氧自由基增强脂肪细胞IL-6表达的实验研究

目的:研究脂肪细胞中氧自由基(ROS)对白细胞介素-6(IL-6)表达的调节,并探讨其机制。方法:培养3T3-L1细胞,并诱导其分化成为脂肪细胞,以MTT比色法检测细胞的活性。分别以定量PCR、多重免疫分析及夹心ELISA法检测PAI-1的mRNA和蛋白表达的水平。采用抑制剂干预的方法,寻找影响IL-6表达的信号分子。结果:作为一种重要的ROS,H2O2可剂量依赖性的增加IL-6的产生。Akt、JAK/STAT及ERK1/2的活化可能参与到H2O2对于IL-6的调节过程中。结论:ROS可能通过磷酸化激活Akt、JAK/STAT及ERK1/2,上调脂肪细胞IL-6的表达,从而参与肥胖、心血管疾病以及肿瘤等病理生理过程。     

冠心病介入治疗并发症观察及处理

介入治疗近几年来在医学领域内迅速普及推广。选择性冠脉造影是判断冠脉病变范围和严重程度的最准确的方法 ,对于治疗严重的冠脉狭窄 ,心绞痛、预防心肌梗死也具有良好的效果。由于冠心病介入治疗的适应症进一步扩展 ,在一些规模较大的介入治疗中心 ,严重并发症发生率已低于2 %。1　资料与方法本文为我院 95 0例冠脉造影者 ,其中男 5 2 0例 ,女 43 0例 ,年龄 3 1～ 82岁。用于诊断性检查 3 0 0例 ,介入性检查 65 0例。患者主要表现为胸痛、胸闷、气短、憋气、全身无力 ,心电图出现冠脉供血不足 ,心肌缺血等征象 ,采用冠脉造影术后并发症 16…     

甲氰咪胍与其他药物相互作用产生的不良反应

<正> 自甲氰咪胍用于临床以来,在治疗胃溃疡、十二指肠溃疡、上消化道出血等方面都具有良好的临床效果。但关于甲氰咪胍与其他药物相互作用在临床上产生的不良反应,近年来国内外学术杂志都有许多报道。以下对该药与部分药物相互作用产生的不良反应作详细论述。一、与心得安的相互作用     

环丙沙星与其他药物的相互作用和配伍禁忌

<正> 环丙沙星(Ciprofloxacin)是喹诺酮类药物中疗效最强的一种,此药抗菌谱广,对耐药革兰氏阳性杆菌有很好的疗效。环丙沙星有抑制细胞色素P450氧化酶作用,对受此酶代谢影响的药物可能产生药物相互作用,环丙沙星也可受某些药物作用而影响治疗效果。     

MAGE-3基因真核表达载体构建及在小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的　扩增人黑色素瘤抗原 3(Melanomaantigen 3,MAGE 3)基因 ,构建真核表达载体 ,并在小鼠黑色素细胞瘤B16中进行表达。方法　采用PCR扩增MAGE 3基因 ,连接到真核表达载体pIRES2 EGFP中 ,构建真核表达载体pIRES2 EGFP MAGE 3,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞。G4 18筛选阳性克隆 ,荧光显微镜和RT PCR分别检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白 (Enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)的表达和MAGE 3mRNA的表达。结果　从pUC19 MAGE 3重组质粒中扩增获得一条约 95 0bp的片段 ,成功构建了真核表达载体pIRES2 EGFP MAGE 3,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆 ,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光 ,RT PCR检测到MAGE 3mRNA的表达。结论　成功构建了真核表达载体pIRES2 EGFP MAGE 3,获得了稳定表达该载体的小鼠黑色素瘤B16细胞系 ,为研究MAGE 3在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础。     

肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70融合基因的构建及原核表达

目的:构建及原核表达肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因.方法:采用加端PCR方法,将EPVTKAEML的基因序列融合到人HSP70基因的3′端;将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a( )中,构建重组质粒pET-28a( )/EPVTKAEML-HSP70.经限制性内切酶BamH I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE检测表达结果.结果:应用加端PCR方法扩增出约2.0 kb的目的片段,序列测定结果证实,EPVTKAEML的基因序列成功地融合到人HSP70基因的3′端.经BamH I、Xho I酶切鉴定证实,融合基因成功地克隆到原核表达载体pET-28a( )上;转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约72 000处有表达量明显增多的蛋白条带.结论:成功地构建并表达了肝癌抗原肽(EPVTKAEML)与人HSP70的融合基因.     

低压力预扩张高压力冠状动脉内支架置入106例临床分析

本研究选择性支架置入的冠心病患者 ,采用低压力球囊预扩张 ,高压力冠脉内支架释放的方法 ,取得了较好的效果 ,现报告如下 :一、资料与方法1 对象 :10 6例冠心病患者 ,男 91例 ,女 15例 ,年龄 2 7～76岁 ,平均 (5 6 1± 9 4)岁。其中不稳定性心绞痛 5 9例 ,稳定性心绞痛 3例 ,心肌梗死 44例。冠脉影像学 :单支病变 37例 (占 34 9% ) ,双支病变 35例 (占 33 0 % ) ,三支病变 33例(占 31 1% ) ,左主干病变 1例 (0 9% )。支架置入病变 12 7处 ,包括前降支病变 73处 ,右冠状动脉病变 33处 ,左回旋支病变 17处 ,左主干病变 1处 ,对角支病变 3…     

液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽

目的：寻找MHCI类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽。方法：人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸－磷酸盐（pH3.3)液洗脱,洗脱物经粗分离,得到相对分子质量（Mr)＜5000的各种多肽组分混合液;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞（T2,HLA－A2）进行细胞表位重建,加入特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL),^51Cr释放法测杀伤活性;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱－质谱（RP－HPLC－MS）检测,对活性峰手工读谱分析其一级结构;最后进行氨基酸同源性分析。结果：酸洗10^10hHCC细胞,样品蛋白质浓度2mg/ml;通过RP－HPLC－MS检测,其质谱图经手工解析,氨基酸序列为SXXVHXNEV,X＝1或L;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV,是肝细胞生长因子受体的第1075－1083肽段,第1080位点发生突变,由F变为L,由HLA－A2分子递呈。结论：细胞膜温和酸洗技术结合RP－HPLC－MS联用技术,是寻找肝癌抗原肽的有效方法,尚未见相同研究报道。发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物,可能具有重要生物学意义。     

一个新的MAGE—1表位为肝癌细胞表面HLA—B7分子递呈

目的：肿瘤抗原的存在是机体识别肿瘤并激活免疫系统的物质基础。机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,故寻找被T细胞识别的肝癌细胞抗原肽,为肝癌免疫治疗奠定基础。方法：对于肝癌细胞系HHCC（HLA-A2,A29,B7,B51）,应用细胞膜酸洗技术使抗原肽从细胞膜表面脱落,经过凝胶层析,反相高效液相色谱层板得到不同组份多肽,高效液相色谱=质谱仪联用技术获得抗原肽的一级结构。通过氨基酸锚定位点分析,预测其HLA配体类型;互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性用技术获得抗原肽的一级结构,通过氨基酸锚定位点分析,预测其HLA配体类型,互联网上氨基酸同源性分析确定其同源性序列;人工合成抗原肽,HLA同型树突状细胞递呈合成抗原肽刺激特异性CTL反应,^51Cr杀伤实验检测CTL对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果：经过反相高效液相色谱层析后可以获得10多个组份,其中一个组份经过液质联用鉴定和氨基酸同源性分别确定其序列为EPVTKAEML,是黑色素瘤抗原-1,MAGE-1（121-129）表位。由HLA-B7分子递呈,体外诱导实验表明其可以诱导出较强的CTL反应。结论：液质联用技术是寻找抗原肽的有效方法,MAGE-1抗原肽EPVTKAEML地于HLA-B7阳性及阳性的肝癌患者具有潜在的免疫治疗作用。