胚胎期脂多糖暴露可通过钟样受体4引起出生后多巴胺能神经元减少

目的 观察钟样受体4(TLR-4)在胚胎期脂多糖 (LPS) 暴露引起的出生后个体脑内多巴胺 (DA) 能神经元减少中的作用.方法 TLR-4 突变型C57BL/10ScNCr小鼠和野生型C57BL/10ScSn小鼠各15只,在妊娠期第10.5天给小鼠腹腔注射LPS或肽聚糖(PDG),出生后4月龄时收集大脑组织标本(n=5),通过免疫组织化学染色和体视学技术定量DA能神经元和小胶质细胞数量,高效液相色谱法测定DA及其代谢物水平,免疫荧光法结合流式细胞术测定TNF-α和IL-1β蛋白水平.结果 出生前接触过LPS的4月龄C57BL/10ScSn小鼠,与注射生理盐水的对照小鼠比较,黑质DA能神经元减少(25.3±2.1)%,纹状体DA含量降低(33.5±5.0)%,黑质小胶质细胞数量增加(294±24)%,黑质和纹状体TNF-α和IL-1β蛋白水平也明显增高;但是出生前接触过LPS的TLR-4突变型C57BL/10ScNCr小鼠脑内无相应变化.出生前接触过TLR-2配体PDG的4月龄C57BL/10ScNCr 和C57BL/10ScSn小鼠均出现脑内DA能神经元减少和免疫炎症改变.结论 胚胎期接触LPS可通过TLR-4引起出生后个体脑内DA能神经元减少.     

人参皂苷Rg1延缓三丁基过氧化氢诱导细胞衰老的作用机制

目的研究人参皂苷Rg1对三丁基过氧化氢(tert-butylhydroperoxide,t-BHP)诱导的快速衰老细胞线粒体功能的影响。方法WI-38细胞从20代开始培养,随机分为年轻组、对照组、单纯t-BHP作用组(即模型组)和5、10、20μmol／L人参皂苷Rg1预处理组。通过透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞术分析细胞周期,计算G1期细胞的比率;SA-β-半乳糖苷酶细胞化学染色,计算阳性细胞数;流式细胞术检测各组细胞的线粒体膜电位;化学发光法测量细胞内ATP的水平;分光光度计法比较各组细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅳ的活性变化。结果100μmol／L t-BHP作用4次后的WI-38细胞出现典型的衰老特征,表现为体积增大,胞体变平,次级溶酶体增多,线粒体肿胀,同时G1期细胞比例和SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数明显增加。模型组线粒体膜电位较年轻组和对照组有下降趋势,经人参皂苷Rg1处理后线粒体膜电位有不同程度的提高,但差异无统计学意义;ATP生成量模型组(6434±2207)较年轻组(10484±1056)和对照组(8936±2457)明显下降(均为P<0．05),不同剂量的人参皂苷Rg1处理后能提高ATP水平(P<0．05);线粒体呼吸链复合物Ⅳ的活性模型组(0．2653±0．0211)较年轻组(0．3832±0．0938)和对照组(0．5032±0．1218)明显下降(均为P<0．05),不同剂量的人参皂苷Rg1处理能提高复合物Ⅳ的活性(P<0．05)。结论人参皂苷Rg1能有效对抗t-BHP诱导的细胞衰老,有较好的抗衰老作用;人参皂苷Rg1可能通过提高线粒体呼吸链复合物Ⅳ的活性而提高ATP生成量,从而对抗t-BHP诱导的线粒体损害。     

寡聚态β-淀粉样肽1～42可通过胶质-炎症反应损伤神经元

目的 观察寡聚态β-淀粉样肽1～42(Oligo-Aβ1～42)诱导的小胶质细胞条件培养液对Neuro-2A神经元细胞的影响,探讨炎症介质在胶质介导的神经元损伤中的作用.方法 以Oligo-Aβ1～42诱导BV-2细胞,制备小胶质细胞条件培养液,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定Neuro-2A神经细胞的活力,AO-EB染色荧光显微镜观察计数细胞凋亡和坏死率;酶联免疫吸附试验(ELISA法)测定小胶质细胞培养上清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及前列腺素E2(PGE2)水平;Griess法检测上清NO水平;免疫印迹法测定小胶质细胞胞质环氧合酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平.结果 Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液(Aβ-CM)明显引起Neuro-2A神经细胞损伤,MTF法显示神经元活力随Aβ诱导剂量的增加而逐渐下降(P<0.01),并且浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的Aβ-CM组比同浓度Aβ单纯组神经细胞的存活率更低,分别为(53.75±3.95)%和(34.61±2.72)%(Aβ-CM组与Aβ单纯组相比P<0.05,P<0.01);联合作用组(Aβ-CM+Aβ)神经细胞存活率下降更明显,两因素方差分析显示,Aβ诱导的小胶质细胞条件培养液与单纯Aβ(1.0μmol/L)有协同作用[F(3.39)=53.16,P<0.001].AO-EB荧光观察计数显示,低浓度(0.2μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导的小胶质细胞条件培养液可引起神经细胞发生凋亡性损伤,较高浓度(1.0～5.0μmol/L)Oligo-Aβ1～42诱导不仅引起神经细胞凋亡,还引起细胞发生坏死性改变.进一步研究显示,低浓度(0.2～5.0μmol/L)的Oligo-Aβ1～42明显增加小胶质细胞培养上清中TNF-α、PGE2、NO的产量及胞质COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),呈现一定的量效关系.结论 低浓度Oligo-Aβ1～42可通过胶质-炎症反应加剧神经元损伤,其作用可能与Oligo-Aβ1～42诱导小胶质细胞产生炎症介质及胞质内COX-2、iNOS蛋白表达水平增高有关.     

恶性肿瘤患者血清特异可见荧光光谱的初步研究

目的 探讨血清可见荧光光谱诊断恶性肿瘤的临床意义，方法 采用光激光荧光光谱技术测定６７例恶性肿瘤，２８例良性肿瘤和３８例正常对照者血清在５０５ｎｍ波长的可见激光下的荧光发射光谱。结果 恶性肿瘤患者血清在６３５ｎｍ处出现一特征性荧光发射峰，阳性率为８３．６％，显著高于良性肿瘤组（１０．７％，Ｐ〈０．０１）和正常对照组（５．３，Ｐ〈０．０１），良性肿瘤组同正常对照组差异显著无显著性意义（Ｐ〉０．０５）     

氧化应激是MPP+诱导SHSY5Y细胞凋亡的可能机制

探讨MPP+诱导SHSY5Y细胞凋亡的可能机制.采用流式细胞仪测定SHSY5Y细胞的凋l亡率、Bcl-2/Bax蛋白的表达率、活性氧的生成量,免疫细胞化学染色法观察活化型CPP32的表达.结果显示,MPP+诱导SHSY5Y细胞凋亡,两者间呈明显的量效和时效关系.在凋亡过程中Bcl-2蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达随之增高.随着MPP+作用浓度的增加和作用时间的延长,ROS的生成逐渐增加,活化型Caspase-3阳性细胞的百分比也逐渐增加,均有明显的量效和时效关系.提示Bcl-2/Bax蛋白是MPP+诱导SHSY5Y细胞凋亡的重要调节蛋白,ROS和CPP32在凋亡过程中可能具有重要作用.     

MPP+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨1－methyl-4-phenylpyridium iodide(MPP^ )对SHSY5Y细胞的毒性作用。方法 采用体外培养的SHSY5Y细胞,通过TUNEL染色、细胞超微结构观察和DNA倍体分析检测MPP^＋对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用。结果 MPP^ 可明显地抑制SHSY5Y细胞的生长,并诱导SHSY5Y细胞发生凋亡,主要表现为TUNEL染色阳性的细胞增多,细胞核异染色质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、消失,在DNA周期中的G0－G1期前出现明显的亚二倍体峰。结论 MPP^ 通过诱导SHSY5Y细胞凋亡的方式发挥毒性作用。     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。     

寡核苷酸的摄取与血液肿瘤细胞种类和增殖活性的关系

目的探讨血液肿瘤细胞摄取寡核苷酸与其种类和活性的关系。方法流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度。结果经过0.60 μmol·L^-1 荧光素FITC标记的G3139作用4 h后，血液系统肿瘤患者外周血及骨髓单个核细胞对G3139的摄取能力明显高于正常人；不同来源的血液肿瘤细胞株摄取G3139的能力不同，单核细胞、B淋巴细胞和髓系粒细胞来源的白血病细胞的摄取能力明显高于T淋巴细胞来源的白血病细胞；经过全反式维甲酸作用的HL60细胞的增殖活性明显受到抑制，同时细胞摄取G3139的能力明显下降。结论血液肿瘤细胞具有摄取寡核苷酸的能力，这种摄取能力与其细胞种类和细胞增殖活性有关。     

脂质体转染bcl—2反义寡核苷酸G3139在HL—60细胞中的动力？…

目的 应用阳离子脂质体介导或直接转染时,建立ＨＬ－６０细胞摄入由５′－ＦＩＴＣ标记的ｂｃｌ－２反义寡核苷酸Ｇ３１３９的动力学模式及观察Ｇ３１３９在细胞内的分布。方法 流式细胞仪测定细胞内的相对平均荧光强度,荧光显微镜观察细胞内的荧光分布。结果 ①脂质体介导转染法显著提高ＨＬ－６０细胞对Ｇ３１３９的摄入,当ＤＯＳＰＥＲ／Ｇ３１３９（ｕｇ／ｕｇ）为２．２／１时,细胞内相对平均荧光强度可达Ｇ３１３９直接