创伤患者外周血单核细胞自噬变化的研究

目的 研究创伤患者外周血单核细胞的自噬变化.方法 ①根据损伤严重度评分(injury severity score,ISS)或简明损伤定级标准(abbreviated injury scale,AIS)将创伤患者分为轻度创伤组、中度创伤组、严重创伤组,同时设立健康对照组,分别于创伤后24 h,3、5、10 d采集外周血,采用密度梯度离心结合贴壁分离法分离创伤患者外周血单核细胞,应用激光共聚焦显微镜和透射电镜观察细胞自噬现象.②将分离得到的单核细胞进行MDC染色并裂解,应用荧光分光光度计(激发光波长380 nm、发射光波长525 nm)测定荧光强度进行定量分析.③于创伤后24 h、3、5 d检测患者血糖水平,分析创伤后自噬与血糖的相关性.结果 与健康对照组相比,创伤患者外周血单核细胞自噬水平明显升高(P＜0.01),创伤后外周血单核细胞自噬水平与创伤程度成正比,与创伤后血糖呈正相关(轻度创伤组:r=0.962,中度创伤组:r=0.928,重度创伤组:r=0.973,P＜0.05).结论 创伤后通过调节单核细胞自噬水平,使机体免疫功能得到恢复,从而改善预后.     

青蒿素对脓毒症大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响

目的：观察青蒿素对脓毒症大鼠肝脏脂质过氧化损伤的影响.方法：采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture,CLP）制作大鼠脓毒症模型,观察青蒿素治疗对CLP大鼠术后2、6、12、24、48、72 h 大鼠血清内毒素（lipopolysaccharide, LPS）含量以及肝组织中超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase, SOD）、丙二醛 （malondialdehyde, MDA）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响.结果：青蒿素治疗降低大鼠CLP术后血清LPS以及肝组织中MDA、TNF-α和IL-6的峰值,维持SOD接近正常水平.结论：青蒿素可减轻CLP大鼠肝脏的脂质过氧化损伤,减少脓毒症大鼠肝脏的炎症反应损害.     

阳离子多肽MP-1对脓毒症模型小鼠的保护作用及机制

目的：观察阳离子多肽MP-1的体内外抗内毒素(LPS)活性并探讨其对脓毒症小鼠的保护机制。方法：采用LPS(20mg／kg)静脉注射攻击小鼠，观察静脉注射MP-1(3mg／kg)对小鼠的保护作用；应用生物传感器检测MP-1与LPS结合的亲合力，通过动态比浊法鲎试验定量检测MP-1对LPS的中和作用，并用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察MP-1对LPS(100ng/ml)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞(PMψ)TLR4、     

HIV Tat49-57增强人乳头瘤病毒16E7细胞毒性T细胞表位穿膜效应研究

目的 探讨有穿膜序列HIV Tat_49-57的人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位融合肽的跨膜能力及其影响因素。方法 在HPV16E7 HLA-A2⁺/H-2k^b+限制性CTL表位E7_49-57的N末端连接穿膜肽HIV Tat_49-57序列,应用固相技术合成此融合肽,用间接免疫荧光与激光共聚焦显微技术,研究其穿膜能力,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其体外诱导特异性CTL杀伤效应。结果 穿膜序列HIV Tat_49-57可以有效促进HPV16E7_49-57表位肽进入BHK细胞胞浆,并呈时间、剂量依赖关系(P<0.05);与原表位肽相比,该融合肽有显著地激发特异性CTL活性的能力。结论 在原CTL表位基础上引入穿膜序列,可以使其更快速、更有效地进入活细胞胞浆,为HPV16肽疫苗的设计提供一种新的思路。     

男性肺癌患者癌组织中雌激素受体的表达与外周血性激素水平的关系

目的　探讨男性肺癌患者癌组织中雌激素受体的表达与外周血性激素水平的关系。方法　采用磁性微粒分离的免疫酶联分析测定方法检测 2 5例男性肺癌患者和 30例正常男性外周血血清中雌二醇(estradiol,E2 )、睾酮 (testosterone ,T)、卵泡刺激素 (folliclestimulatinghormone ,FSH )和黄体生成素 (lutenisinghormone ,LH )水平 ,同时应用免疫组织化学S P法检测 2 5例肺癌组织、癌旁组织及 11例肺良性病变中雌激素受体的表达。结果　 2 5例男性肺癌患者外周血血清中E2 水平较正常男性明显增高 (P <0 .0 1) ,T明显下降 (P <0 .0 1) ,E2 /T明显增高 (P <0 .0 1) ;2 5例肺癌组织中雌激素受体蛋白表达阳性率为 6 0 .0 % ( 15 / 2 5 ) ,阳性表达主要定位于细胞核内 ,而癌旁组织和肺良性病变组织中未见阳性表达 ;男性肺癌患者术前外周血雌激素水平与手术切除的肺癌组织雌激素受体表达水平呈显著正相关 (r =0 .916 7,P <0 .0 0 1)。结论　男性肺癌患者存在性激素水平的失衡和紊乱 ,且与雌激素受体表达密切相关 ;外周血雌激素升高可能具有上调雌激素受体表达的作用     

牡丹皮抗内毒素活性研究

目的对传统中药牡丹皮(Paeonia suffruticosa Andr,PSA)抗内毒素(LPS)活性组分进行定向分离及体内外活性评价。方法利用生物传感器、硅胶柱层析、聚酰胺层析、离子交换-HPLC等技术对牡丹皮进行活性组分的定向分离。通过活性组分对LPS介导RAW264.7分泌细胞因子的抑制实验、对LPS和热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护实验,评价所得活性组分对内毒素的拮抗作用。结果从牡丹皮水提取物中分离到一个与Lipid A具有较高结合活性的组分(PSA-3),PSA-3在体外能抑制LPS介导的RAW264.7细胞释放TNF-α(P45μg<0.05,P90、180μg<0.01),对致死剂量LPS攻击小鼠的保护率为50%(P<0.01),对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护率为50%(P<0.05),而低结合活性PSA-1组分则不具有抑制作用,对LPS和热灭活大肠杆菌(HK-E.coli)攻击小鼠也无保护效果。结论从牡丹皮中分离到一个与Lipid A具有较高结合活性的组分,该组分在体内外对LPS均具有一定的拮抗作用。     

“三好一满意”与医患信任伦理的重构

"三好一满意"内含丰富的伦理意蕴,它是医学伦理实践精神的一种彰显;是对当前医学伦理困境的一种纾解;是提升医学伦理境界的一种方式。"三好一满意"分别从形上层面、制度层面、文化层面对医患信任伦理进行了积极构筑。它呈现了解决当前医疗问题的诸种可能性视域和可行性路径:深入医疗生活本源,是医德建设、医疗问题解决的逻辑起点;制度的不断创新、完善是医德建设、医疗问题解决的坚实保障;坚守、培植医学人道、人文精神是医德建设、医疗问题解决的核心及灵魂。     

黄芩抗内毒素活性物质的分离提取与活性研究

目的 从黄芩中提取具有拮抗内毒素(LPS)活性的物质.方法 采用大孔吸附树脂和高效液相色谱(HPLC)等技术将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心Lipid A的结合活性,动态比浊法鲎试验检测各组分(2.0 mg/L)对LPS(02 μg/L)的中和作用,籍此筛选出活性组分;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测所筛组分对LPS诱导的RAW264.7细胞的Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响,ELISA法检测所筛组分对LPS(100 μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子的影响.结果 获得5种HPLC产物S3K1～5,其中S3K1与Lipid A结合活性最高,S3K1(2.0 mg/L)可显著抑制LPS(0.2 μg/L)介导的鲎试剂的凝结反应(P<0.05);以LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7细胞,其TLR4 mRNA表达增强,给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后能减弱LPS诱导RAW264.7细胞的TLR4 mRNA表达(P<0.05);单纯LPS刺激RAW264.7细胞释放的TNF-α为(1 757.61±207.25)ng/L(对照组),给予40、80、160 mg/L的S3K1预处理后TNF-α浓度依次为(1324.53±149.73)、(893.87±140.77)、(799.97±124.21) ng/L,随S3K1剂量递增而减低,均显著低于对照组(P<0.05).结论 从黄芩中提取到具有拮抗LPS活性的组分S3K1,S3K1在体外对LPS具有一定的中和作用,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的,TLR4 mRNA表达,进而抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化.     

兔胎肺Ⅱ型细胞发育与表面活性物质蛋白基因表达的关系及其调节

目的　探讨兔胎肺Ⅱ细胞发育程度与表面活性物质蛋白 (surfactantproteins ,SPs)mRNA表达的关系以及地塞米松 (Dex)、TRH、EGF等药物对其的调节作用。方法　在孕兔妊娠 2 2～ 2 4d或 2 4～ 2 6d静脉分别给予生理盐水 (对照 )、Dex、EGF、TRH处理 ,于妊娠 2 5d及 2 7d取胎肺 ,通过电镜观察兔胎肺Ⅱ型细胞发育程度 ,采用RT PCR和Southernblot检测胎肺SP A、SP B及SP C的mRNA水平。结果　在妊娠 2 7d ,Dex、EGF及TRH处理组胎肺Ⅱ细胞比对照组更成熟 ,板层体数量明显多于对照组 ,糖原含量比对照组少 ,同时 ,各处理组 2 7d胎肺SP BmRNA水平显著高于对照组 ,但SP A和SP C的mRNA水平在各组间无明显差异。在妊娠 2 5d ,除Dex组胎肺的个别Ⅱ细胞内可见少量未成熟板层体外 ,对照组和其余处理组胎肺Ⅱ细胞内均未见板层体 ,相反 ,所有胎肺均可见大量糖原颗粒。此外 ,2 5d胎肺的SP BmRNA在对照组、EGF和TRH处理组均无明显表达 ,仅Dex处理组的部分胎肺可见低水平表达 ,而SP A和SP CmRNA在各组胎肺均有较高水平表达。结论　SP A、SP B和SP CmRNA在兔胎肺表达的时间并不一致 ,胎肺SP A和SP CmRNA的表达和升高早于SP BmRNA ,其水平在妊娠后期的一定时间内相对稳定。SP BmRNA的检出晚于SP A和SP CmRNA ,其在胎肺的表达和升