人参皂苷Rg1对细胞衰老过程中p21，cyclin E和CDK2表达的影响

目的探讨p21、细胞周期蛋白E (cyclin E) 和周期蛋白依赖性蛋白激酶2 (cyclin-dependent kinase 2, CDK2) 在人参皂苷Rg1对抗三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导WI-38细胞衰老过程中的可能作用。方法细胞超微结构、流式细胞分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞，蛋白印迹法检测p21,cyclin E和CDK2蛋白的表达。结果Rg1预处理可明显减弱t-BHP对WI-38细胞衰老的诱导作用，同时p21表达水平明显降低，cyclin E和CDK2表达水平增加。结论人参皂苷Rg1对抗三丁基过氧化氢对细胞衰老的诱导作用可能与其改变p21，cyclin E和CDK2的表达水平有关。     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导大鼠海马神经元tau蛋白异常磷酸化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对Aβ2535所致大鼠海马神经tau蛋白异常磷酸化的抑制作用及其可能机制。方法应用脑立体定向技术向成年大鼠海马背侧注射凝聚态Aβ25355nmol制备AD样大鼠模型,术后分别给予腹腔内注射不同浓度的人参皂苷Rg1(625、125、25μmol·kg-1)处理,14d后处死,采用镀银染色方法观察海马组织神经元病理改变;免疫组织化学染色方法和免疫蛋白印迹技术显示大鼠脑内[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达水平情况,以及总tau蛋白的水平(tau5);免疫蛋白印迹技术检测海马组织中GSK3β和磷酸化GSK3β的水平变化。结果凝聚态Aβ2535注射组神经元纤维走行紊乱,增粗、肿胀密集成宽带状,轴突深染;而人参皂苷Rg1对神经元具有明显的保护作用,脑内总tau的水平下降,[pS396]tau、[pSpS199/202]tau、[pT231]tau的表达明显低于Aβ2535注射组(P<001),以25μmol·kg-1保护作用最明显;GSK3β和磷酸化GSK3β的水平亦明显低于Aβ2535注射组,与正常和假注射组差异无显著性(P>005),以25μmol·kg-1作用最明显。结论人参皂苷Rg1对Aβ2535诱导的AD样大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能是通过阻断GSK3β的活性而降低磷酸化tau蛋白的表达而实现的。     

人参皂苷Rg1可能通过丝裂素活化蛋白激酶途径抑制细胞凋亡

目的探讨人参皂苷Rg1对MPP+诱导细胞凋亡保护作用的可能信号传导途径.方法用吖啶橙-溴化乙锭染色观察SHSY5Y细胞凋亡率,流式细胞仪检测细胞内活性氧ROS水平,Western Blotting法检测JNK(c-jun NH2-terminal kinase)激酶活性,免疫细胞化学染色法检测裂解的Caspase-3阳性细胞的表达率.结果经10 μmol*L-1 Rg1或2.5 mmol*L-1 N-乙酰半胱氨酸预处理后,MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡受到明显抑制,同时细胞内ROS下降,JNK激酶的活性减弱,裂解的Caspase-3阳性细胞表达率下降.结论 Rg1可抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡,其作用机制可能是通过清除ROS、减弱JNK激酶的活性,从而减少Caspase-3的激活.     

伏立诺他对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能及脑内tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)对阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能和脑内tau蛋白磷酸化的影响.方法 分别选择12只5XFAD转基因(5XFAD-CC)和野生型(WT)小鼠,采用HDACi伏立诺他(SAHA,每组7只)与溶媒对照(每组5只)处理动物,利用Y-迷宫、Morris水迷宫评估5XFAD-CC小鼠学习和记忆能力,通过蛋白免疫印迹检测α-tubulin乙酰化、tau和糖原合成激酶3β(GSK313)蛋白及其磷酸化水平.结果 SAHA可改善5XFAD-CC小鼠即刻记忆、工作记忆能力,SAHA组进入新奇区域的次数(39.10％ ±2.25％,t=2.688,P=0.031)和停留时间(26.81％ ±0.78％,t=3.271,P=0.017)较溶媒对照组(分别为30.33％±2.32％和19.80％±1.99％)明显增加;同时,SAHA可改善5XFAD-CC小鼠空间参考记忆能力,SAHA组寻找平台的潜伏期较溶媒对照组缩短(F=5.936,P=0.045)及进入原平台所在象限时间增加(31.70％ ±4.21％,t=2.317,P=0.049).SAHA可增加5XFAD-CC和WT小鼠脑内HDAC6底物α-tubulin乙酰化水平(分别增加26.42％和29.64％),降低5XFAD-CC小鼠海马tau-pSer396、tau-pSer404和tau-pThr231磷酸化水平(与溶媒对照组比较,分别减少24.22％、48.98％和26.95％)及GSK3β磷酸化水平(31.29％).结论 SAHA可改善5XFAD小鼠的学习和记忆能力,可能与其降低tau和GSKSB蛋白磷酸化水平有关.     

Bcl-2和Bax在多巴胺诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨多巴胺诱导PC12细胞凋亡的可能机制。方法流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率。结果多巴胺诱导PC12细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系。0.45mmol/L多巴胺作用24h,细胞的凋亡率为53.3%±3.1%。在凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高。诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂和半胱氨酸蛋白酶3(CPP32)抑制剂对抗多巴胺诱导PC12细胞的凋亡作用与Bcl-2蛋白增加、Bax蛋白降低有关。结论Bcl-2和Bax蛋白是多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要调节蛋白,iNOS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用。     

三丁基过氧化氢诱导WI-38细胞衰老的细胞周期调控机制

目的：探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导WI-38细胞衰老的细胞周期调控机制。方法： 从30代开始，隔代用t-BHP作用WI-38细胞4次，每次1 h，诱导细胞衰老，从细胞超微结构、细胞周期分析和β-半乳糖苷酶细胞化学染色观察衰老细胞的特点，同时用Western blotting方法检测细胞周期调控蛋白CDK4、CDK2、cyclin D1、cyclin E 、p21和p16的表达程度。 结果：100 μmol/L t-BHP作用4次后，WI-38细胞出现衰老的特征，细胞增殖分裂停止，细胞体积增大、胞体变平、次级溶酶体增多，同时G1期细胞比例增加，β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数增加，提示t-BHP能有效地诱导细胞衰老。t-BHP作用后CDK4、CDK2、cyclin E 表达下降，cyclin D1、p21和p16表达增加。 结论： t-BHP有诱导细胞衰老的作用，其机制可能与通过调节细胞周期调控分子的表达有关。