脂肪分化相关蛋白通过蛋白激酶C和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质

目的： 探讨脂肪分化相关蛋白促进THP-1巨噬细胞蓄积脂质的机制。方法： 使用高胆固醇饲料喂养新西兰兔12周，复制动脉粥样硬化动物模型。然后用Western blotting和免疫组织化学染色观察兔主动脉脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C的表达。THP-1巨噬细胞与氧化低密度脂蛋白孵育不同的时间，使细胞负荷胆固醇酯后，用RT-PCR的方法观察脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的表达，用PepTagassay琼脂糖凝胶电泳及分光光度法观察蛋白激酶C的活性。在负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中分别加入蛋白激酶C的激动剂佛波酯和抑制剂钙磷酸结合蛋白，观察脂肪分化相关蛋白的表达，同时使用油红O染色和高效液相色谱法测定细胞内脂质的变化。瞬时转染pcDNA3.1-HA-adi表达载体到THP-1巨噬细胞，复制高表达脂肪分化相关蛋白的细胞模型。在负荷、不负荷胆固醇酯或ACAT抑制剂存在的状态下，观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达及细胞内胆固醇酯的改变。结果： 与对照组相比，兔主动脉病变处脂肪分化相关蛋白及蛋白激酶C表达均显著增加。负荷胆固醇酯的THP-1巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达上调，蛋白激酶C的活性升高。荷脂细胞与蛋白激酶C激动剂共孵育后，可以协同增强上调脂肪分化相关蛋白的效应，细胞内脂质增多；如果荷脂细胞同时与蛋白激酶C抑制剂共孵育，可以有效抑制荷脂所致的脂肪分化相关蛋白高表达，细胞内脂质减少。高表达脂肪分化相关蛋白的THP-1巨噬细胞能够使酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达增加，促进细胞内胆固醇酯蓄积。加入酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶抑制剂后，这些作用被减弱。结论： 脂肪分化相关蛋白可能是通过蛋白激酶C活性的改变影响酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的活性，从而影响细胞内脂质的蓄积。     

L-精氨酸/一氧化氮抗动脉粥样硬化及其机理的研究

根据动脉粥样硬化(As)病变血管内稳态失衡发病机理,抗动脉粥样硬化干预措施应着力于使失衡的血管内稳态再度恢复平衡。一氧化氮(NO)对血管具有多种生物学效应,对As发生发展的各个环节均具有一定的干预作用。我们从不同环节研究了L-精氨酸(L-Arg,NO的前体)的抗As作     

动脉粥样硬化小型猪血浆C-反应蛋白水平的变化

目的:用贵州小香猪建立动脉粥样硬化动物模型,观察小型猪动脉粥样硬化发生发展与血浆C-反应蛋白水平的关系。方法:实验于2003-02/2004-03在南华大学心血管病研究所实验室进行。选择10只贵州小香猪单纯随机分为两组(n=5):①高脂高胆固醇组:喂饲高脂高胆固醇饲料2个月后麻醉状态下切开右侧颈总动脉放置6F动脉球囊导管,压力600～800kPa×180s,重复2次,然后在200～400kPa压力下从远端向近端拖拉球囊导管,并重复3次,术后饲以高脂高胆固醇饲料。②正常对照组:普通饲料喂养2个月后麻醉状态下分离右侧颈总动脉,但不进行血管内膜损伤。实验进行12个月,每2个月检测1次血浆总胆固醇、三酰甘油和高密度脂蛋白胆固醇水平和血浆C-反应蛋白水平,第12个月末处死动物取主动脉和冠状动脉,观察动脉粥样硬化斑块和脂质条纹发生情况。结果:10只小香猪全部进入结果分析。①高脂高胆固醇组小香猪血浆总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平从2个月末显著高于正常对照组(P<0.05),而血浆三酰甘油水平从4个月末开始升高,到6个月末才明显增加(P<0.05)。②高脂高胆固醇组小香猪血浆C-反应蛋白水平4个月末时即高于正常对照组(P<0.05),到6个月末明显高于正常对照组(P<0.05)。③在高脂高胆固醇组动物的主动脉、颈总动脉、髂动脉和冠状动脉可见动脉粥样硬化斑块和脂质条纹,该病变区占整个主动脉面积的(90.8±8.3)%;正常对照组未见斑块和脂质条纹。结论:采用血管内膜损伤法加高脂高胆固醇饲料喂养小型猪可建立动脉粥样硬化动物模型。动脉粥样硬化小型猪血浆C-反应蛋白水平升高,C-反应蛋白和动脉粥样化形成相关。     

Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达

目的 我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素.本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制.方法 通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞.将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达.当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Western blot检测各时间点细胞内ACAT1的表达.结果 高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少.无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性.与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达.低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1h后,ACAT1 mRNA开始下降;孵育8h后,ACAT1蛋白开始下降;孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性.高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达.结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,最终导致细胞内脂质积聚.     

诱发糖尿病饲料致新西兰兔动脉粥样硬化作用

用高脂高糖饲料喂养新西兰兔建立一种新的糖尿病并发动脉粥样硬化动物模型。将新西兰兔分为二组 :对照组 (n =7)喂普通饲料 ;实验组 (n =10 )喂含 10 %猪油、36 %白蔗糖混合饲料。共观察 2 4周 ,每 4周取禁食过夜空腹血测血糖、胰岛素、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯。结果发现 ,实验组动物发生高血糖和高甘油三酯血症 ,血糖浓度为 6 .36± 0 .92mmol L ,而对照组为 1.76± 0 .2 8mmol L ;实验组血甘油三酯浓度为 1.75± 0 .5 6mmol L ,而对照组为 0 .41± 0 .0 5mmol L ,两组相比 ,差异非常显著 (前者P <0 .0 1,后者P <0 .0 0 0 1)。实验结束时发现 ,实验组兔主动脉均有典型动脉粥样硬化早期病变 ,脂纹病灶面积占主动脉条展开面积的百分比为 8.5 8%±1.35 % ,而对照组仅有 0 .0 8%± 0 .0 6 % ,两组差异非常显著 (P <0 .0 0 1)。实验组动物脂纹病变主要分布于腹主动脉 ,类似于人类的动脉粥样硬化好发部位。此实验结果提示 :不含胆固醇的高脂高糖饮食可诱发高血糖、高甘油三酯血症 ,促发动脉粥样硬化 ,这是首例报告。     

过氧化体增殖物激活型受体与脂代谢和动脉粥样硬化

该受体名称来源于贝特类药物对啮齿类动物肝脏过氧化体增殖效应。1987年发现和鉴定了过氧化体增殖物结合蛋白。1990年Issemann和Green从小鼠肝脏克隆出过氧化体增殖物激活型受体(peroxisome proliferators-activated receptors，PPAR)。随后，不同实验室先后从人类等其他种属克隆出PPAR的同类物。PPAR的表达水平受各种刺激物的调节，如生理节律、饥饿、应激、寒冷等。此外，多种因子，如皮质固醇类、胰岛素、佛波酯、多种细胞因子等th．影响PPAR的表达。     

炎症生物标记物与心血管危险性的预测

目前认为炎症过程在动脉粥样硬化及其并发症的发病机理中起重要作用。多种临床研究发现，几种炎症标记物的血浆水平与未来的心血管危险性相关联。这些标记物包括细胞黏附分子、细胞因子和C-反应蛋白等。对于炎症标记物与血浆脂质水平的联合测定，比单独测定血脂水平能更好地进行危险分层。     

高密度脂蛋白相关1磷酸鞘氨醇对心血管的保护作用及其信号机制

<正>动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理学基础,大量的研究证明高密度脂蛋白(HDL)水平与动脉粥样硬化发生呈负相关,HDL-C已成为冠状动脉疾病的重要预测因素。HDL的组成中,蛋白质与脂质各占50%。1磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)是磷脂代谢的脂质介质,研究表明S1P既可以作为胞内第二信使,又可以作为细胞间信号分子,通过与细胞表面受体(S1P receptor,S1PR)结合而发挥     

对有毒作业危害程度分级的初步探讨

对有毒作业危害程度分级的初步探讨徐新云，易光辉１９８５年我国颁布了中华人民共和国国家标准──职业性接触毒物危害程度分级ＧＢ５０４４－８５（以下简称国标－８５）。该标准对于加强企业的劳动卫生管理，保护工人的身体健康起了积极的作用。但随着该标准的不断应用...     

2006-2007年成都市学生伤害监测分析

目的 了解成都市中小学(中专)学生伤害流行特征,为预防控制伤害提供科学依据.方法 在成都市分层随机抽取一个三甲医院和2个二级医院作为监测医院,将2006年1月1日至2007年12月31日期间,到监测医院就诊首诊为伤害的中小学(中专)学生患者作为监测对象,填写统一的调查表,分析伤害发生的原因、类型和特征.结果 调查伤害患者共计3753例,男女性别比为2.09:1,小学生最多(56.62%),其次为高中、中专生(23.79%)和初中生(19.58%).小学生伤害前3位原因为跌落、动物咬伤、交通事故,初中生为跌落、钝器伤、交通事故,高中生为跌落、交通事故、锐器伤.1年中伤害发生时间以7-9月较高,1天中以18:00-20:00点较高.伤害部位以头部较多,伤害动机以非故意为主,但也存在自残、自杀现象.结论 动物咬伤、交通事故已成为影响成都市学生安全与健康的重要问题,应根据本市学生伤害发生的特点,采取适当的干预措施,保护学生健康.