DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

应用飞行时间质谱技术结合蛋白芯片筛选鼻咽低分化鳞癌患者血清肿瘤标志物的研究

目的探讨筛选鼻咽低分化鳞癌血清肿瘤标志物的临床应用价值。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)及CM10型弱阳离子交换芯片对61例初治的鼻咽低分化鳞癌患者和72名健康人血清标本进行蛋白质指纹图谱测定,其中80例用于建模(40例鼻咽癌,40名健康人),53例用于盲法检测(21例鼻咽癌,32名健康人),用Biomarker Wizard3.01及Biomarker Pattern5.01分析软件对测得的数据进行处理及建立诊断模型。结果用建立的区分鼻咽低分化鳞癌与健康人的血清蛋白指纹图诊断模型进行盲法检测的准确性、敏感性和特异性分别为86.8%、81.0%和90.6%。其中Ⅰ、Ⅱ期鼻咽低分化鳞癌检出的准确性为73.7%,Ⅲ、Ⅳ期鼻咽低分化鳞癌检出的准确性为81.0%。结论用SELDI-TOF-MS技术与生物信息分析法筛选的血清肿瘤标志物对鼻咽低分化鳞癌的定性诊断提供了一条新途径。     

鼻咽癌常规分割与后程加速超分割放疗远期结果分析

目的 对比分析常规分割（CF）与后程加速超分割（LCAHF）放疗鼻咽癌的远期疗效，以探索更好的鼻咽癌放疗方案。方法 回顾性分析符合人组条件的鼻咽癌患者496例，其中cF组269例，LCAHF组227例。两组均采用双侧面颈联合野对穿照射，200cGy／次，5次／周，鼻咽部剂量达36～40Gy后改为双侧耳前野或小面颈野对穿避开脊髓继续照射；CF组继续用原分割方案照射至鼻咽部总剂量68—76Gy，LCAHF组改用150cGy／次，2次／d，两次间隔至少6h，总剂量达69～72Gv。采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果 LCAHF组及cF组5年鼻咽原发灶控制率、无瘤生存率、总生存率分别为65．4％、61．5％、68．1％和52．8％、49．4％、57．5％（P=0．006、0．006、0．031），而鼻咽部复发率明显低于cF组（P〈0．05）。进一步按T分期进行分析显示LCAHF主要提高了1、2、13期患者5年鼻咽原发灶控制率、无瘤生存率及总生存率（P〈0．05）。两组急性毒副反应及放射后遗症相似（P〉0．05）。颈部淋巴结复发率及远处转移率两组相似（P〉0．05）结论 与常规分割放疗相比，后程加速超分割放疗提高了鼻咽癌局部控制率、无瘤生存率及总生存率，降低了鼻咽部复发率，并能被鼻咽癌患者耐受，但未减少颈部淋巴结复发率及远处转移率。     

细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的:了解不同增殖状态鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期基因表达差异,探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理.方法:对不同增殖状态的CNE-2细胞,采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异.结果:细胞增殖活性最高时相(2Gy连续照射第3天)与最低时相(2Gy连续照射第5天)表达有差异的基因有3条,为检测基因总数的3%(3/100),其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5,下调基因为CDKNlA.应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因(CCNE1、CDKNIA))进行了mRNA水平的验证,结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性.结论:某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程,有必要对这些基因功能作进一步研究,以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制.     

细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的：了解不同增殖状态鼻咽癌细胞（CNE-2）细胞周期基因表达差异，探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理。方法：对不同增殖状态的CNE-2细胞，采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异。结果：细胞增殖活性最高时相（2Gy连续照射第3天）与最低时相（2Gy连续照射第5天）表达有差异的基因有3条，为检测基因总数的3％（3／100），其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5，下调基因为CDKN1A。应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因（CCNE1、CDKN1A））进行了mRNA水平的验证，结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性。结论：某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程，有必要对这些基因功能作进一步研究，以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制。     

鼻咽癌后程加速超分割放射治疗的循征医学研究

目的 对发表文献进行Meta分析以评价后程加速超分割放射治疗鼻咽癌的疗效和临床价值.方法 检索Medline(1985年1月至2005年12日)、Coehrane图书馆数据库(1985年1月至2005年12月)和中国生物医学文献数据库(1985年1月至2005年12月),按照纳入标准(鼻咽癌后程加速超分割放射治疗随机试验)确定文献,评价其方法学上的质量,提取有效数据.采用Egger'stest法对纳入研究的1,3年生存率及1,3年鼻咽局部控制率资料进行发表性偏倚分析,各个研究结果的异质性检验采用x2检验,并用Stata9.0统计软件包进行统计分析.结果 4个随机对照试验、488例鼻咽癌患者纳入研究,其中接受后程加速超分割放射治疗者241例,接受常规分割放射治疗者247例.1年局控率资料分析发现发表性偏倚(P=0.03),而1,3年生存率及3年鼻咽局控率资料没有发表性偏倚(P＞0.05).Meta分析显示,四个随机研究的1,3年生存率及1,3年鼻咽局部控制率结果同质性较好(P＞0.05),后程加速超分割放射治疗组与常规分割放射治疗组患者的1,3年生存率及1,3年鼻咽局部控制率的差异均有显著性,合并OR值及其95%可信区间(95%CI)分别为3.113(1.232～7.867)、1.913(1.195～3.063)和5.434(1.560～18.935)、4.308(2.210～8.396).结论 与常规分割放射治疗相比,后程加速超分割放射治疗能提高鼻咽癌患者的1,3年生存率及1,3年鼻咽局部控制率.     

干扰CDC25A基因对CNE2细胞连续照射期间增殖的影响

目的 采用RNA干扰技术沉默CDC25A基因，观察其对鼻咽低分化鳞癌细胞株（CNE-2）在连续照射中后期加速增殖现象的影响。方法构建、培养出CDC25A基因沉默效果稳定的CNE2-psilence4．1-CDC25A，接受射线2Gy／d连续照射5d，分别采用MTT法、流式细胞术检测细胞的生长增殖活性，并在mRNA及蛋白水平上应用RT—PCR、WesternBlot法进行验证。结果MTT法检测结果表明，CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞存活分数（SF）在第5天达到高峰，CNE2-psilencc4．1-Control细胞SF在第3天达到高峰。流式细胞术检测结果显示，CNE2-psilenee-4．1-CDC25A细胞在照射第5天S期细胞比（SPF）及增殖指数（PI）为最高值，CNE2-psilence4．1-Control细胞在照射第3天SPF值最高，在照射第4天PI值最高；RT-PCR、WesternBlot法进一步验证CNE2-psilence4．1-CDC25A细胞在照射第1、3、5天的CDC25A的表达与MTT法、流式细胞术检测结果基本吻合。结论与CNE2-psilencer4．1-Comrol细胞相比，基因沉默的CNE2-psileneer4．1-CDC25A细胞在连续分割照射期间，细胞的生长速度减慢、生长高峰延迟。     

雌激素受体基因多态性与鼻咽癌发生的相关性研究

目的 探讨广西南宁鼻咽癌患者雌激素受体基因(ESR1)单核苷酸多态性(SNP)与鼻咽癌发生的关系.方法 以100例鼻咽癌患者,100例正常人群为研究对象.选取ESR1基因SNPrs9322354位点作为遗传标记,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态( PCR-RFLP)和测序方法检测ESR1基因多态性及其基因突变分布频率.结果 鼻咽癌组ESRI rs9322354突变率为30.0％(30/100),正常人群ESR1 rs9322354突变率为9.0％(9/100).rs9322354位点等住基因及基因型频率在鼻咽癌人群与正常对照组之间分布差异有显著性(P＜0.05).结论 ESR1基因SNP rs9322354位点多态性与鼻咽癌存在显著的相关性.     

国内外头颈部鳞癌指南循证评价(鼻咽癌除外)

目的 了解国内外头颈部鳞癌指南的发布状况、评价其质量,为我国制定头颈部鳞癌指南提供借鉴。方法 计算机检索PubMed、Embase、NGC(U.S. National Guideline Clearing-house), CMAInfobase(the Canadian Medical Association Infobase), GIN(the Guidelines International Network), SIGN(theScottish Intercollegiate Guidelines Network), the CMAdisc等中英文数据库和指南网站,按既定的纳入与排除标准,筛选文献,纳入符合标准的指南,用指南评价工具AGREE( Appraisal of Guideline forREsearch and Evaluation) Ⅱ对其进行质量评价。结果 共检索出514篇相关文献,最终纳入49篇头颈部鳞癌指南,共覆盖15个国家、地区。现有指南主要由美国、加拿大、英国发布。49篇指南6个领域的得分分别为：71.63%、43.37%、45.63%、68.08%、32.41%、42.55%。结论 国内外头颈部鳞癌指南的质量中等,国内可借鉴AGREE的评价体系结合国内实际制定高水平的临床指南。     

上行型与下行型鼻咽癌患者血清蛋白指纹图谱的检测及意义

目的:通过分析上行型与下行型鼻咽癌的血清蛋白质谱,筛选鼻咽癌蛋白质标志物,为预测鼻咽癌临床分型提供可能的简易方法.方法:应用CM10弱阳离子交换芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)分析22例上行型鼻咽癌和26例下行型鼻咽癌患者的血清标本,采用Biomarker Wizard 3.01及Biomarker Pattern 5.01分析软件对测得的数据进行处理并建立相应的检测模型.结果:通过对上行型、下行型鼻咽癌患者血清蛋白指纹图谱数据的比较,筛选出差异蛋白质峰9个(P＜0.05),相对分子量分别为2 776.27 Da,3 940.04 Da,6 440.51 Da和9 138.54 Da的4个蛋白质峰被选择用于构建分类决策树模型,该模型交叉验证总准确率为81.3%,上行型鼻咽癌患者检出率为77.3%,下行型鼻咽癌患者检出率为84.6%.分别对这4个蛋白质峰进行数据库搜索,得到4种与分子量最为接近的蛋白质.结论:应用SELDI-TOF-MS技术构建的分类决策树模型能达到区分上下型鼻咽癌患者的效果,这可能对鼻咽癌的分子分型、制定个体化治疗方案及预后预测方面有一定的临床意义,可进一步深入研究.