人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法 针对人Notch-1基因序列,按照RNAi序列设计原则,设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3）,通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4 DNA连接酶连接,将Notch-1基因序列插入慢病毒载体pLenOR-THM,构建pLenOR-THM-Notch-1重组载体。质粒转化感受态DH5α细菌,筛选阳性克隆,经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度,观察感染效率。各组病毒载体转染ACC-M细胞后,运用定量逆转录聚合酶链反应和Western blot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果 成功构建慢病毒载体pLenOR-THM-Notch-1,四质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光;浓缩后的病毒滴度为5.8×108 TU·mL-1;以复感染系数为1时感染293T细胞,感染效率在90％以上。QRT-PCR和Western blot检测结果表明,pLenOR-Notch-1-shRNA3组受抑制程度最高。结论 成功构建了人Notch-1 RNAi慢病毒载体。     

DSPP基因启动子不同片段启动活性的对比分析

目的：对比分析牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）基因启动子不同片段的启动活性。方法：选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察DSPP基因启动子不同片段的启动活性。结果：在MDPC-23细胞中,DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体均不同程度地表现了启动活性,其启动活性有差异（P〈0.01）。结论：DSPP基因启动子不同片段的启动活性有差异,其活性变化反映位于-95bp～54bp、-410bp～-195bp、-1243bp～-791bp、-1447bp～-1243bp、-3519bp～-2475bp区存在潜在的增强子;-195bp～-95bp、-670bp～-410bp、-2475bp～-1447bp区存在潜在的抑制子。进一步明确了DSPP基因启动子的结构,为今后研究DSPP基因的特异性表达奠定基础。     

应用组织芯片技术研究人类胰腺癌中前列腺干细胞抗原的表达

目的 检测PSCA在胰腺癌中的表达情况,探讨PSCA在胰腺癌发病中所起的作用.方法 用组织芯片技术构建包含78例导管腺癌,12例慢性胰腺炎患者,10例正常胰腺组织的100点阵的石蜡组织芯片.用免疫组化SP法检测该芯片中PSCA的表达,分析其与胰腺癌I临床病理因素的关系.结果 78例胰腺癌患者中,PSCA阳性表达率为79.5%(62/78),与正常组比较PSCA表达与胰腺癌显著相关(X~2=15.81,P<0.005),与慢性胰腺炎比较PSCA亦与胰腺癌显著相关(X~2=11.33,P<0.005);PSCA表达与年龄、性别、组织分化程度及TNM分期无明显相关性.结论 PSCA阳性表达与胰腺癌相关,可能与胰腺癌的发生发展有着密切关系,但与胰腺癌的临床病理特型无关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of prostate stem cell antigen (PSCA) in human pancreatic carcinoma and explore its role in the oncogenesis of pancreatic cancer. Methods A pancreatic carcinoma tissue microarray was constructed, which contained 10 normal adult pancreas tissues, 12 chronic pancreatitis tissues and 78 pancreatic carcinomas. Immunohistochemistry was employed to detect the expression of PSCA, and the relation between PSCA expression and the clinicopathological factors of pancreatic carcinoma was analyzed. Results The positivity rate of PSCA in pancreatic carcinoma was 79.5 % (62/78), and PSCA staining was more intense in the malignant cells than in the benign cells (x~2=15.81, P<0.005) and chronic pancreatitis tissues (x~2=11.33, P<0.005). No obvious association was found between PSCA expression and the other variables of pancreatic carcinoma (including gender, age at surgery, tumor grade, and TNM stages). Conclusion The expression of PSCA can be related to the development of pancreatic cancer, but not to the clinicopathological factors of the tumor.     

核心结合因子α1对牙本质涎磷蛋白基因转录调控的影响

目的观察核心结合因子α1(corebindingfactorα1,cbfα1)对牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein,DSPP)基因启动活性的影响。方法选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,DSPP基因上游2.6kb片段(-2475bp～ 53bp)为启动子。通过采用瞬时转染、报告基因等方法,用SPSS10.0统计软件包对结果进行统计学分析,观察在MDPC-23中,cbfα1对DSPP基因启动子启动活性的影响。结果在MDPC-23细胞中,pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3-cbfα1共转染组荧光素酶的表达量显著小于pGL3-Enhancer-2.6K pcDNA3共转染组(P<0.01)。结论cbfα1对DSPP基因上游-2475bp～ 53bp区域的启动活性有抑制作用。     

放射性粒子植入治疗中晚期胰腺癌疗效分析

目的:探讨125I放射粒子植入术治疗手术无法切除的胰腺癌的疗效。方法:选择胰腺癌患者50例。内放射治疗组30例,肿瘤内部125I放射粒子植入,有梗阻症状者,加行胆-肠吻合术和胃-空肠吻合术;对照组20例,均行单纯剖腹探查或胆-肠吻合术和/或胃-空肠吻合术。观察肝肾功能、总胆红素变化;肿瘤大小变化;并发症发生情况;腹痛、背痛变化等。结果:两组患者总胆红素术后4周时均接近正常,肝功能明显改善,手术前后比较均具有统计学意义;粒子植入组患者手术前后腹痛、腰痛改善明显。有效率100%(30/30),完全缓解率97%;粒子植入组肿瘤直径有缩小趋势,对照组无明显变化;两组患者均无吻合口瘘、胆瘘、胰瘘、腹腔出血和腹腔感染。结论:125I粒子植入对不可切除的胰腺癌具有确定疗效,不仅可以明显延长患者生存期,提高生活质量,且对胰腺癌引起的疼痛有明显的缓解效果。     

尿潴留、导尿合并尿道膀胱出血的预防和治疗（76例报告）

无论何种病因使尿液充满潴留在膀胱内不能排出均称之为尿潴留.其为一种临床症状,可缓慢的发展,也可急性发作.引起尿潴留的病因很多,可分为梗阻性、神经源性、药物性、精神性等.其病因虽然不同,但最终结局是膀胱逼尿肌松弛无力而使尿液潴留.正常人的膀胱容量为350-450ml.当膀胱尿液在200ml左右,可产生尿意,尿液在450ml左右时,就会感到下腹胀满、疼痛.多数慢性尿潴留患者尿液在1000ml左右,如果持续存在,膀胱内压就会持续升高,输尿管压力增高或输尿管返流、输尿管机械性梗阻,最终出现肾积水及肾功能受损.所以无论是急性尿潴留还是慢性尿潴留,均应先行导尿或保留尿管,防止肾功能受损或使已经受损的肾功能得到尽快的恢复和改善.保留尿管的时间及尿液引流的方法要根据病情和肾功能受损的程度而定.尿管引流不是单纯的治疗方法,要在保留尿管的同时,针对病因进行治疗,才是治疗尿潴留的根本措施.     

145例面中部骨折临床回顾性分析

目的：通过对145例面中部骨折病例的分析,探讨面中部骨折的治疗方法。方法：对145例面中部骨折病例的临床资料进行回顾性研究。结果：面中部骨折好发于男性,占84.8%,20～50岁年龄组123例,占84.8%;交通事故伤为主要致伤原因,占67.6%,手术治疗占78.6%,术后绝大多数病例可获得满意的面形和功能疗效。结论：对面中部骨折的治疗应树立多学科协作的综合系列治疗观念,在正确复位的前提下,采用可靠的固定能取得满意的治疗效果;手法复位或颌间牵引复位加钛板坚强内固定是目前常用的治疗方法。     

39例上、下颌骨骨折的临床分析

目的:上、下颌骨骨折是颌间部严重的损伤,常伴有其他重要生命器官损伤,治疗困难.探讨上、下颌骨骨折的治疗方法. 方法:对39例上、下颌骨骨折患者的临床资料进行回顾性研究. 结果:39例患者中,男34例,女5例,87.17%为交通事故伤,多发伤、合并伤占94.87%,术后咬合关系恢复良好和基本恢复者占78.95%,面形恢复良好和改善者占68.00%. 结论:疗效与骨折损伤类型、程度、治疗时机和规范治疗有关.术前CT平扫+三维重建,可全面了解骨折情况,分析面形、咬合改变的原因和程度,在规范治疗前提下,采用手术解剖复位、颌间牵引复位加钛板内固定是目前常用的最佳治疗方法.     

肝叶钛衣缩紧法快速制备狗肝硬化模型

目的：应用钛丝网编织技术制作肝叶可缩紧式外衣,简便快速而且较为逼真地模拟肝硬化.方法：选取成年杂种犬20条,术前评价肝功能,测定门脉压力、门脉血流和脾脏大小,活检肝组织.对全部实验犬实行肝两叶切除,其余三叶钛衣缩紧术.术后持续测定肝功能变化4 wk.4 wk末,开腹测定门脉压力及门脉血流变化,观察侧枝循环曲张情况,脾脏增大情况,切取肝组织观察组织学变化.结果：肝叶切除及钛衣缩紧术造成了肝组织数量减少、血流路径明显迂曲、肝叶内炎症反应及胶原增生,较为逼真的模拟了肝硬化的血流和组织学状态.术前肝功能各项指标与术后4 wk末测值比较呈明显的下降趋势,明显低于术前的状态.术后即刻门静脉压力明显高于术前,4 wk末测定门静脉压力亦显著高于术后即刻门静脉压.术后4 wk末,侧枝循环明显曲张,脾脏明显增大.讨论：肝叶钛衣缩紧法可以快速制备狗的肝硬化门脉高压动物模型,耗时仅4 wk.肝二叶切除术完成了肝细胞数量的减少,钛衣缩紧术抑制肝三叶代偿增大,弥漫性钛针钉入促进炎症反应及胶原形成,并且造成了血流路径改变,最终侧枝曲张及脾脏增大,肝功能指标表现出肝硬化特征.     

分级脾蒂离断术在巨脾切除术中的应用

目的 分析脾蒂离断术在巨脾切除术中的作用.方法 分析比较2001年至2008年我院在巨脾切除术中分级脾蒂离断术(离断组)与传统脾切除术(传统组)的临床资料.结果离断组脾热、胰瘘、胃瘘的发生率及术后住院时间低于传统组,出血量及手术时间两组差异无统计学意义.结论 分级脾蒂离断术可降低巨脾切除术患者胰瘘、胃瘘发生率,减少术后住院时间,是一种值得推广的手术方式.