银杏内酯诱导的缺血耐受与HIF-1α表达的研究

目的研究银杏内酯（Gin）预处理诱导PC12细胞对缺血的耐受,以及相关的缺氧诱导因子-1α的表达调控机制。方法采用氧葡萄糖剥夺法在PC12细胞上建立缺血模型。观察Gin预处理后PC12细胞磷酸化糖原合成激酶-3β（p-GSK-3β）和HIF-1α的表达及其表达能否被PI3K抑制剂LY294002所抑制。结果MTT结果显示,缺血9 h处理后,PC12细胞活力明显降低,Gin预处理对细胞具有保护作用,细胞活力明显增加;加入LY后Gin预处理组细胞活力有部分降低。Western Blot结果表明,Gin预处理后p-GSK-3β和HIF-1α蛋白的表达均明显增加;Gin的表达诱导作用可被LY所抑制,p-GSK-3β表达明显减少,HIF-1α表达部分减少。结论Gin预处理可以诱导PC12细胞对缺血的耐受;Gin预处理诱导PC12细胞表达的HIF-1α蛋白可能与PI3K/Akt/GSK-3信号通路的激活有关。     

低重氢水对衰老小鼠脑组织氧化损伤的影响

目的 探讨低重氢水对D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠脑组织氧自由基损伤的影响.方法 成年ICR小鼠随机分为正常对照组,衰老模型组和低重氢水组(n=10),低重氢水组小鼠给予低重氢水自由饮用,其余两组为普通饮用水.在第4周时,模型组及低重氢水组小鼠颈背部皮下注射D-gal 120 mg·kg-1·d-1,连续6 w,造成亚急性衰老模型.分别观察各组小鼠学习记忆能力的改变和脑皮层丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)及乳酸(LD)的含量和Na+-K+-ATP酶活力.结果 给予D-gal 6 w后,Y型电迷宫检测显示模型组72及96 h的正确反应率均明显低于对照组(P<0.05),但低重氢水组与模型组相比没有明显差异.生化检测显示,模型组脑皮层的 MDA及LD含量增高,GSH含量及Na+-K+-ATP酶活力降低,低重氢水能降低脑皮层中MDA及LD含量,显著提高GSH含量及Na+-K+-ATP酶活力.结论 低重氢水对D-gal所致衰老小鼠的脑组织氧化损伤具有一定的保护作用.     

痰中增殖诱导配体mRNA定量测定对非小细胞肺癌的诊断价值

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者痰中增殖诱导配体(APRIL)mRNA含量的方法,探讨痰脱落细胞APRIL mRNA表达在NSCLC诊断中的意义.方法 对2007年8月至2008年5月南通大学附属医院71例NSCLC患者和62例肺部良性病变患者痰中APRIL mRNA进行检测,同时取65名健康成人痰做对照.用RFQ-PCR技术实时检测PCR产物的荧光强度,由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量,以靶基因和内参β2-微球蛋白(β2-M)mRNA含量的比值作为评价其表达水平的指标,并与细胞学检查结果进行比较.计量资料采用t检验,所得结果用x±s表示;对计数资料采用X2检验.结果 RFQ-PCR法检测APRIL mRNA含最的线性范围为38～3.8×106copies/ul,批内和批间变异系数(CV)分别为8.5%和13.6%.NSCLC组痰中APRIL mRNA表达水平显著高于肺部良性病变组和健康对照组(t值为10.50和11.32,P<0.01);良性病变组与健康组比较差异无统计学意义(t=0.379,P>0.05).以健康组APRIL mRNA的x±2s为cut-off值,肺癌组APRIL mRNA表达的阳性率为81.7%(58/71),明显高于肺部良性病变组的3.2%(2/62)和健康对照组的1.5%(1/65).NSCLC组痰中APRIL mRNA的表达与性别、年龄、吸烟史、TNM分期及淋巴结转移尤关(t值分别为1.700、1.014、1.484、1.298及1.186,均P>0.05),与病理分型和肿瘤部位有关(t值为1.650和1.873,均P<0.05).RFQ-PCR阳性率为82%(58/71),高于细胞形态学阳性率的14%(10/71),差异有统计学意义(X2=67.68,P<0.01).结论 RFQ-PCR检测痰中APRIL mRNA含量具有较高的敏感度和特异度,有助于NSCLC的临床诊断.     

人低氧诱导因子1α真核表达质粒的构建和鉴定

目的:构建人低氧诱导因子1α(HIF-1α)真核表达质粒及其在人肝癌细胞(HepG2)中的表达。方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过RT-PCR逆转录,获得HIF-1α的cDNA,双酶切后构建真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证碱基序列。用脂质体法将质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α转染至HepG2,以免疫荧光和Western Blot法分别对转染细胞进行HIF-1α表达分析。结果:扩增出HIF-1α全长cDNA,构建真核表达质粒,测序结果正确。经检测的质粒转染至HepG2细胞后,HIF-1α蛋白水平高于转染空载细胞。结论:成功构建人HIF-1α基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-HIF-1α,并证明其能在HepG2细胞内表达。     

近红外光谱法快速分析注射用头孢硫脒

摘要：目的:利用近红外（NIR）光谱技术,建立定性和定量通用模型,实现注射用头孢硫脒的快速鉴别与含量、水分检测。方法:采用聚类分析法与模式识别模型对注射用头孢硫脒原料来源进行快速分类鉴别,用偏最小二乘法（PLS）建立注射用头孢硫脒含量和水分的定量分析模型。结果:聚类分析法与模式识别模型对原料来源分类识别结果一致,准确性好。注射用头孢硫脒含量模型的最终优化结果如下:交叉验证相关系数（R2）为60.88,校正集均方根误差（RMSEE）为0.004 68,相对分析偏差（RPD）为1.6,偏差为0.000 5;水分模型的最终优化结果如下:R2为65.12,RMSEE为0.169,RPD为1.69,偏差为-0.042 8。含量和水分模型预测相对偏差分别为0.012%和0.301%。结论:所建定性与定量分析方法可用于注射用头孢硫脒的快速分析,方法简单、准确可靠。     

人参皂甙抗缺血缺氧性脑损伤作用与抑制谷氨酸的释放有关

目的：探讨人参皂甙抗缺血缺氧性脑损伤作用是否与抑制谷氨酸的释放有关,为临床应用人参皂甙防治缺血缺氧性脑损伤提供理论依据。方法：超微观察大鼠离体海马脑片缺氧时ＣＡ１Ａ区锥体细胞结核及含谷氨酸的突触小泡;并在培养的小鼠皮质细胞观察模拟缺血时谷氨酸的释放。同时,观察人参皂甙对上述谷氨酸释放的影响。结果：缺氧时海马ＣＡ１区含谷氨酸的突触小泡明显减少甚至耗竭,培养的小鼠皮质神经细胞缺血时谷氨酸释放明显增加。     

银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用

目的：研究银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用。方法：采用四甲基偶氮唑(MTT)比色分析法观察银杏内酯(37．5μg／ml)、刺五加皂甙(50μg／ml)、人参皂甙(60μg／ml)对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞活性的影响。结果：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙能显著提高氯化钴诱导缺氧的PC12细胞的活性。结论：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导缺氧损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

在急性心肌梗塞护理中心率变异性观察的价值

通过记录24h动态心电图,统计24h正常窦性节律平均R-R间期的标准差(即心率变异性),对36例急性心肌梗塞(AMI)患者进行观察分析,认为心率变异性值的高低对早期发现心律失常、心源性休克、心力衰竭及预后判断有重要意义,有助于提高对急性心肌梗塞患者的病情观察和护理水平。     

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的 建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法 采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果 采用C₁₈色谱柱,流动相：甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C18色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论 所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。