一氧化氮可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的：探讨多巴胺（DA）诱导的PC12细胞凋亡是否与内源性一氧化氮（NO）生成有关。方法：酶还原法测定NO浓度，RT－PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS)和caspase-3 mRNA表达水平，免疫细胞化学方法和蛋白印迹法分别检测活化型caspase-3蛋白和iNOS蛋白水平。结果：在多巴胺诱导PC12细胞凋亡过程中，iNOS mRNA和蛋白表达明显增加，内源性NO生成增多，caspawse-3mRNA和活化型caspase-3蛋白的表达也明显增加，结论：内源性NO可能参与多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用。     

阳离子脂质体增加造血系统恶性肿瘤细胞株对寡核苷酸G3139的摄入

目的观察阳离子脂质体DOSPER介导或Bcl-2反义寡核苷酸G3139直接作用时,造血系统恶性肿瘤细胞株对G3139的摄入,为阳离子脂质体和反义寡核苷酸的进一步应用提供依据.方法利用异硫氰酸荧光素标记的G3139,流式细胞仪(FCM)测定造血系统恶性肿瘤细胞株HL60、K562、U937、CA46和CEM细胞内的平均荧光强度.结果 G3139直接作用于细胞时,细胞内荧光强度U937>HL60>CA46>K562>CEM(P<0.05);DOSPER介导转染时,各细胞内的荧光强度均显著高于直接转染时(P<0.01),而且当DOSPER/G3139(μg/μg)为2～3∶1时,转染效率最佳,但此时各细胞间细胞内平均平均荧光强度无明显的差别(P>0.05).结论不同造血系统恶性肿瘤细胞株对G3139的摄入不同,阳离子脂质体DOSPER可普遍提高细胞对G3139的摄入.     

Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白的过度磷酸化

目的采用凝聚态Aβ25-35建立Tau蛋白过度磷酸化的阿尔茨海默病样细胞模型.方法用不同浓度凝聚态Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞24,48,72 h,通过四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放实验观察Aβ25-35对SH-SY5Y细胞存活的影响;选择对细胞存活影响较小的适宜浓度和作用时间处理细胞,以蛋白免疫印迹法研究Tau蛋白磷酸化水平的变化.结果 Aβ25-35对细胞存活的影响随着作用时间的延长或作用浓度的增加而增强.10 μmol/L Aβ25-35作用于细胞72 h或20 μmol/L Aβ25-35作用于细胞≥48 h时,MTT代谢率均明显下降(P<0.05).Aβ25-35作用浓度>20 μmol/L作用72 h后,细胞LDH释放率明显增加(P<0.05).选用细胞毒性小的10,20 μmol/L Aβ25-35作用于SH-SY5Y细胞0,3,6,12,24,48 h,蛋白免疫印迹示Tau蛋白在Ser396、Ser199/202位点的磷酸化水平增高,于6 h达到最高峰.结论凝聚态Aβ25-35可诱导建立阿尔茨海默病样Tau蛋白过度磷酸化的细胞模型.     

217名TNT接触者白内障检查结果

T.N.T.是苯的硝基化合物,在生产和使用过程中,可以通过皮肤、粘膜、呼吸道和消化道引起中毒性损害。其对眼的损害主要为白内障,且有其临床特点,与其他白内障不同。其特点为淡棕色细点状混浊,沉着于晶体前后、皮质及成人核带,初起点状混浊在晶状体周边部组成断续的环形,以至楔状混浊,最终发生晶状体大部至全部混浊。为了解我市××化工厂接触 TNT 的工人中,其白内障发病情况,我们于1980年8月—10月对该厂217名接触 TNT 的工人进行检查,现将结果整理如下。     

阿尔茨海默病转基因小鼠海马结构NIX的变化

目的观察阿尔茨海默病转基因小鼠海马结构NIX的变化。方法以Morris水迷宫检测野生型和突变型转基因小鼠学习记忆能力,免疫组织化学和共聚焦激光扫描显微技术观察转基因小鼠海马结构促凋亡蛋白NIX的变化结果野生型和突变型小鼠逃避潜伏期中位数分别为29.00 s和38.00 s,差异无统计学意义,P>0.05;野生型和突变型小鼠搜索策略相比,突变型较野生型使用的搜索策略减少,差异有统计学意义,P<0.05;野生型和突变型小鼠NIX免疫反应阳性物灰度值中位数分别为103.83和128.85,差异有统计学意义,P<0.05;野生型和突变型小鼠海马结构NIX平均荧光强度分别为92.18±7.81和103.07±14.94,差异有统计学意义,P<0.05;野生型和突变型小鼠海马结构NIX与线粒体共定位的数目分别为240.94±169.48和544.18±336.44,差异有统计学意义,P<0.05。结论阿尔茨海默病转基因小鼠出现学习记忆障碍,海马结构促凋亡蛋白NIX的量增多,且NIX与线粒体共定位的量增多,提示NIX在阿尔茨海默病病理改变过程中可能起到一定的作用。     

阿尔茨海默病小鼠脑Aβ和LC3分布差异及相关性

目的观察阿尔茨海默病(AD)转基因小鼠不同脑区β-淀粉样蛋白(Aβ)与微管相关蛋白1轻链3(LC3)的分布,探讨二者的变化及其相关性。方法应用免疫组织化学和体视学方法检测Aβ与LC3在AD转基因小鼠各脑区的含量变化。结果 (1)突变型小鼠脑内的Aβ与LC3表达量多于野生型小鼠;(2)Aβ与LC3在突变型小鼠的M1、M2、GD、CA1、CA3、CPu的表达量高于野生型小鼠的相应区域;(3)Aβ与LC3在突变型小鼠海马的GD、CA1、CA3脑区与躯体运动区的M1、M2中的表达量相当,且上述区域的表达量多于CPu,在Cb中表达最少;(4)突变型小鼠LC3与Aβ的分布呈正相关性(r=0.486,P<0.05)。结论 (1)Aβ与LC3在野生型与突变型小鼠相应脑区的分布具有差异性,且二者在突变型小鼠不同脑区中的表达存在差异;(2)LC3在AD转基因小鼠脑中的表达随Aβ表达的增加而增多,提示LC3在AD的发病中发挥作用。     

大鼠皮质神经元的体外培养和纯化

目的：探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。方法：取胎鼠大脑皮质细胞，分别在不同的培养液中进行原代培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。结果：在相差显微镜下可见加用N2添加剂和胎牛血清培养的神经元生长良好，胞体形态多样，突起数目多，长度长，与邻近神经元的胞体或突起形成接触，而胶质细胞则大量死亡，神经元纯化率达94％以上，未加用N2添加剂培养的神经元胶质细胞大量存在，神经元纯化率达50％左右。结论：N2添加剂和胎牛血清联合应用可使大鼠皮质神经元得到良好的生长和有效纯化。     

JNK通路可能介导MPTP诱导的黑质神经元凋亡

目的 探讨氧化应激激活的c-jun NH2-terminal kinase(JNK)细胞凋亡通路在1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(MPTP)诱导帕金森病(PD)小鼠黑质神经元凋亡中的可能作用。方法 采用MPTP制备PD小鼠模型，应用生化技术检测黑质区域谷胱甘肽(GSH)浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活力，尼氏体染色和酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色观察黑质神经元的损害情况，原位缺口末端标记(TUNEL)染色和活化型Caspase 3免疫组织化学染色观察黑质神经元的凋亡情况，同时采用蛋白兔疫印迹法检测磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平。结果 MPTP诱导的PD小鼠黑质区域GSH浓度明显降低，SOD活力明显升高，黑质致密带尼氏体阳性神经元和TH阳性神经元显著脱失，磷酸化JNK及磷酸化c-jun蛋白表达水平上升，同时活化型Caspase 3表达阳性细胞增多，黑质神经元TUNEL染色的阳性率增高。结论 MPTP可诱导小鼠黑质神经元凋亡，机制与增强氧化应激并激活JNK细胞凋亡通路有关。     

CDK4-pRB-E2F1通路是Aβ1-40诱导皮层神经元凋亡的可能途径

目的:探讨β淀粉样肽_1-40(beta-amyloidpeptide_1-40, Aβ_1-40)诱导大鼠皮层神经元凋亡的可能分子机制。方法:以40mg/L的Aβ_1-40诱导离体培养的大鼠皮层神经元凋亡, 流式细胞仪及免疫印迹方法检测细胞周期相关的周期依赖性激酶4(CDK4)、磷酸化的视网膜神经胶质瘤蛋白(pRB)水平;RT-PCR技术检测E2F1mRNA表达水平;荧光分光光度计检测半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶3(caspase-3)活力;观察在Aβ_1-40诱导凋亡过程中是否伴随上述指标的变化。结果:①CDK4、磷酸化pRB水平在Aβ_1-40作用后2-4h显著升高;②Aβ_1-40孵育3h后皮层神经元E2F1基因表达上调;③Aβ_1-40作用12-24h后caspase-3活力明显升高。结论:CDK4-pRB-E2F1信号转导通路可能在Aβ_1-40诱导的大鼠皮层神经元凋亡中起主要作用。