抗CEA单链抗体与人hTNF-α融合基因的构建、表达和纯化

采用基因重组技术将已获得的抗癌胚抗原（ＣＥＡ） 单链抗体基因（ＳｃＦｖ） 与人肿瘤坏死因子α（ｈＴＮＦ α） 基因拼接成抗ＣＥＡＳｃＦｖ ｈＴＮＦ α（免疫毒素） 融合基因, 并克隆进大肠杆菌分泌性表达载体ｐＥＴ ２２ｂ （ ＋ ） 中, 在大肠杆菌中表达了６ ×Ｈｉｓ免疫毒素融合蛋白, 其６ ×Ｈｉｓ 位于ＳｃＦｖ 的Ｎ 端, 在胞内以可溶性存在, 其表达量占菌体总蛋白的６％ , ＳＤＳ ＰＡＧＥ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 显示表达产物分子量为４３ｋＤ, 与其基因编码蛋白的理论推算值相符。经Ｎｉ２＋ ＩＤＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和柱一步纯化的６×Ｈｉｓ 免疫毒素纯度可达９０％ 以上, 得率为０－２ｍｇ／１００ｍｌ。表达产物除了具有与ＣＥＡ 结合的活性, 也具有对Ｌ９２９细胞杀伤的功能。     

睾酮对小鼠卵泡体外发育的影响

目的探讨高浓度睾酮对体外培养的小鼠卵泡生长发育的影响。方法以出生后12日龄的ICR雌鼠体外培养卵泡为研究模型,将卵泡随机分为以下4个组,每组30个:正常对照组(control组)、10-4mol/L睾酮处理组、10-5mol/L睾酮处理组和10-6mol/L睾酮处理组。将卵泡随机分为以下3个组,每组30个:正常对照组(control组)、睾酮处理组(T组,T=10-5mol/L)和雄激素受体拮抗剂氟他胺预处理后再加睾酮处理组(F+T组,F=10-5mol/L,T=10-5mol/L)。在60mm无菌细胞培养皿上进行微滴培养,每天在倒置显微镜下观察卵泡轮廓,颗粒细胞增生情况,卵母细胞形态以及有无卵母细胞逸出等,并记录卵泡存活和退化的情况。结果 10-4mol/L睾酮能抑制卵泡的生长,而10-5mol/L睾酮能够促进颗粒细胞的增殖和卵泡的生长;同时,在卵泡生长前期,睾酮能刺激卵泡的发育,在后期则呈抑制作用,即卵泡发育停滞、退化或死亡。结论在初级和次级卵泡阶段,10-5mol/L睾酮能促进卵泡的发育,而在窦状卵泡阶段则抑制卵泡的发育。     

超声刺激对大鼠多皮层ECoG的调控

目的:为了进一步揭示超声刺激的神经调控机制以及超声刺激引起的刺激效应范围,将超声刺激经颅施加到大鼠前额叶皮层部位,同步记录和分析前额叶、顶叶及枕叶皮层的皮层电位（Electrocorticogram, ECoG）的变化特征。方法:在大鼠麻醉状态下,利用脑立体定位仪将超声探头定位在大鼠前额叶部位的正上方,刺激时间为20 min。以功率谱密度（Power Spectral Density, PSD）、振幅及互相关系数值为指标,分析比较超声刺激前、刺激中、刺激后的ECoG总功率、平均幅值以及皮层间的互相关系数值。结果:（1）超声刺激会增加前额叶皮层ECoG的总PSD和平均幅值（P<0.05）,超声刺激停止后,在较短的时间内ECoG恢复到刺激前水平;（2）在顶叶及枕叶皮层,超声刺激对总ECoG及各频段信号的PSD、平均幅值无显著性影响。但在超声刺激过程中,枕叶ECoG的部分时间段的平均幅值相对于刺激前有显著性差异,即在超声刺激的后半段时间内,超声刺激产生刺激效应范围扩散到枕叶皮层。结论:超声刺激对刺激局部的ECoG具有调控作用,且这种调控具有及时性及快速恢复的特点。超声刺激对ECoG的调控效应范围总体上来说是局限性的,对远离刺激部位的其他脑皮层ECoG的影响尚无明确关系,其效应很可能是超声刺激局部引起的后续神经网络反应。 【关键词】超声刺激;ECoG;脑皮层;神经调控     

膜型/分泌型MICA对NK细胞受体NKG2D的相反调节效应及其对NK细胞受体谱的影响

目的　观察膜型和分泌型MICA对NK细胞受体表达的影响 ,以探讨NK细胞抗肿瘤活化机制及肿瘤细胞表达MICA分子的意义。方法　用MTT法测定人NK细胞系 (NK92 )的细胞毒活性 ;用RT PCR或FACS检测NK细胞受体 (NKG2D ,NKG2A B ,KIR2DL1,KIR2DS1)及NKG2D的识别配体MICA的表达。结果　肿瘤细胞表面的MICA分子可上调NKG2D的表达 ,下调抑制性受体NKG2A B和KIR2DL1的表达 ;而分泌型MICA (sMICA)分子对NKG2D及抑制性受体的表达均有抑制作用。结论　膜型MICA分子可上调NKG2D的表达 ,激发NK细胞对肿瘤细胞的细胞毒效应 ;分泌型MICA分子则通过降低NKG2D的表达下调机体的抗肿瘤免疫效应 ,肿瘤细胞分泌sMICA分子为肿瘤发生免疫逃逸的机制之一。     

支架置入前脑动脉瘤血流场的特性分析

BACKGROUND: Cerebral aneurysm is a kind of mortal hemangioma, and its treatments such as endovascular embolization and clipping both cause high postoperative recurrence rate and mortality. So the stent implantation for cerebral aneurysm is coming into being. OBJECTTVE: To evaluate the hemodynamic parameters after stent implantation into cerebral aneurysm and to provide a novel feasible strategy for clinical treatment. METHODS: A retrospective analysis was preformed based on the CT image data of 11 patients with cerebral aneurysm from the Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University. Firstly, the flexible and solid model of cerebral aneurysm was established by the MIMICS and reverse engineering. Secondly, the matching stent model was implanted into the cerebral aneurysm, and then the blood flow structure of cerebral aneurysm was analyzed by the fluid dynamics theory and the Fluent with the method of two-way flow solid coupling. Finally, comparative analysis of the kinetic parameters of cerebral aneurysm before and after implantation, including wall pressure, blood velocity, path line of the blood flow, wall shear stress, wall deformation was conducted, and blood flow characteristics after stent implantation were analyzed under different entrance velocity. RESULTS AND CONCLUSION: After implantation, the wall surface pressure was reduced about 61.1%; the blood flow velocity around the stent and the inside of the cerebral aneurysm was decelerated obviously; under setting 2 000 lines of blood flow, the number of path line of blood flow into the cerebral aneurysm reduced about 75.0%, the maximum wall shear stress decreased about 79.3%, and the maximum wall deformation reduced to a lower level. The entrance velocity was respectively v1=0.1 m/s, v2=0.2 m/s, v3=0.3 m/s and the wall pressure was in a gradient ascent; the wall shear stress increased with the velocity, meanwhile, τzou (left neck of aneurysm) <τzhong (aneurysm )< τyou (right neck of aneurysm). The path lines of blood flow mainly concentrated in the top of the aneurysm, and the blood velocity markedly affected the surface deformation. These results indicate that main hemodynamic parameters are obviously improved after stent implantation into cerebral aneurysm, and the blood velocity should never be neglectful in the treatment process.     

老年多器官功能不全综合征患者免疫功能探讨

目的:检测老年多器官功能不全综合征(MODSE)患者的细胞免疫、体液免疫指标,了解其免疫水平及其与疾病的关系。方法:将老年患者根据诊断分为MODSE组(46例)和对照组(40例),用双/三色直接免疫荧光标记全血溶血法检测细胞免疫CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD4~+/CD8~+、NK、CIK指标;用免疫比浊法检测体液免疫C3,C4,CH50,IgG,IgA,IgM指标。结果:两组患者CD3~+,NK,IgA差异有统计学意义(P<0.05)。两组免疫功能比较有明显差异:对照组CD3~+高,MODSE组NK、IgA高。结论:MODSE组患者存在免疫功能低下。     

假结核耶尔森菌侵染素蛋白作为DNA疫苗佐剂的免疫效果

目的探讨假结核耶尔森菌侵染素(invasin)羧基端397个氨基酸(Inv397)对抗原免疫原性的影响,以评价其作为DNA疫苗佐剂的效果。方法利用PCR扩增Inv397编码基因(inv397),分别构建编码猪丹毒丝菌表面抗原氨基端蛋白(spaA-N)和Inv397蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-spaA-N,pcDNA3.1-spaA-N-inv397。同时构建重组载体pET-30a-inv397,并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经过Ni Sepharose 6 Fast Flow亲和层析纯化重组Inv397蛋白。将纯化后重组Inv397蛋白与包含spaA-N的重组真核质粒滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测血清特异性抗体水平,细胞增殖实验分析T淋巴细胞增殖反应。结果 Inv397蛋白与spaA-N重组质粒滴鼻免疫组的血清spaA-N特异性IgG水平明显高于spaA-N其它对照组(P<0.01),且T细胞增殖水平也高于其他各组,但无显著差异。结论 Inv397蛋白具有一定程度的免疫增强作用,有可能成为一种新的DNA疫苗佐剂。     

酵母膏联合氧嗪酸钾构建高尿酸血症模型大鼠继发的心血管病变☆

背景：高尿酸血症动物模型的构建是研究高尿酸血症与肾脏和心血管疾病相互关系的重要手段。 目的：采用酵母膏和不同剂量的氧嗪酸钾建立高尿酸血症动物模型,寻找建模的最佳剂量。 方法：以酵母膏(21 g/kg)或酵母膏联合不同剂量氧嗪酸钾(50~200 mg/kg)持续灌胃或腹腔注射28 d建立高尿酸血症大鼠模型。 结果与结论：酵母膏或酵母膏联合50~200 mg/kg氧嗪酸钾持续灌胃或酵母膏联合50~100 mg/kg氧嗪酸钾腹腔注射均能显著提高大鼠血清高尿酸水平,而对大鼠肾、心和动脉功能无明显影响。酵母膏联合200 mg/kg氧嗪酸钾腹腔注射不仅使大鼠血清尿酸维持在高水平,也可引起大鼠肾脏、心脏及动脉形态和病理改变。说明酵母膏联合200 mg/kg氧嗪酸钾腹腔注射是建立持续、稳定高尿酸血症动物模型的最佳配伍剂量,也是研究高尿酸血症引起继发性心血管病理损伤的良好模型。 关键词：尿酸;高尿酸血症;模型;氧嗪酸钾;酵母膏;心血管病变 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.022     

蒙药阿嘎如·朱吉克提取物的抗氧化活性

目的研究蒙药阿嘎如.朱吉克的抗氧化作用。方法采用80%乙醇和蒸馏水分别对蒙药阿嘎如.朱吉克进行超声波提取,检测提取物对于二苯代苦味酰肼(DPPH)自由基的清除作用,以及对β-胡萝卜素-亚油酸氧化体系的抑制作用。结果阿嘎如.朱吉克乙醇提物和水提取物对DPPH自由基有较好的清除作用,其达到50%清除率所需浓度IC50值分别为0.7和1.2g/L。并且对β-胡萝卜素-亚油酸氧化体系有明显的抑制作用,其IC50值分别为1.2和4.8g/L。结论阿嘎如.朱吉克的乙醇提取物及水提取物具有抗氧化活性,水提取物的抗氧化作用明显高于乙醇提取物。