人骨肉瘤细胞株中骨形态发生蛋白-1的检测、克隆和表达

目的:利用基因工程技术生产人骨形态发生蛋白-1的高保守区多肽, 为进一步产生广谱型BMP-1抗体提供有效的抗原蛋白。方法:通过分析BMP-1类各种分子的基因序列及蛋白结构, 选择其中的一个片段作为目的基因。从人骨肉瘤细胞株Saos-2中提取总RNA, 用RT-PCR扩增目的基因片段并克隆到原核表达载体pMALc2中, 构建成重组质粒BMP-1(322-588aa)-pMALc2。将该重组质粒转化大肠杆菌DH5-α, 经过筛选鉴定获得数个阳性克隆, 再进行DNA序列测定。最后用IPTG诱导宿主菌表达融合蛋白。结果:BMP-1基因片段被成功地克隆到pMALc2载体中, 在IPTG的诱导下能高效表达, 融合蛋白的表达量占细菌蛋白总量的(66-72)%。结论:所获得的重组蛋白包含BMP-1的几个完整的重要结构域(2个CUB区和1个EGF区), 为BMP-1类分子所共有的高度保守区。该重组蛋白作为抗原, 可进一步用于产生能有效、特异地识别人类BMP-1类分子的广谱型BMP-1抗体。     

苦味酸天狼星红偏光法观察软骨性肿瘤的胶原改变

软骨性肿瘤胶原的分布和类型会发生改变〔1〕,我们采用苦味酸天狼星红偏光法 ,观察软骨性肿瘤中Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变 ,试图寻找一种简便、灵敏的研究方法。1　材料与方法1.1　标本　取自中山医科大学病理学教研室 1984～ 1998年病理档案石蜡标本软骨瘤 18例 ,骨软骨瘤 19例 (图 1) ,软骨肉瘤 2 8例 ,用正常软骨 6例做对照。1.2　苦味酸天狼星红染色　切片厚 4μｍ ,脱蜡至水 ,0 1%苦味酸天狼星红液浸染 1ｈ ,自来水稍冲洗 ,苏木精复染胞核5～ 10ｍｉｎ ,脱水、透明、封固〔2〕。1.3　偏光镜观察　用普通显微镜加一对偏振片 (包括起偏镜片和…     

骨肉瘤中Rb、p16、CDK4、cyclinD1蛋白的表达及其意义

目的 探讨骨肉瘤中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ４、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组化方法对４０例骨肉瘤组织中Ｒｂ、ｐ１６、ＣＤＫ、ｃｙｃｌｉｎＤ１的蛋白表达状况进行检测。结果 ４０例骨肉瘤Ｒｂ、ｐ１６蛋白表达缺失分别为７２．５％（２９／４０和）２２．５％（９／４０）;１１例ｐＲｂ阳性的骨肉瘤中的８例ｐ１６阴性,２９例ｐＲｂ阴性的骨肉瘤中２８例ｐ１６阳性;５２．５％（２１／４０     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果：成功地将重组野性型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，在ｇｐｔ选择培养基中培养两周后，分离生长出阳性细胞克隆；经ＰＣＲ证实外源性ｐ５３基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代；当向培养液中加入１μｍｏｌ／Ｌ地塞松（Ｄｅｘ）后，８ｈ即可用免疫组化方法检测到ｐ５３蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变，转染后的瘤细胞凋亡率高达９０％。结论：当人骨肉瘤细胞株中重组野生型ｐ５３基因诱导过表达时，瘤细胞呈现凋亡，本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。     

骨肉瘤中p53、p21WAF1、cyclinA蛋白的表达及其意义

目的探讨骨肉瘤中p53、p21WAF1、cyclinA蛋白的表达及相互关系.方法应用免疫组化方法对骨肉瘤组织及正常软组织中p53、p21WAF1、cyclinA的蛋白表达进行检测.结果正常软组织中p53表达均阴性,28%(14/50)骨肉瘤中可检测到p53蛋白的异常积累;正常软组织中均有不同程度的p21WAF1蛋白的阳性表达,52%(26/50)骨肉瘤p21WAF1阴性,骨肉瘤中p21WAF1的蛋白表达表现为p53蛋白依赖性的方式;正常组织中cyclinA为阴性,75.6%(28/37)骨肉瘤中存在cyclinA蛋白过表达,cyclinA与p21WAF1的表达呈负相关(r=-0.874,P＜0.01);p21WAF1蛋白的表达与骨肉瘤的分化呈正相关(r=0.687,P＜0.01).结论p53蛋白的异常积聚、p21WAA1的失表达及cyclinA的过表达参与了骨肉瘤失控的增生及肿瘤的形成.     

X线引导胆道镜治疗术后胆道残留结石价值分析

国内统计肝胆管结石术后残余结石发生率高达40％～70％，一直是肝胆外科最为棘手的问题之一。随着纤维胆道镜技术、设备的发展，经胆道镜取石作为处理胆道术后残留结石的重要手段，已经使大量胆道手术后残留结石病人免于再次手术。但是采用传统胆道镜取石方法对于部分难取性结石网常给操作者带来以下困难：1、操作时间较长，操作者要有更大的耐心，会给患者更多的痛苦。2、部分结石一次难以全部取出，有的需要多次取石，反复取石给患者更多的痛苦。3、文献报道传统纤维胆道镜方法结石清除率多为90．00％～99．40％，     

新疆库尔勒地区轮台县维吾尔族居民膳食调查分析

目的了解新疆库尔勒地区轮台县维吾尔族的膳食结构及营养素摄入水平,以便指导维吾尔族营养保健,改善和提高维吾尔族的营养状况,为在少数民族地区进行营养学的宣传教育指导以及预防各种疾病,提供科学依据。方法以新疆库尔勒地区轮台县维吾尔族为调查对象,采用问卷调查法对192名研究对象进行基本情况调查,采用24h回顾法进行膳食营养状况调查。结果热量、蛋白质、大部分维生素及矿物质都已达到甚至超过DRIs标准,维生素A、核黄素、钙和锌摄入不足,达不到DRIs标准的要求,动物性脂肪有摄入过多的趋势。结论维生素A、核黄素、钙和锌为当地维吾尔族缺乏的营养素。建议在当地维吾尔族中开展宣传工作,加强对维吾尔族的营养指导,注意补充维吾尔族易缺乏的营养素,降低维吾尔族居民的动物脂肪摄入量。     

异环磷酰胺为主治疗晚期非小细胞肺癌疗效和毒性

近年来,ＩＦＯ以单药或联合化疗用于多种恶性肿瘤治疗,并取得明显疗效。本文总结以ＩＦＯ为主的化疗方案治疗32例晚期非小细胞肺癌的临床观察。材料和方法一　研究对象　1995年9月—1997年9月期间住院的晚期肺癌患者32例,其中男20例,女12例,年龄32—73岁。经病理确诊,其中鳞癌15例,腺癌12例,肺泡细胞癌5例。32例中,初次治疗18例,既往化疗后病情进展9例,放疗后复发并远处转移5例。临床分期Ⅲｂ期15例,Ⅳ期17例,均无手术治疗适应证,其中合并上腔静脉综合征5例,合并癌性胸水9例。ＥＣＯＧ评分0分8例,1分14例,2分7例,3分3例。二　治疗方案　ＩＣ…     

20例特殊类型肺癌的临床及X线诊断

特殊类型肺癌由于缺乏可靠的临床表现及胸部平片改变，极易造成误诊、漏诊＾（１）。本文总结分析了我院收集到的资料完整的２０例特殊类型的病例，包括１．肺段型肺癌１０例；２．纵膈型肺癌２例；３．细支气管肺泡癌１例；４．肺上沟癌２例；５．肺结核与肺癌并存２例；６．胸腔积液与肺癌并存３例。重点讨论了几种特殊类型肺癌的景象学特点及临别诊断，以进一步提高对特殊类型肺癌的认识。