青蒿素对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察青蒿素(artemisinin, ART)对脓毒症大鼠肺组织损伤的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture, CLP)制作大鼠脓毒症模型,动物分为正常对照组、CLP组和青蒿素治疗(ART)组,分别于CLP术后2、6、12、24、48、72 h活杀大鼠取肺组织,匀浆后动态浊度鲎试验法检测内毒素(lipopolysaccharide, LPS)水平,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测肺组织TNF-α和IL-6 mRNA的表达,光镜下观察肺组织的病理改变.结果 CLP术后,ART组大鼠肺组织匀浆LPS、TNF-α和IL-6含量较CLP组明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TNF-α和IL-6 mRNA的表达也显著低于CLP组(P＜0.05,P＜0.01),24 h肺组织的病理损伤明显减轻.结论 青蒿素可能通过降低脓毒症大鼠肺组织局部的LPS水平,抑制和减少了TNF-α和IL-6等促炎细胞因子的表达和释放,进而减轻肺组织的损伤.     

青蒿琥酯对盲肠结扎穿孔术脓毒症小鼠的保护作用

目的:探讨青蒿琥酯(AS)对盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症小鼠的保护作用及其可能机制。方法:采用CLP制作小鼠脓毒症模型,术后0、4、24、48h重复肌肉注射AS,观察7d内CLP小鼠的死亡率;检测术后4、8h血浆脂多糖(LPS)、TNF-α、IL-6水平;术后8h小鼠肺脏组织形态的变化。结果:AS明显降低CLP小鼠的死亡率(P<0.05)及血浆LPS、TNF-α和IL-6水平(P<0.05或P<0.01),减轻肺组织的损伤。结论:AS对CLP小鼠具有显著的保护作用,该作用可能与其降低血浆LPS水平、减少促炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放和减轻组织脏器的损伤有关。     

栀子拮抗细菌脓毒症有效成分京尼平苷的研究

目的：脓毒症是感染因素介导的全身炎症反应综合征,是烧伤、创伤和感染性疾病患者的常见并发症,其中内毒素（LPS）是介导细菌脓毒症的重要病原体相关分子模式。重组人活化蛋白C作为FDA批准的第一个用于治疗重度脓毒症的药物,经过6年的应用评估,其疗效已被否定,迄今脓毒症治疗仍缺乏有效药物。本文通过从中药栀子中提取分离具有中和LPS作用的有效成分京尼平苷,研究其拮抗细菌脓毒症的活性。方法：以LPS活性中心LipidA为靶点,采用生物传感器技术,从传统清热中药中筛选出具有LipidA结合活性的栀子,进而利用现代色谱技术分离出具有拮抗LPS活性的单体京尼平苷,通过鲎试剂法检测京尼平苷对LPS的体内外中和作用;RT-PCR法检测京尼平苷对LPS诱导巨噬细胞TLR4和TNF—αmRNA表达的影响;ELISA法检测京尼平苷对LPS刺激RAW264．7细胞产生细胞因子（TNF—α）的抑制作用;观察京尼平苷对脓毒症模型小鼠的保护作用。结果：京尼平苷在体外对LPS具有直接的中和作用,并呈现出较好的剂量效应关系：同时可剂量依赖的抑制LPS刺激引起的RAW264．7细胞的活化（TLR4和TNF-αmRNA的表达下调,细胞因子TNF-α的产生减少）;在体内可降低LPS血症模型动物血中的LPS水平;对致死剂量热灭活大肠埃希氏菌攻击的小鼠具有显著的保护作用。     

黄芩抗内毒素组分的制备及其生物学活性研究

目的:研究从黄芩中分离提取拮抗内毒素(LPS)组分的制备方法及其生物学活性。方法:采用大孔吸附树脂AB-8将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心LipidA的结合活性,ELISA法检测各组分对LPS刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响;由此筛选出能与LipidA结合并对LPS刺激的RAW264.7细胞活化具有抑制作用的组分,进一步观察所得组分对脓毒血症模型动物的保护作用。结果:采用大孔吸附树脂AB-8从黄芩中共分离到5种组分(SbG-1～5),其中SbG-4、SbG-5与LipidA具有较高结合活性,特异性结合值(RU)分别为113.36arc/s、73.75arc/s;SbG-4、SbG-5(100mg/L)可显著抑制LPS(100μg/L)诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α(P<0.05);SbG-4能显著提高热灭活大肠杆菌(1.33×1011CFU/Kg)所致脓毒血症小鼠的72h存活率(P<0.05),并呈剂量效应关系。结论:从黄芩中分离提取的具有拮抗LPS活性的SbG-4可抑制LPS刺激的RAW264.7细胞活化,并对脓毒血症模型动物具有显著的保护作用。     

多黏菌素B拮抗内毒素活性的实验研究

目的 探讨多黏菌素B（PMB）拮抗内毒素（LPS）生物学活性的机制。方法 观察PMB（1mg／kg）对LPS（20mg／kg）攻击的脓毒症模型小鼠的保护作用；应用生物传感器技术检测PMB与LPS和活性中心类脂A（lipid A）的亲和力，动态浊度法鲎试验观察PMB对LPS（2ng／ml）的中和能力，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测PMB对LPS（100ng／ml）刺激的小鼠腹腔巨噬细胞（PMФ）释放肿瘤坏死因子α-（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）的抑制作用，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测PMB对LPS（100ng／m）刺激的小鼠PMФ的Toll样受体4（TLR4）、TNF-α和IL-6mRNA表达的影响。结果 PMB处理小鼠3d存活率为65％，显著高于LPS组的15％（P〈0．01）；PMB与LPS和Lipid A具有高亲和力，其与二者的解离常数分别为18、9nmol／L和11．1nmol／L，对LPS具有显著的中和作用，并在蛋白和核酸水平均显著抑制LPS诱导PMФ的TNF-α、IL-6和TLR4的释放和表达。结论 PMB可能通过抑制巨噬细胞活化实现对脓毒症小鼠的保护作用，其机制可能与PMB与Lipid A结合后中和LPS的活性有关。     

地骨皮提取物CL-5拮抗内毒素的实验研究

目的 观察地骨皮提取物(CL-5)对内毒素(LPS)的体内外拮抗活性.方法 应用生物传感器技术检测CL-5与LPS的活性中心类脂A(Lipid A)的结合活性,ELISA法检测不同浓度CL-5(50、100、200mg/L)对LPS(100μg/L)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,进一步观察不同剂量(30、60、90mg/kg)的CL-5对致死剂量热灭活大肠杆菌(E.coil)攻击小鼠的72小时存活率.结果 10～640mg/L的CL-5,特异性结合值(RU)为36.5～481.2arc/s,随CL-5浓度递增而升高;单纯LPS刺激RAW264.7细胞(对照组)释放的TNF-α为(2479.03±61.43)ng/L,给予50、100、200mg/L CL-5预处理后TNF-α浓度依次为(2 210.29±70.95)、(1 998.27±111.24)、(1 423.28±86.35)ng/L,随CL-5剂量递增而减少,均显著低于对照组(P<0.05);以1.30×1011CFU/kg热灭活E.coil攻击小鼠(对照组)72小时动物死亡率为100%,而以30、60、90mg/kg CL-5处理后,小鼠72小时存活率分别为50%、60%和80%,随CL-5注射剂量的增加而升高,均显著高于对照组(P<0.05).结论 CL-5与Lipid A有一定的结合活性,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化,并对致死剂量热灭活E.coil攻击的小鼠具有保护作用.     

脓毒症大鼠肝组织内IL-6/信号转导和转录激活因子3的表达变化及可能作用

目的研究IL-6／信号转导和转录激活因子3（STA33）信号通路在脓毒症大鼠肝组织中的活化规律及其与肝损害的关系。方法盲肠结扎穿孔（CLP）法制作脓毒症大鼠模型，66只大鼠随机分为正常对照组、CLP组和假手术组，分别于术后2，6，12，24，48h处死，采用实时荧光定量多聚酶链式反应（real-time PCR）和ELISA法分别检测肝组织中IL-6基因与蛋白表达，免疫组织化学法检测肝组织磷酸化STA33（P-STA33）的表达，同时测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平，光镜观察肝组织形态学变化。结果CLP组大鼠肝组织IL-6与P-STA33表达术后2h开始升高，12h达峰值，血清ALT和AST在术后24h达高峰，肝组织12h后出现炎症改变，P-STAT3表达与IL-6、肝功能变化均呈正相关（P〈0．05）。假手术组大鼠各项指标与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-6／STA33信号通路可能在诱导脓毒症动物肝脏急性损伤中具有重要作用。     

地塞米松、TRH及EGF对胎兔组织器官重量及体重的影响

目的了解产前使用地塞米松、TRH和EGF对胎儿体重及各器官重量的影响.方法于兔妊娠第24天开始分别静脉给予孕兔地塞米松、TRH和EGF处理,连续3d,妊娠第27天取出胎儿,称量胎儿体重及胎肺、胎肝、胎肠及胎盘的湿重.结果各组间胎儿平均体重无明显差异,但地塞米松处理组每次妊娠胎儿的总体重低于其他2个处理组和对照组,其中与EGF处理组的差异有显著意义;同时地塞米松处理组每次妊娠胎盘的总重量也有低于其他各组的倾向,而胎儿总体重及胎盘总体重在EGF处理组、TRH处理和对照组间无明显差异;此外,各组胎儿肺、肝、肠等器官的平均体重和总体重在各组间均无显著不同.结论产前应用地塞米松可能降低胎儿体重和胎盘重量,而EGF则可能促进胎儿体重增加,但二者对胎儿器官重量的影响不明显,TRH与胎儿体重和各器官重量无明显关系.     

心导管留置术在脓毒症大鼠肝组织损伤中的应用

目的观察心导管留置术后脓毒症模型大鼠的肝组织损伤,为脓毒症模型的改进提供实验依据。方法采用改良的心导管留置术结合盲肠结扎穿孔术（CLP）制作脓毒症大鼠模型,分别于术前和术后2、6、122、4、48 h采血,动态浊度法鲎试验检测血浆内毒素（LPS）水平,ELISA法检测血浆TNF-α和IL-6的蛋白表达,同时测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平,光镜下观察48h肝组织形态学变化。结果术后大鼠的血浆LPS和细胞因子水平在6 h逐渐升高,12 h达到高峰,此后逐渐下降,