制Akt的激活,诱导FOXO3a移位到胞核,从而促进LC3的转录,诱导肿瘤细胞发生自噬性死亡。BNIP3也参与了SYUIQ-5诱导细胞自噬的过程。     

中华芦荟多糖对非瘤细胞辐射后细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的　研究中华芦荟多糖 (AP)对X射线照射后人非瘤细胞株CLiver和 2 93细胞凋亡及细胞凋亡蛋白 p5 3,bax ,Bcl 2 ,Bad ,survivin表达的影响。方法　流式细胞仪检测细胞凋亡 ,Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果　X射线照射后 72h ,CLiver细胞可见典型的DNA梯形条带 ,照射前加入AP 2 5或 5 0mg·L-1均能使DNA片段减少 ;AP预处理使CLiver细胞在照后 6h和72h凋亡率分别由 5 0 %和 4 3 0 %降至 2 2 %和 10 9% ,使2 93细胞照后 6h凋亡率由 8 6 %降至 4 0 % ;AP预处理可使CLiver细胞p5 3、Bad、Bax蛋白表达量下调 ,Bcl 2和sur vivin蛋白表达则上调。结论　AP对X射线辐射后非瘤细胞凋亡的抑制作用与对凋亡蛋白表达的调节有关     

紫草萘醌(阿卡宁)衍生物SYUNZ-4的抗瘤作用研究

 目的探讨半合成的一种新的阿卡宁衍生物-3,11-双(2-羟乙巯基)-6-异己萘茜(代号为SYUNZ-4)体外对各种人癌细胞的细胞毒作用和体内的抗瘤作用。方法体外细胞毒作用是应用四氮唑蓝(MTT)法测定,以半数抑制浓度(IC₅₀)进行评价。体内抗瘤作用是应用小鼠移植瘤模型和人癌细胞裸鼠移植瘤模型。结果体外细胞毒试验表明,SYUNZ-4对7种人癌细胞有强的细胞毒作用,它们的IC50为0.32～7.75mg·L^-1,对耐药细胞株MCF-7/Adr和KBV200的IC50分别为1.96和7.87mg·L^-1。体内抗瘤试验,SYUNZ-4在2.0,6.0和10.0mg·kg^-1,ip,q2d×10d,对小鼠肉瘤S-180和小鼠肝癌HepS的抑瘤率分别为31.5%～69.7%和45.9%～67.5%(P<0.05～0.01)。SYUNZ-4在2.0,6.0,10.0和14.0mg·kg^-1,对小鼠肿瘤艾氏腹水癌实体型ESC的抑瘤率为30.2%～58.1%(P<0.05～0.01)。在6.0和10.0mg·kg^-1,ip,q3d×18d条件下,SYUNZ-4对人肺腺癌(GLC-82)裸鼠移植瘤的抑瘤率为48.4%和61.7%(P<0.001);在2,6和10mg·kg^-1剂量下对人鼻咽癌细胞(CNE2)裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为35.5%、41.9%和48.3%,P<0.01～0.001。结论新合成的紫草醌衍生物SYUNZ-4具有强的细胞毒作用和抗小鼠肿瘤作用。     

DNA引物酶抑制剂筛选方法的建立及应用

目的：建立ＤＮＡ引物酶抑制剂的筛选方法,并应用于大量筛选,找出对ＤＮＡ引物酶有抑制作用的抗癌药物或先导化合物。方法：以小鼠艾氏腹水癌细胞破碎液为材料,过ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱,提取分离ＤＮＡ引物酶,用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶延长引物法检测ＤＮＡ引物酶的活性。并在此反应液中加入化合物检测时ＤＮＡ引物酶活性的抑制人和用,以激活的小牛胸腺ＤＮＡ为模板排除化合物对大片断ＤＮＡ多聚酶Ｉ的抑制作用。结果     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3''-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的 研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3'-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制.方法 分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞.采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用.采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡.采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察捌亡相关蛋白survivin,Bcl-xL,Bad,Bax,Bcl-2,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP,DFF45和lamin B的表达.采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性.结果 DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用,其IC50值为0.24μmol·L-1.流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡.在经DMTCCI处理的HL-60细胞中,survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调,Bad和Bax蛋白的表达水平上调,Bcl-2蛋白的表达水平无变化,caspase-9,caspase-3,caspase-6,PARP, DFF45和lamin B被分别裂解,产生相应裂解产物.在HL-60细胞中,caspase-3的活性在1μmol·L-1 DMTCCI处理3 h时明显升高,在处理12 h时达到最高峰.结论 DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡.Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程.     

茶酚硒混合物的小鼠急性毒性试验

目的:观察茶多酚(TP)与亚硒酸钠(sodium selenite)混合物一次给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况.方法:一次灌胃(ig)给药,观察14d.结果:测得TP单用一次ig的LD50为2914.45mg/kg;亚硒酸钠单用一次ig的LD50为33.54mg/kg;当TP与亚硒酸钠按7997.3mg∶2.7mg比例做成混合物,测得混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg,其中亚硒酸钠的含量为0.85mg/kg.结论:茶酚硒混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg.     

衣霉素通过上调TRAIL-R2增加胃癌细胞对TRAIL的敏感性

目的:研究衣霉素(tunicamycin,TM)上调胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导凋亡敏感性的作用机制。方法:采用碘化丙啶染色的FCM法检测TM(1μmol/L)与TRAIL(100μg/L)单独或联合作用3、6、16、24和36h时对SGC-7901细胞凋亡率的影响;FCM法检测TM处理前后细胞表面TRAIL受体1(TRAIL receptor1,TRAIL-R1)、-R2、-R3和-R4的表达情况;实时荧光定量-PCR法检测TRAIL-R2mRNA的表达情况;蛋白质印迹法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78kDa,GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)的表达水平;RT-PCR检测X盒结合蛋白(X-box binding protein1,XBP1)mRNA的剪接情况。结果:TM单独作用引起的SGC-7901细胞的凋亡率低,TM和TRAIL联合作用能有效提高SGC-7901细胞的凋亡率;TM能明显上调SGC-7901细胞表面TRAIL-R2的表达水平,而对TRAIL-R1、-R3和-R4却无明显影响;TRAIL-R2mRNA的表达水平随TM作用时间延长而相应升高;GRP78蛋白的上调和XBP-1mRNA的剪接活化证实了TM可诱导未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的发生;CHOP蛋白的表达水平也在TM作用后上调。结论:TM通过诱导UPR上调TRAIL-R2的表达,从而增加胃癌细胞对TRAIL的敏感性,CHOP介导了TRAIL-R2的上调作用。     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

ST2325抑制HER2/neu受体酪氨酸激酶信号转导途径及其对乳腺癌细胞周期的影响

目的　本文研究ST2 32 5对HER2 /neu受体的下游信号转导途径的抑制作用及其对乳腺癌BT4 74细胞周期的影响。方法　免疫印迹法检测蛋白表达量和磷酸化蛋白量的变化 ;流式细胞术检测细胞周期的分布。结果　ST2 32 5抑制BT4 74细胞HER 2 /neu受体的自身磷酸化 ,IC50 为 8 7μmol·L-1,对HER2 /neu的表达没有任何影响。ST2 32 5抑制BT4 74细胞磷酸化的MAPK和AKT。ST2 32 5处理BT4 74细胞 2 4h后 ,流式细胞仪分析可见细胞周期停止于G1期 ;Westernblot法检测呈现在在ST2 32 5处理后 ,细胞中p2 7上调 ,Rb的高磷酸化状态下降 ,CyclinD1蛋白水平下降。 结论　ST2 32 5能抑制乳癌BT4 74细胞HER2 /neu受体酪氨酸激酶信号转导途径 ,诱导乳腺癌细胞BT4 74停止于G1期 ,且与 p2 7上调、Rb的高磷酸化状态下降、CyclinD1蛋白水平下降有关。