一种可用活体荧光成像技术检测的前列腺原位肿瘤模型的建立

目的建立可用活体荧光成像技术动态观察前列腺原位肿瘤发生及生长的裸鼠模型。方法 10只BALB/c裸鼠前列腺背侧包膜内注入携带红色荧光蛋白（RFP）的前列腺癌PC-3细胞（PR7细胞）悬液20μL,第2、4、6、8周分别用非侵入式活体分子影像系统观察前列腺原位肿瘤发生及其转移情况。尸检取前列腺原位肿瘤、肺、肝、肾、股骨、盆腔淋巴结等组织,制成冰冻切片,通过荧光显微镜下观察及HE染色等方法分别检测肿瘤发生及有无转移等情况。结果第2周开始可用非侵入式活体分子影像系统检测到前列腺原位肿瘤形成,第4周开始可于裸鼠下腹部触及原位肿瘤,第6～8周裸鼠逐渐出现恶液质。荧光信号随原位肿瘤长大而增强,但并未见明显转移灶。尸检也未发现转移灶。结论前列腺包膜内注入携带RFP的前列腺癌PR7细胞可成功建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺原位肿瘤模型,该模型可作为研究前列腺肿瘤发生发展及治疗方式的较理想的动物模型。     

高剂量雌激素通过下调SHH信号通路抑制新生SD大鼠前列腺发育

目的:探讨高剂量雌激素对新生SD大鼠前列腺形态发育的影响,及其与sonic hedgehog(SHH)信号通路之间的关系。方法:100只新生雄性仔鼠随机分为两组,出生后第0、1、3、5天分别给两组仔鼠皮下注射25μl玉米油和高剂量雌二醇(25μg/只,溶于25μl玉米油)。给药后于第1、6、10、20、30天取材前列腺,苏木精-伊红(HE)染色观察前列腺形态发育情况,免疫组织化学和RT-PCR分别检测SHH通路信号分子的表达。结果:高剂量雌激素组,新生SD大鼠前列腺腺体较小,腺管萎缩,发育明显受阻,在出生后第6、10、20、30天与对照组比较有显著差异;雌激素组SHHmRNA的表达在出生后第1、6、10、20、30天较对照组下调(P<0.05);雌激素组SHH信号通路的主要效应分子SHH、SMO、PTC和GLI-1的蛋白表达水平较对照组下调。结论:高剂量雌激素可能通过下调SHH信号通路,从而抑制新生SD大鼠前列腺的发育。     

上皮-间质转化在人胚胎前列腺发育中的发生及意义

目的:探讨上皮-间质转化(EMT)及其转录调控因子Twist1在人胚胎前列腺发育过程中的作用及意义。方法:应用免疫组化方法研究EMT的标志性蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin及转录调控因子Twist1在不同胎龄(25例,16～39周)人前列腺组织中的表达变化情况,分析其与胚胎前列腺发育的关系。结果:E-Cadherin仅表达于前列腺腺体,Vimentin、N-Cadherin和Twist1在腺体和腺体周围间质细胞中均有表达。随胎龄增大,腺体E-Cadherin的表达水平逐渐增强,而Vimentin、N-Cadherin和Twist1的表达水平则逐渐减弱。间质表达的Vimentin、N-Cadherin和Twist1在整个过程中无明显变化。结论:人胚胎前列腺发育过程中存在EMT现象,在早期可能有助于前列腺上皮细胞的游走迁移,以形成腺管;后期则可能对上皮细胞的分化起重要调控作用。     

湖南汉族儿童T淋巴细胞受体保守域α链基因-560C/T多态性与过敏性紫癜发病之间的关系

目的 探讨T淋巴细胞受体保守域α链基因(TCRCα)-560 C/T多态性与过敏性紫癜(HSP)发病之间的关系.方法 收集2010年9月至2011年11月长沙市中心医院、中南大学湘雅三医院、中南大学湘雅二医院就诊的HSP患儿36例,以同期体检的60例健康儿童为健康对照组,应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态分析方法结合琼脂糖凝胶电泳技术,对2组儿童行TCRCα-560 C/T基因多态性分析.结果 TCRCα-560位点的CC、CT、TT3种基因型频率在HSP组和健康对照组间比较差异无统计学意义(x2=5.39,P＞0.05),而该位点的等位基因频率在HSP组和健康对照组间差异有统计学意义(x2=4.69,P＜0.05).结论TCRCα-560C/T基因多态性变化与HSP的发生可能存在一定关联.     

AsRed2示踪前列腺癌肺转移模型的建立

目的:使用携带红色荧光蛋白(AsRed2)的前列腺癌PC-3细胞(PR7细胞)建立可用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。方法:分别采用MTT及Transwell实验比较前列腺癌PC-3与PR7细胞体外增殖、迁移及侵袭能力;将20只BALB/c裸鼠随机平均分为4组,分别尾静脉注射不同浓度PR7细胞悬液200μl,A组:1×107/ml,B组:2.5×107/ml,C组:5×107/ml,D组:2.5×107/ml,并于1周后重复注射2.5×107/ml细胞悬液200μl。第2、4、6、8周分别用活体荧光成像技术检测各组肺转移灶形成情况。结果:前列腺癌PC-3细胞与PR7细胞体外增殖、迁移、侵袭能力均无明显差异(P>0.05);第4周D组40%裸鼠用活体荧光成像检测到肺转移灶;第8周,A组20%、B组60%、C组100%、D组100%裸鼠可检测到肺转移灶;通过病理检查证实肺转移灶形成。结论:通过尾静脉注射携带红色荧光蛋白的前列腺癌PR7细胞可成功建立用活体荧光成像技术监测的前列腺癌肺转移模型。     

GLI-1参与表皮生长因子介导的前列腺癌ARCaP_E细胞体外侵袭活性强化的实验研究

目的:探讨Hedgehog(HH)信号通路效应蛋白GLI-1在表皮生长因子(EGF)介导的人前列腺癌AR-CaPE细胞系体外侵袭活性增强中的作用。方法:以人前列腺癌ARCaP细胞系作为研究模型,免疫荧光技术鉴定ARCaPE内EGF受体(EGFR)和GLI-1的表达情况;100 ng/ml EGF体外作用于ARCaPE后,观察细胞的形态及体外侵袭能力的变化,采用Western印迹检测细胞内ERK信号通路成分和GLI-1蛋白的表达变化情况;Transwell侵袭实验检测EGF(100 ng/ml)与GLI-1拮抗剂GANT61(10μmol/L)单独或联合作用对ARCaPE细胞体外侵袭能力的影响。结果:ARCaPE细胞同时表达EGFR与GLI-1蛋白;EGF诱导上皮样外观的ARCaPE细胞向间质样外观的AR-CaPM转化,增强ARCaPE细胞的体外侵袭能力并显著上调细胞内p-ERK和GLI-1蛋白的表达水平(P<0.05);GANT61明显抑制ARCaPE细胞的体外侵袭能力且减弱EGF对细胞侵袭能力的增强效应(P<0.05)。结论:HH信号通路和EGF/ERK信号通路之间存在一定的相互作用,GLI-1可能在EGF介导的人前列腺癌ARCaPE细胞体外侵袭活性增强过程中发挥着重要作用。