慢病毒载体介导RNAi靶向抑制胰腺癌细胞survivin表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨运用慢病毒载体介导的RNA干扰技术对survivin的抑制效率及对胰腺癌细胞SW1990凋亡的影响。方法应用pGCSIL-neo质粒构建3对针对survivin的慢病毒ShRNA载体,转染包装细胞293T,收集病毒上清转染胰腺癌细胞系SW1990,实时荧光定量PCR和western-blot免疫印迹检测癌细胞内survivin的表达;测定caspase3/7活性和DAPI染色检测细胞凋亡。结果成功构建3个survivin-ShRNA慢病毒载体,LV-shRNA-survivin-1对survivn的mRNA和蛋白表达抑制效率分别为73.50%和87.64%;与对照组相比,其caspase3/7活性升高14.5倍,细胞凋亡明显增加(11.95%)。结论慢病毒载体介导的Suvivin-ShRNA靶向转染可有效抑制survivin表达,并显著增加胰腺癌细胞的凋亡。     

抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)和Survivin表达对胰腺癌Panc-1细胞增殖及化疗敏感性的影响

目的：探讨同时抑制X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)和Survivin表达,对胰腺癌Panc-1细胞增殖及吉西他滨（Gem）化疗敏感性的影响,并与单独抑制XIAP或Survivin表达的策略进行对比。方法：运用前期实验构建的XIAP-shRNA慢病毒（LV-X）和Survivin-shRNA慢病毒（LV-S）,分别建立XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌Panc-1细胞株,即Panc-1-X、Panc-1-S和Panc-1-XS。运用Real-time PCR和半定量Western blot分别检测XIAP和Survivin的mRNA和蛋白的表达情况,以细胞计数法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,Caspase-3/7试剂盒及流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT法检测细胞对Gem的化疗敏感性。结果：成功建立了XIAP和/或Survivin表达稳定抑制的胰腺癌细胞株Panc-1。XIAP和Survivin同时稳定抑制后,Panc-1的增殖能力显著受到抑制,Panc-1-XS组的克隆形成率为10.12%±1.33%,显著低于对照组Panc-1-XncSnc组(96.61%±7.89%)和Panc-1组(100.28%±8.97%, P<0.05)。用0.5 mg/L Gem处理24 h后,Panc-1-XS组的Caspase-3/7相对活性明显升高至15.02±0.57,显著高于Panc-1组与Panc-1-XncSnc组（分别为8.87±0.19和9.05±0.23,P<0.05）;Panc-1-XS组的细胞凋亡率为24.09%±2.75%,显著高于对照组Panc-1-XncSnc及Panc-1组（分别为12.09%±1.97%和12.06%±1.22%,P<0.05）。Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04) mg/L,显著低于对照组Panc-1-XncSnc的(2.18±0.13) mg/L及Panc-1组的(2.13±0.18) mg/L (P<0.05),对Gem的化疗敏感性显著增强。进一步检测显示,Panc-1-XS组的IC50值为(0.47±0.04) mg/L,均显著低于Panc-1-X组的(0.76±0.07) mg/L和Panc-1-S组的(0.87±0.09) mg/L (P<0.05)。结论：同时稳定抑制胰腺癌细胞株Panc-1中XIAP和Survivin的表达,能显著抑制Panc-1细胞增殖能力,增强其Gem化疗敏感性,并明显优于XIAP或Survivin表达单独抑制的策略。     

大鼠结核性胸膜炎模型和胸腔炎症免疫反应的研究

目的　探讨建立大鼠结核性胸膜炎模型的方法以及观察胸腔局部炎症免疫反应。方法　用标准人型结核分枝杆菌菌株H37Rv003mg注入50只Wistar大鼠胸腔内,并在注入后第1、2、3、5、7、10、15、20、30、60天分批处死实验动物。解剖胸腔,记录胸腔积液量,观察胸腔、胸膜和肺组织大体及镜下病理变化。检测胸腔积液中白细胞数及分类、总蛋白质(TP)、葡萄糖(GLU)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,测定可溶性细胞间黏附分子1(sICAM1)、转移生长因子β1(TGFβ1)和γ干扰素(IFNγ)的水平。另对10只大鼠胸腔内注入2ml生理盐水,10只注入2ml蛋白纯化衍生物(PPD)原液作为对照。结果　大鼠胸腔内注入结核分枝杆菌后15d内均有双侧胸腔积液,胸腔积液量于第5天最多(67±05)ml。胸腔积液白细胞数第1天最高(103×109/L),随时间而下降,第15天为34×109/L。细胞分类第1天中性粒细胞占优势(66%),以后淋巴细胞明显增多,第15天淋巴细胞占92%。TP为51~55g/L。葡萄糖从第1天的52mmol/L逐渐降低至第15天的28mmol/L。LDH在第1天为181μmol·s-1·L-1,此后随时间持续升高,第15天为289μmol·s-1·L-1。胸腔积液的生化指标符合结核性胸腔积液的特征。sICAM1水平早期升高,第7天后下降并低于第1天的水平。IFNγ水平第1天为412pg/ml,以后持续升高并维持     

无创机械通气联合主动脉内球囊反搏对心源性肺水肿的疗效

[目的]研究和分析无创机械通气联合主动脉内球囊反搏(IABP)对心源性肺水肿的治疗效果.[方法]收集心源性肺水肿患者共74例,对其使用无创机械通气联合IABP治疗,观察和对比患者在治疗前和治疗后的各项指标变化.[结果]74例患者中有66例完成治疗,占89.20%,经治疗2~10 h后患者呼吸频率、心率较治疗前明显减慢,尿量增加,脉搏血氧饱和度(SpO2)明显增加,平均动脉压上升,B型脑钠肽(BNP)水平下降,且差异均有显著性(P<0.01).[结论]无创机械通气联合IABP治疗,可以明显增加心源性肺水肿患者的氧合,改善心功能.     

腹盆部孤立性纤维瘤的CT诊断与鉴别诊断

目的：分析腹盆部孤立性纤维瘤(solitary fi brosis tumor,SFT)的CT表现,提高诊断正确率。方法：分析2011 年1月至2015年12月湘雅医院经病理证实的14例SFT的CT特征,并将10例腹盆部脏器外SFT与同时期10例腹盆部脏器 外平滑肌肉瘤、28例神经鞘瘤及18例胃肠外间质瘤(extragastrointestinal stromal tumors,EGIST)的影像表现进行对比分 析。结果：腹盆部SFT大多呈“地图样”不均匀渐进性强化,易液化坏死,瘤周常见迂曲血管。SFT分别与EGIST、 神经鞘瘤对比,其平扫CT值、动脉期强化程度差异有统计学意义(P<0.05);SFT分别与EGIST、平滑肌肉瘤对比, 瘤周血管影出现率差异均有统计学意义(P<0.008)。SFT与平滑肌肉瘤液化坏死率分类差异有统计学意义(P<0.008)。 结论：腹盆部SFT的CT表现有一定特征,平扫CT值及动脉期强化程度、坏死液化率、瘤周迂曲血管出现率对其与平 滑肌肉瘤、神经鞘瘤及EGIST的鉴别诊断有一定价值。     

LI-RADS分级标准对原发性肝癌诊断价值的初步探讨

目的 初步探讨LI-RADS分级标准对原发性肝癌的诊断价值.方法 搜集2014年5月至2014年10月期间术后病理证实的68例原发性肝癌患者的影像学资料(其中CT 38例,MRI30例),由3名影像学副教授在不知道病变的病理结果的情况下对图像资料进行评阅,按LI-RADS分级标准和非LI-RADS分级标准分为两组,分别给出诊断结果,比较两组诊断原发性肝癌的正确率并采用卡方检验.结果 当LR4、LR5类为阳性时,CT组LI-RADS和非LI-RADS方法诊断HCC的诊断正确率分别为73.7％(28/38)、55.3％(21/38);两者之间差异有统计学意义,前者高于后者(x2 =38,P＜O.05).MRI组LI-RADS组和非LI-RADS方法诊断HCC的诊断正确率分别为86.7％(26/30)、70.0％(21/30);两者之间差异无明显统计学意义(x2=30,P＞0.05).如果将LR3类也视为阳性,则LI-RADS方法诊断HCC的正确率更高,CT组达到94.7％(36/38),MRI组达到96.7％(29/30),且无论CT组或MRI组LI-RADS方法诊断HCC的正确率均高于非LI-RADS方法,两者之间差异有统计学意义(CT组x2=38,P ＜0.05;MRI组x2=30,P＜0.05).LI-RADS和非H-RADS两种方法评阅过程中出现意见不一致的概率分别为7.3％ (5/68)、22.0％(15/68),采用LI-RADS方法诊断原发性HCC,不同医生之间意见不一致的情况明显减少,两者之间差异有统计学意义(x2 =5.862,P＜O.05).结论 采用LI-RADS分级诊断标准诊断原发性肝癌可以提高正确率,并且具有较高的诊断一致性,对原发性肝癌的早期影像学诊断具有一定的价值.     

低T3综合征对风心病二尖瓣置换术后心功能的影响分析

目的探讨低T3综合征对风心病二尖瓣置换术后心功能的影响,为临床制定治疗策略提供参考.方法选取142例风心病接受二尖瓣置换术患者,按术后是否发生低T3综合征分为观察组和对照组,发生低T3综合征者为观察组共88例,余为对照组共54例.术后2h测量其血清T3,比较两组患者的心功能状态,术后再次分别于12h、24h和48h采肘静脉血测定T3,比较两组患者心功能改善情况.结果术后发生低T3综合征的患者占61.97%(88/142),其中心功能异常者占88.6%,而未发生低T3综合征患者中心功能异常者占33.3%,且前者的心功能评级较高,表明低T3综合征患者的心功能状态显著比未发生低T3综合征者要差,且病情更严重,两组比较差异显著(P<0.05).随着患者血清T3水平的升高,患者的心功能逐渐改善.结论低T3综合征是风心病二尖瓣置换术后的不利因素,血清T3水平可反映患者的病情严重程度,与心功能密切相关,纠正低T3,可改善预后.     

吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin基因表达的研究

目的:探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞PANC-1中survivin表达与化疗耐药的关系。方法:胰腺癌细胞株PANC-1用1640液培养，吉西他滨的浓度为1 μg /mL及10 μg/mL，运用RT-PCR和Western blot检测survivin的表达。分析细胞中survivin的表达水平与化疗耐药的关系。结果:用1 μg/mL及10 μg/mL浓度的吉西他滨作用胰腺癌细胞株24 h和48 h，survivin mRNA水平分别上升了(1.34±0.12) 倍,(2.40±0.17)倍和(3.33±0.20)倍,(4.41±0.18)倍;蛋白水平上升了(1.20±0.07)倍,(1.48±0.19)倍和(2.90±0.04)倍,(4.50±0.20)倍，差异有显著性意义(P＜0.05)。结论:胰腺癌细胞株的化疗耐药可能通过吉西他滨的作用上调survivin的表达而增强。     

脂质体携载SOD对实验性脑缺血再灌注损伤的保护作用

以脂质体包裹超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）防治实验性脑缺血再灌注损伤。结果表明大鼠脑缺血再灌后出现了严重的组织损伤。ＳＯＤ，ＳＯＤ加脂质体，ＳＯＤ包裹脂质体对脑缺血再灌注损伤有不同程度的保护作用，其中尤以脂质体包裹ＳＯＤ组效果最佳。与前二者相比，能显著降低脑组织中Ｃａ￣（＋＋）、Ｎａ￣（＋＋）及丙二醛（ＭＤＡ）的含量，提高ＳＯＤ活性，减轻脑组织超微结构的损伤。     

浅谈医院固定资产的管理

本文基于本院实际情况，从建立健全管理机构，严格管理，指标考核，强化管理监督，努力提高人员素质以和及时反馈设备信息等方面探讨提高医院医疗设备固定资产水平的途径。