DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin， Bcl-xL， Bad， Bax， Bcl-2， caspase-9， caspase-3， caspase-6， PARP， DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用，其IC₅₀值为0.24 μmol·L^-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中，survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调，Bad和Bax蛋白的表达水平上调，Bcl-2蛋白的表达水平无变化，caspase-9，caspase-3，caspase-6，PARP，DFF45和lamin B被分别裂解，产生相应裂解产物。在HL-60细胞中，caspase-3的活性在1 μmol·L^-1 DMTCCI处理3 h时明显升高，在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。     

茶多酚对人鼻咽癌细胞株CNE_2细胞DNA损伤和细胞周期的影响

目的　观察茶多酚（ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ, ＴＰ） 对人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 的损伤作用和细胞周期的影响。方法　用琼脂糖凝胶电泳方法测定ＴＰ对细胞ＤＮＡ的断裂作用;用流式细胞术（ＦＣＭ） 观察ＴＰ对ＣＮＥ２ 细胞周期的变化及其诱导凋亡。结果　ＴＰ可引起ＣＮＥ２ 细胞ＤＮＡ 断裂、其断裂程度随剂量的增加和作用时间的延长而增强。ＴＰ不同浓度和不同作用时间可干扰ＣＮＥ２ 细胞在周期中的进程,使Ｇ１ 期细胞明显增多,Ｓ期细胞减少,细胞分裂增殖指数（ＰＩ）亦随之降低。同时,ＴＰ可诱导ＣＮＥ２ 细胞凋亡,其凋亡率随ＴＰ浓度的增加和作用时间的延长在逐渐增加。结论　ＴＰ１９９８ １２ ０４ 收稿,１９９９ ０７ ３１ 修回＊ 国家自然科学基金资助课题,Ｎｏ ３９３７０８００作者简介：谢冰芬,女,副研究员,硕士生导师,研究方向为肿瘤药理可引起人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ２ 细胞的ＤＮＡ 断裂,使细胞停滞于Ｇ１ 期,阻止Ｇ１ 期细胞进入Ｓ期;同时亦可诱导细胞凋亡,这些结果可能为ＴＰ的抗瘤作用提供理论依据     

拓扑替康诱导卵巢癌细胞自噬的实验研究

目的:检测拓扑替康(TPT)对卵巢癌OVCAR3细胞的增殖抑制作用,观察TPT诱导OVCAR3细胞自噬现象,初步探讨其发生的可能机制。方法:采用不同浓度的TPT处理卵巢癌OVCAR3细胞,MTT法测定TPT对OVCAR3细胞增殖的抑制作用,吖啶橙(AO)染色观察酸性小体(AVO)形成,MDC荧光染色检测自噬囊泡。免疫印迹法检测TPT对OVCAR3细胞LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的影响。结果:TPT对OVCAR3细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的剂量依赖性,IC50为0.057μg/mL。TPT可诱导OVCAR3细胞产生AVO。MDC荧光染色显示,TPT可诱导OVCAR3细胞产生自噬囊泡。采用0.05μg/mL TPT处理OVCAR3细胞24h后,免疫印迹法显示,随着时间的推移LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白水平表达个逐渐增加,提示TPT诱导的OVCAR3细胞自噬可能与Bec-lin1蛋白有关。结论:TPT对OVCAR3细胞有显著的抑制作用,TPT可以诱导OVCAR3细胞发生自噬,TPT诱导OVCAR3细胞自噬可能与Beclin1蛋白上调有关。     

DNA引物酶的提取分离与引物合成活性的研究

以小鼠艾氏腹水癌细胞经超声破碎的提取液为材料，依次用ＤＥ－５２和Ｐ－１１层析柱进行离子线的洗脱，分别在ＫＣｌ浓度的０．１７～０．２ｍｏｌ／Ｌ和０．２５～０．２７ｍｏｌ／ｌ处ＤＮＡ引物酶被洗脱下来。用大肠杆菌大片段ＤＮＡ多聚酶Ｉ延长引物法检测Ｄ引物酶比活性为８７５３Ｕ／ｍｇ，酶总获得为２２．１％，放射自显影法检测引物合成活性显示引物酶合成了不同长度的引物。     

化疗药物对肿瘤微血管的毒性作用

一般认为，化疗药物是非特异的血管生成抑制剂。如果部分化疗药物在体内有较强的血管毒性，在常规化疗中恰当应用该类药物有可能改善化疗反应，提高实体瘤缓解率.     

无刺根中蛇葡萄素体外抗肿瘤作用研究

目的:研究蛇葡萄素在体外对肿瘤细胞的生长抑制作用.方法:采用MTT法,检测蛇葡萄素对白血病细胞HL-60、K562以及肝癌Bel-7402细胞生长的抑制作用.结果:蛇葡萄素在浓度为100、50、25、12.5、6.25μg/ml下,对Bel-7402细胞增殖抑制率分别为82.3±19%、79.5±1.7%、73.4±5.5%、47.0±2.5%和6.0±3.2%,对HL-60、K562细胞增殖抑制率分别为94.1±5.1%、88.2±3.2%、67.6±3.1%、60.1±4.7%、23.5±6.2%和88.9±3.1%、83.3±2.4%、55.6±7.1%、31.5±4.6%、25.9±6.0%,抑制的IC50值分别为18.65(15.92、21.84)μg/ml、12.41(10.40、14.78)和18.39(15.59、21.70)μg/ml.结论:本研究结果显示蛇葡萄素对肿瘤细胞Bel-7402、HL-60和K562增殖有明显的抑制作用,可能具有较高的开发价值.     

茶酚硒混合物的小鼠急性毒性试验

目的:观察茶多酚(TP)与亚硒酸钠(sodium selenite)混合物一次给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况.方法:一次灌胃(ig)给药,观察14d.结果:测得TP单用一次ig的LD50为2914.45mg/kg;亚硒酸钠单用一次ig的LD50为33.54mg/kg;当TP与亚硒酸钠按7997.3mg∶2.7mg比例做成混合物,测得混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg,其中亚硒酸钠的含量为0.85mg/kg.结论:茶酚硒混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg.     

天然紫草萘醌类化合物及其衍生物的抗瘤作用研究

紫草为传统中药，具有广泛的药理作用，抗瘤作用是其中之一。由于天然紫草有效成分含量极低，抗癌活性不强，限制了临床上应用。为了提高萘醌类化合物的抗癌活性，现以紫草有效成分β，β-二甲基丙烯酰阿卡宁作为先导化合物，进行结构改造，在芳环C-6或C-7以及侧链C-11引入含巯基或含氮基团，半合成系列紫草萘醌类衍生物（SYUNZs），对这系列衍生物进行体外体内试验，进一步了解紫草萘醌类衍生物的抗癌活性与其结构的相关性，为开发高效低毒的新型紫草萘醌类抗肿瘤药物提供理论数据。     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

抗肿瘤药鬼臼毒素衍生物构效关系的研究

目的：探讨鬼臼毒素衍生物的三维定量构效关系（three-dimensional quantiative structure-activity relationship,3D-QSAR)及活性部位。方法：用比较分子力场分析（comparative molecular field analysis,CoMFA)方染对鬼臼毒素23个衍生物进行了三维定量构效关系研究,然后用AM1（Austin model1)方法进行计算,讨论它们的3D－QSAR及活性部位。结果：以CoMFA方法建立了一个有较强预测能力的QSAR模型,在对体外L1210白血病细胞生长的抑制活性上,C4位为改变活性的有效修饰位点;其B环是药物分子接受电子部位,对保持此类药物的生物活性有重要作用;E环及其含氧取代基是分子的负电中心。结论：所得CoMFA模型可预测该类化合物的活性,化合物B环及E环是 活性部位。